沉默Rictor对肝癌细胞体外血管生成、成瘤能力及P4HB/Hedgehog表达的影响

目的探究沉默Rictor对肝癌细胞体外血管生成、成瘤能力及P4HB/Hedgehog表达的影响。方法取肝癌细胞,将其分为肝癌细胞组(LC组)、肝癌细胞+Rictor-NC组(NC组)、肝癌细胞+siRictor组(SR组),荧光显微镜下观察各组转染情况,实时定量PCR法检测Rictor相关表达,细胞三维培养观察细胞形成拟态血管能力,裸鼠成瘤实验观察成瘤能力,免疫印迹法检测血管生成相关指标及P4HB/Hedgehog表达。结果LC组无转染,而NC组、SR组均可见绿色荧光,说明转染成功,且转染率均达90%以上,说明转染的细胞较为稳定;SR组细胞Rictor mRNA表达、血管形成数量、裸鼠瘤体生长曲线、血管内皮生长因子、P4HB、Hedgehog蛋白表达明显降低(P<0.05),说明沉默Rictor可促进肝癌细胞凋亡并抑制瘤体生成。结论沉默Rictor可显著抑制肝癌细胞体外血管生成,降低裸鼠成瘤能力,并抑制P4HB/Hedgehog表达。

P(3 HB-co-4 HB)微波接枝顺丁烯二酸酐的研究

以聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)[P(3 HB-co-4 HB)]和顺丁烯二酸酐(MAH)为原料,通过微波辐照制备P(3 HB-co-4 HB)-g-MAH接枝共聚物.采用红外光谱仪(FTIR)、差示扫描量热仪(DSC)和热物台偏光显微镜(PLM)研究了单体用量、引发剂用量、辐照时间对接枝反应的影响,接枝率对P(3 HB-co-4 HB)结晶形态、亲水性以及熔融行为的影响.结果表明:在微波作用下,MAH可与P(3 HB-co-4 HB)发生接枝反应,实验所得接枝率达0.30%～0.78%;且接枝率越高,P(3 HB-co-4 HB)-g-MAH的球晶尺寸越小,亲水性越好,熔融温度越低.

P(3HB-co-4HB)/PBS共混材料酶解性能研究

目的研究P(3HB-co-4HB)/PBS共混材料在脂肪酶溶液中的生物降解性能。方法将P(3HBco-4HB)/PBS共混材料置于脂肪酶溶液中进行酶解实验,利用质量损失率、扫描电镜(SEM)、X射线衍射(X-RD)和偏光显微镜(POM)等测试手段或指标,对材料的生物降解性能进行分析。结果质量损失率与SEM结果表明,实验用脂肪酶对P(3HB-co-4HB)的降解效果不明显,而对PBS有着较为显著的降解效果。X-RD分析表明,P(3HB-co-4HB)/PBS共混材料在19.9°和22.7°处的结晶衍射峰强度随酶解时间不断下降,表明主要是PBS组分发生了降解。POM结果表明,P(3HB-co-4HB)酶解前后球晶的形态基本不变。结论实验用脂肪酶对PBS酯键的水解相对容易,而对P(3HB-co-4HB)酯键的水解难度较大,P(3HB-co-4HB)/PBS共混材料在酶解时,存在PBS优先降解的情况。脂肪酶酶解对材料的晶区与非晶区并没有选择性。

氧等离子体表面改性P3/4HB无纺支架

研究氧等离子体表面改性对P3/4HB无纺支架的作用。氧等离子体改性P3/4HB无纺支架,改性的效能通过检测接触角及X射线光电子能谱分析进行结构表征,接种大鼠肌成纤维细胞,检测细胞黏附率以进行功能表征,并检测改性前后的最大应力变化。结果表明:等离子体改性后的P3/4HB无纺支架表面氧含量增加了12.1%,C-O(C-OH)峰、COOR(COOH)峰分别增加了0.2%、6.2%,接触角下降了44°,而最大应力无明显变化,改性后支架细胞黏附率较预处理组高。说明氧等离子体处理P3/4HB支架,可引入功能性的-OH、-COOH等活性基团,改善材料的表面亲水性,提高对细胞的黏附力,为进一步共价接枝生物活性单体创造了条件。

