P4HA2通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞的增殖

目的:探讨P4HA2在食管鳞癌中的表达情况及作用机制。方法:利用基因表达综合数据库(GEO)的RNA表达谱数据及免疫组织化学染色和Western blot技术分析食管鳞癌组织及正常食管组织中P4HA2的mRNA和蛋白表达情况;通过细胞增殖实验、集落形成实验和裸鼠移植瘤实验,在体外和体内检测P4HA2对食管鳞癌细胞恶性表型的影响;利用Western blot检测P4HA2调控的下游通路及关键分子。结果:与正常食管组织相比,食管鳞癌组织中P4HA2的mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.01);体外和体内实验结果显示,与对照组相比,敲降P4HA2可显著抑制食管鳞癌细胞的增殖、集落形成以及裸鼠移植瘤的生长(P<0.01);分子水平检测表明,敲降P4HA2显著降低EGFR的蛋白水平,以及AKT和S6的磷酸化水平(P<0.05);在食管鳞癌细胞中敲降P4HA2后回复EGFR的表达,AKT和S6的磷酸化水平以及细胞增殖和集落形成表型均得以恢复(P<0.01)。结论:P4HA2在食管鳞癌组织中高表达,且P4HA2通过激活EGFR/AKT/S6信号通路促进食管鳞癌细胞的增殖和肿瘤生长。

调控miR-495、P4HA2的表达对肝纤维化和肝细胞癌发生机制研究

目的:探究调控miR-495、脯氨酰4-羟化酶亚基α-1(P4HA2)的表达对肝纤维化、肝细胞癌的发生机制。方法:体外构建P4HA2的3’UTR报告基因质粒,使用荧光素酶报告基因检测miR-495与P4HA2的调控关系。使用miR-495及其反义链处理HepG2肝细胞癌细胞检测P4HA2的表达。低氧条件下检测HepG2肝细胞癌细胞中miR-495和P4HA2的表达,以及细胞增殖反应。在28例肝细胞癌患者中检测miR-495和P4HA2的表达,分析其相关性。结果:萤光素酶报告基因检测显示miR-495显著抑制了HepG2细胞中pGL3-P4HA2-wt的荧光素酶活性,但不能抑制pGL3-P4HA2-mut的荧光素酶活性。miR-495的过表达能够在HepG2细胞中以剂量依赖性方式抑制P4HA2的mRNA和蛋白表达。低氧组HepG2细胞中miR-495的表达显著低于正常组,而P4HA2的表达显著高于正常组。增殖检测表明低氧组HepG2细胞中EdU阳性细胞数显著增加,而在低氧组细胞中过表达miR-495可以明显逆转HepG2细胞的增殖。肝细胞癌中miR-495与P4HA2的mRNA的水平呈负相关(r=-0.683,P<0.05)。结论:miR-495能够通过靶向P4HA2 mRNA的3’UTR来抑制肝细胞癌细胞的增殖,而低氧可以通过下调miR-495来促进P4HA2的表达,进而参与肝纤维化和肝细胞癌的发生发展。

土家族高度近视患者P4HA2基因突变筛查

目的探索P4HA2基因在土家族高度近视人群中的突变情况。方法收集2015年6月至2017年6月土家族双眼屈光度≥6.0 DS且眼轴长度≥26 mm的高度近视患者288例,对患者行眼科相关检查并采集外周静脉血5 ml,用酚氯仿法抽提患者外周血DNA。通过Sanger测序筛查P4HA2基因可能的致病突变。对于发现的可疑致病突变,均在同地区192例正常人群中进行验证,并通过生物信息学分析预测基因突变的致病性。结果本研究在288例土家族高度近视患者中共发现4个P4HA2基因突变,包括1个错义突变(c.145C>A)、2个内含子突变(c.1306-62C>T、c.82+22C>T)和1个插入突变(c.179+16_179+17 ins T),其中2个内含子突变及1个插入突变通过在线预测不致病,而错义突变c.145C>A通过Polyphen2在线预测为可疑致病,参照美国ACMG的标准,此变异致病性不确定。结论P4HA2基因错义突变c.145C>A为土家族高度近视患者可疑致病基因突变。

P4HA2在促进肿瘤进展中的作用

P4HA2是编码胶原蛋白脯氨酰4-羟化酶(C-P4H)的α亚基的重要基因之一,在多种肿瘤中过表达并促进肿瘤进展,其高表达与患者的不良预后相关。在不同肿瘤中,P4HA2可以促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,增加肿瘤干细胞群体的比例,以及促进肿瘤细胞免疫逃逸等。深入了解P4HA2在肿瘤进展中的作用,可为针对P4HA2预防或逆转肿瘤进展提供新的思路和见解。

脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2通过肌醇需要酶1α介导的UPR信号通路调控肝癌细胞凋亡并预测早期肝细胞癌的不良预后

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)严重危害着人类健康。尽管大量研究表明,在HCC早期进行手术切除可提高患者的生存率,但其高复发率仍然阻碍着治疗进程。本研究分析蛋白质组学数据发现。脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2(prolyl 4-hydroxylase subunit α-2,P4HA2)在早期HCC组织中高表达,Kaplan-Meier曲线、Cox比例风险回归模型(cox regression model)证明,P4HA2高表达的早期肝癌患者预后较差,且P4HA2可作为患者预后的独立预测因子。通过敲低或过表达实验发现,P4HA2明显促进肿瘤细胞的增殖、迁移等恶性生物学行为。敲低P4HA2激活了由肌醇需要酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)介导的促凋亡非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)。以上结果表明,P4HA2可能通过调节内质网稳态来调控肝癌细胞凋亡,P4HA2有望成为HCC潜在的治疗靶点。

氨酰4-羟化酶A2通过抑制炎症反应缓解肾纤维化

目的:利用体内和体外模型探讨氨酰4-羟化酶A2(P4HA2)对肾间质纤维化的作用及其机制。方法:采用输尿管结扎模型构建动物肾纤维化,使用免疫组化技术检测P4HA2表达水平;采用不同梯度浓度TGF-β刺激HK2细胞构建细胞肾纤维化模型,利用免疫印迹和细胞免疫荧光检测P4HA2蛋白表达变化水平;利用腺病毒转染HK2细胞,使用免疫印迹和酶联免疫吸附试验技术探索P4HA2在细胞水平对NF-κB信号通路和下游炎症因子的影响。结果:与假手术组小鼠比较,模型组小鼠P4HA2表达量显著增加,且集中于肾小管细胞胞质与胞核中。使用50 ng/mL TGF-β刺激HK-2细胞24 h后P4HA2表达水平显著升高,且细胞形态由鹅卵石形变成针尖样长梭形;与转染对照组(scramble)比较,sh-P4HA2抑制NF-κB信号通路相关蛋白表达量,减少下游炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平。结论:P4HA2可能调控NF-κB信号通路,抑制机体炎症反应,缓解肾间质纤维化发展。