P(3-co-4)HB解聚酶的分离纯化及酶学性质研究

聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)(P(3-co-4)HB)解聚酶是由微生物所分泌的一种胞外酶,可以将P(3-co-4)HB降解为水溶性小分子物质,为了阐明P(3-co-4)HB材料的生物降解机理并建立其生物循环系统,P(3-co-4)HB降解菌和降解酶的研究越来越受到关注。本论文以Penicillium sp.DS-04菌株为材料,对其产生的P(3-co-4)HB解聚酶进行了分离纯化,发酵液经过冻干和分子筛层析得到了P(3-co-4)HB解聚酶的纯酶组分,纯化倍数和回收率分别为3.15和10.44%,SDS-PAGE显示该酶分子量为44.0kDa。本文还对P(3-co-4)HB解聚酶的酶学性质进行了测定,并初步探讨了解聚酶的作用模式。

基于Oncomine数据库探讨P4HB在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨P4HB基因在肾透明细胞癌中的表达及意义。方法从Oncomine数据库中提取并挖掘肾透明细胞癌中P4HB基因的表达数据,利用CCLE分析P4HB在肾癌中的表达。使用Human Protein Atlas(HPA)病理学图谱分析对比肾癌组织和正常肾组织中P4HB蛋白质含量。利用Kaplan-Meier Plotter在线工具分析P4HB表达与肾透明细胞癌预后的关系。结果在Oncomine数据库中关于P4HB基因共收集到447项不同类型的研究结果,其中有统计学意义的44项,P4HB基因在肿瘤组织中高表达32项,低表达12项。在肾癌中高表达6项,低表达0项。CCLE评测结果显示P4HB在肾癌中高表达。Human Protein Atlas数据库中免疫组化染色证实了人类蛋白图谱中P4HB蛋白在肾癌中相对正常肾组织表达明显增加。进一步利用Kaplan-Meier分析发现,P4HB的基因表达与肾透明细胞癌患者预后存在相关性,且P4HB高表达患者的总体生存率较低,而低表达患者总体生存率较高。结论P4HB在肾透明细胞癌组织中呈高表达,并与肾透明细胞癌预后相关,具有作为预后标志物或治疗靶点的潜力。

结直肠癌组织中P4HB的表达及意义

目的:探究P4HB蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义分析。方法:检测多种结直肠癌细胞系中P4HB的转录和表达水平。对136例结直肠癌患者的病理切片进行病理检查,并与临床结合,检查其相关性;部分新鲜组织提取总mRNA和总蛋白。选取42例患者的癌旁组织作为对照,检测P4HB的转录水平和表达水平。结果:结直肠癌细胞系中P4HB的转录和表达水平有显著升高,平均升高2~5倍;结直肠癌患者肿瘤组织中P4HB的转录和表达水平有显著升高,转录水平升高5倍左右,表达水平升高2倍左右。经病理切片检查后,发现P4HB的高表达与肿瘤组织的分化程度密切相关,与性别和年龄无关。结论:结直肠癌患者P4HB显著高表达,且与癌症分化程度密切相关,可作为结直肠癌诊断和治疗过程中的潜在分子标志物。

低氧微环境对P(3HB-co-4HB)与小鼠骨髓间充质干细胞共培养形成心肌补片影响的实验研究

目的探究低氧微环境对小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mMSCs)与聚3羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯[3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate,P(3HB-co-4HB)]材料共培养形成心肌补片的影响,为细胞移植术治疗心肌梗死提供一种更有效的心肌补片。方法全骨髓培养法提取小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs),取5代mMSCs流式细胞术鉴定表面抗原。将P(3HB-co-4HB)与小鼠骨髓间充质干细胞共培养制作成细胞补片,随机分为常氧组和低氧组,每组各10个样本,0、12、24 h分别用CCK-8法测定细胞增殖情况;扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察补片存活、黏附、生长情况。加入诱导剂5-氮杂胞苷2周后,免疫荧光检测两组心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。结果在共培养24 h后,CCK-8法测定低氧组OD值(0.349±0.038)显著大于常氧组(0.308±0.025)( n =10, P <0.05),扫描电子显微镜观察到低氧组P(3HB-co-4HB)材料上细胞数量更多,细胞与材料之间的黏附牢固,细胞形态正常。免疫荧光显示低氧组cTnT表达比常氧组更加显著。结论相对于常氧条件,低氧微环境可促进骨髓间充质干细胞在P(3HB-co-4HB)材料上的黏附、存活、增殖、分化,形成一种更有效的心肌补片。

miR-136-5p靶向P4HB抑制肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的观察miR-136-5p对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探究其机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测肾癌组织和肾癌细胞中miR-136-5p、脯氨酰4-羟化酶、β-多肽(Prolyl 4-hydroxylase,β-polypeptide,P4HB)的表达。脂质体法将miR-NC、miR-136-5p mimics、pcDNA、pcDNA-P4HB、miR-136-5p mimics+pcDNA、miR-136-5p mimics+pcDNA-P4HB转染至ACHN细胞。细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK8)法、侵袭实验(Transwel)小室实验检测肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭情况。荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果与正常组织和正常细胞比较,癌组织和癌细胞中miR-136-5p的表达显著降低,P4HB的表达显著升高。过表达miR-136-5p的肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,而过表达P4HB的肾癌细胞则具有相反的结果。miR-136-5p明显抑制野生型P4HB细胞的荧光活性。此外,过表达P4HB联合过表达miR-136-5p明显逆转过表达miR-136-5p对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-136-5p可抑制肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制与靶向P4HB相关,可为肾癌的早期诊断、治疗提供新方向。

P3/4HB/PBS/BPO改性材料的物理性能研究

采用溶剂浇铸法制备了P3/4HB/PBS/BPO改性材料,实验研究表明过氧化苯甲酰(BPO)的添加,复合材料的拉伸性能、断裂伸长率及弹性模量均有不同程度的提高,BPO含量为0.5%时材料的机械性能最优,疏水性能较好,综合性能更好。BPO的加入使复合材料的红外光谱产生了新的吸收峰,引起了PBS和P3/4HB发生交联反应。BPO的添加,提高了材料的耐热性能,降低了材料的熔点,提高了材料的加工性能,增加了材料之间的相容性和相互作用。

生物可降解塑料P34HB的改性研究进展

改性生物塑料是解决其热稳定性差、加工窗口窄、生产成本高的重要途径。本文综述了生物塑料聚3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯(P34HB)在物理改性和化学改性方面的研究进展,详细介绍了其物理改性和化学改性的方法以及改性P34HB的应用前景,并对P34HB的改性研究及应用发展进行展望。

P(3HB-co-4HB)/PLA共混材料力学性能、热性能研究

用双螺杆挤出机制备P（3HB—CO-4HB）共聚物与PLA混合物，对共混材料的拉伸强度、冲击性能、熔指和维卡软化点进行考察，并用DSC法分析共混材料的相容性和结晶性，结果表明：P（3HB-4HB）与PLA为部分相容体系；PLA10％以上才能影响P（3HB4HB）拉伸性能，20％以上才会影响P（3HB～4HB）冲击性能，30％以上才会明显影响P（3HB-4HB）维卡软化温度。

P3/4HB/PBS/MAH复合材料的机械性能及降解研究

在配比为9:1的P3/4HB/PBS共混物体系中添加不同比例的接枝剂—马来酸苷(MAH)制得P3/4HB/PBS/MAH改性材料。MAH含量为0.7%时复合材料的拉伸强度增强20%,断裂伸长率增大了425%,杨氏模量也较小,MAH的添加增强了P3/4HB/PBS的机械性能。MAH含量为0.7%时复合材料水接触角最大,水溶性降低,MAH的添加增强了复合材料的亲水性能和稳定性,从而加快了复合材料的生物降解性能,120 h复合材料的降解率可达89%,材料中的P3/4HB基本被完全降解。FTIR表明MAH的加入使PBS与P3/4HB发生了接枝聚合反应。TG和XRD发现MAH的添加拓宽了材料的加工范围,减小了材料的结晶度,提高了复合材料的热稳定性和生物相容性。

宫颈鳞癌演进过程P16^(INK4a)及Hh-Gli信号通路相关蛋白表达及其相关性研究

探讨P16INK4a及Sonic hedgehog(Hh-Gli)信号通路蛋白在宫颈癌及癌前病变(CIN)中的表达相关性及其意义.采用Western-blot方法检测HPV16阳性及HPV18阳性宫颈癌细胞系P16INK4a及Hh-Gli信号通路蛋白Smo、Ptch及Gli表达.免疫组化检测组织芯片P16INK4a、Shh、Smo、Ptch及Gli表达,包括20例正常宫颈、18例癌旁组织、54例CIN及28例宫颈鳞癌组织.分析P16INK4a与Hh-Gli信号通路蛋白间表达相关性及与临床病理因素的关系.结果显示P16INK4a、Smo、Ptch及Gli蛋白在HPV16及HPV18阳性宫颈癌细胞系中表达无显著差异(P>0.05).P16INK4a、Shh、Smo、Ptch及Gli蛋白在宫颈癌中表达强度显著高于癌旁及正常组织(P<0.05),在CINⅠ与正常组织间差异不显著(P>0.05).P16INK4a、Shh、Smo及Gli蛋白,在CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ之间均有显著性差异(P<0.05).相关分析显示,CINⅡ-CINⅢ中P16INK4a与Shh和Smo蛋白表达正相关,浸润癌中P16INK4a与Shh、Smo和Gli蛋白正相关.结论认为,P16INK4a及Hh-Gli信号通路异常激活与宫颈癌发生及演进密切相关,且二者间具有相关性.Hh-Gli信号通路的激活可能是Shh配体增高调控Smo高表达而上调Gli蛋白所致.

第四代PHA生物塑料聚3-羟基丁酸酯4-羟基丁酸酯

PHA具有很好的生物降解性能,随着聚羟基脂肪酸酯(PHA)的研究及发展,新一代全生物降解塑料聚3-羟基丁酸酯4-羟基丁酸酯(P3HB4HB)是一种综合性能优异的生物塑料,力学性能与通用塑料PP和PE相近,并可以在传统塑料加工设备上加工成型,新一代生物塑料问世较晚,相应的开发研究和应用还需进一步挖掘。

4-羟基丁酸含量对聚3-羟基丁酸与4-羟基丁酸共聚物性能和结构的影响

目的对3-羟基丁酸4-羟基丁酸共聚酯P(3HB-co-4HB)进行酶解测试。方法通过力学性能测试、失重率分析、热失重分析、X-射线衍射分析、扫描电镜等测试和表征手段对样品的物理性能及生物降解情况进行评价。结果 P(3HB-co-4HB)分子中4HB单体(文中均用摩尔分数表示)的引入提高了材料的柔韧性,材料的脆性下降;失重率方面,4种材料的降解速率从高到低依次为P(3HB)>P(3HB-co-5%4HB)>(3HB-co-10%4HB)>P(3HB-co-15%4HB);酶解前期,材料的热稳定性增强,而酶解后期材料的热稳定性逐渐下降;XRD结果表明材料降解过程中结晶度的变化不明显;P(3HB-co-4HB)分子中随着4HB单体含量的增加,材料表面粗糙度降低,酶解后材料表面被侵蚀,降解速率与失重率结果一致。结论 P(3HB-co-4HB)分子中4HB单体的引入显著影响了材料的机械性能,随着4HB含量的增加,材料的失重率越来越大,热稳定性呈现先上升后下降的趋势,材料表面粗糙度逐渐降低,由于酶解过程属于从表面侵蚀开始,因此酶解过程中样品的结晶度变化不大。

脯氨酰4-羟化酶β亚基通过上皮间质转化途径对肝癌辐射敏感性影响的机制研究

目的探讨脯氨酰4-羟化酶β亚基(P4HB)通过上皮间质转化(EMT)途径对肝癌辐射敏感性影响的机制。方法采用小干扰RNA技术,下调肝癌细胞内P4HB的表达,在体外观察P4HB对肝癌细胞转移表型影响,探讨其可能的分子机制,从而为揭示P4HB在肝癌细胞辐射敏感性中的分子机制奠定基础。结果与对照组细胞相比较,P4HB下调的肝癌细胞的辐射敏感性显著增加。接受了辐射照射之后,细胞存活率显著降低,细胞凋亡比例显著上升,G2/M期比例显著增加,而处于S期的细胞比例显著减少,放射增敏比上升(P<0.05)。结论抑制P4HB的表达,可增强肝癌辐射抵抗细胞的敏感性。

增塑剂对聚(3-羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯)性能的影响

本文采用偏光显微镜(POM)、电子拉力机研究了增塑剂对聚(3-羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯)[P(3HB-co-4HB)]的结晶性能及力学性能的影响。研究表明,P(3HB-co-4HB)呈现出典型的环带球晶,球晶上还有消光环带和同心环线共存的现象。增塑剂可使球晶尺寸减小,断裂伸长率提高,拉伸强度降低。随着增塑剂含量的增加,断裂伸长率增大,而拉伸强度降低。

转化生长因子β_1缓释微球对体外P3/4HB无纺支架细胞生长的影响

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)壳聚糖缓释微球对体外3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯(P3/4HB)无纺支架培养肌成纤维细胞的作用。方法:静电纺丝法制备P3/4HB无纺支架,接种大鼠肌成纤维细胞。在实验组培养基中分别加入TGF-β1缓释微球和TGFβ-1,体外培养1周后行扫描电镜观察,检测羟脯氨酸和DNA含量;并用ELISA法动态检测TGFβ-1缓释微球缓释效果。结果:TGF-β1可从缓释微球中缓慢释放,1周内微球释放率为40.6%。与对照组比较,实验组细胞生长紧密,羟脯氨酸及DNA含量增高。结论:TGFβ-1壳聚糖缓释微球可在体外稳定释放,并具有生物学活性;其运用于P3/4HB无纺支架,可促进细胞增殖和胶原合成,为研究为制备携带壳聚糖TGFβ-1缓释微球的组织工程复合支架打下了良好的基础。

P3/4HB和滑石粉复合增韧填充PLA的研究

通过熔融共混法制备了可完全生物降解的聚乳酸/聚(3-羟基丁酸-co-4-羟基丁酸共聚酯)/滑石粉(PLA/P3/4HB/滑石粉)复合材料,利用万能试验机、扫描电子显微镜、熔体流动速率仪、差示扫描量热仪及热失重分析仪等测试研究了偶联剂处理以及滑石粉含量对PLA/P3/4HB/滑石粉复合材料的力学性能、界面相容性、熔体流动性和结晶性能的影响。结果表明,当滑石粉填充量较少时,偶联剂处理对复合材料的性能影响不大,但当滑石粉填充量较高时,经过偶联剂处理后的滑石粉能显著提高复合材料的熔体流动速率和冲击强度,PLA/P3/4HB/处理滑石粉复合材料的拉伸强度也保持在36.9MPa以上,结晶性能也有所提升,复合材料具有良好的综合性能。