肾移植术后外周血淋巴细胞P59^(fyn)和SLAM基因表达的动态观察

目的 :寻找肾移植后初期与免疫排斥相关的差异表达基因 ,探讨肾移植后淋巴细胞活化、信号转导变化的规律与机制。方法 :对 1例心脏瓣膜成形术加肾移植术后患者外周血淋巴细胞的mRNA表达进行基因差异显示分析 ,进而对差异条带进行测序 ,并同时监测肾功能临床生化指标。结果 :差异分析显示 ,在肾移植术中开放动脉后 ,即有酪氨酸蛋白激酶P5 9fyn、signalinglymphocyteactivationmolecule(SLAM)等基因的表达 ,于术后 72h～ 5天降低 ,术后 7天表达出现高峰 ;临床生化检测可见 ,术后患者血中BUN、肌酐和CsA逐渐降低 ,但在第 10天BUN、CsA出现异常升高。结论 :肾移植术后一些与T细胞活化早期信号转导相关基因的表达水平发生改变 ,其中P5 9fyn和SLAM在术后第 7天表达增强 ,较临床生化改变早 3～ 5天 ,提示有可能通过监测这些基因的表达情况 ,来早期、无创地监测肾移植术后器官损伤。

一种新的红细胞生成调控因子P59蛋白质的分离纯化和性质研究

以正常人尿为原料，经过ＤＥＡＥ纤维素离子交换层析、硫酸铵沉淀、凝胶过滤、碱性制备电泳等纯化步骤得到一个分子量为５９ｋＤａ的蛋白质，称为Ｐ５９蛋白．该蛋白质在体外可以促进１３ｄ胎鼠肝细胞红系集落的形成，在体内可以刺激小鼠网织红细胞的生成，促使５／６肾切除大鼠贫血症状和Ｈｙｍａｎｎ肾炎大鼠贫血症状的改善，对尿毒症病人的贫血症有明显疗效．

一种新的牛支原体膜蛋白p59的表达与鉴定

目的寻找新的牛支原体(Mycoplasma bovis)抗原蛋白并进行原核表达,为牛支原体疫苗的制备奠定基础。方法采用生物信息学方法分析牛支原体PG45株基因组,发现一种新的膜蛋白p59,并对其理化性质、蛋白定位、是否存在信号肽及其互作蛋白进行分析预测。通过PCR扩增p59蛋白编码基因,经酶切连接表达载体pET-30a(+)后转化入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达并进行优化,利用不同浓度咪唑洗脱液来洗脱蛋白。通过Western blot进行鉴定。制备p59重组蛋白兔多抗,通过粘附试验和支原体生长抑制试验验证该重组蛋白的功能。结果生物信息学分析该蛋白可能为ABC转运系统的组成蛋白,其互作蛋白为糖、微量元素摄取的ABC转运系统相关蛋白,可能参与牛支原体摄入营养物质的过程。PCR扩增p59基因,双酶切及测序鉴定pET-30a(+)-p59原核表达载体构建正确,SDS-PAGE分析重组载体转化BL21表达p59重组蛋白,相对分子质量为66×10^3。Western blot鉴定该蛋白为膜蛋白,免疫新西兰兔可刺激产生特异性抗体,即具有抗原性。p59蛋白粘附MDBK细胞试验显示,用p59兔多抗作为一抗时的MDBK(Madin-Darby bovinekidney,牛肾细胞)细胞表面能够粘附更多的P59蛋白,表明p59重组蛋白具有一定的粘附能力。生长抑制试验表明,p59兔多抗能抑制牛支原体在固体培养基中的生长,生长抑制率为45.53%。结论新鉴定的牛支原体膜蛋白p59可能是一种粘附相关蛋白,且具有抗原性,该蛋白多抗血清能抑制支原体的生长,为研究支原体膜蛋白的功能奠定了基础,为牛支原体亚单位疫苗的研制提供了新的靶蛋白。

苹果矮化砧木P_(59)离体叶片高效再生体系的建立

对苹果矮化砧木P59离体叶片再生条件进行研究,结果表明：当选用苗龄20～30 d的试管苗,取顶部第2～4叶位幼嫩叶片,横切2刀,远轴面向下接触培养基,再生培养基为MS＋TDZ 2.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋白砂糖35 g/L＋琼脂6.2 g/L,暗培养20 d时,再生效率可达到85%,出芽数平均8个以上,建立了良好的再生体系.

环孢霉素A对异体心肌诱导大鼠脾淋巴细胞表面分子表达时间窗的影响

目的:体外建立异体心肌组织抗原诱导大鼠淋巴细胞表面蛋白分子及编码基因表达时间窗模型,动态观察环孢素A对表达时间窗的影响。方法:实验分4组:对照组、抗原组、环孢组和抗原+环孢组。2、6、12、24、48h和72h观察脾白细胞其表面蛋白分子及编码基因的变化。结果:4组MHC-Ⅱ、CD4、CD8分子、ICAM-1无显著差异,CD4分子环孢霉素组2～24h有一个平台期。IL-2R分子抗原组12h达高峰值,环孢素A组6h有小峰值,抗原+环孢素A组表达较平稳。P59基因对照组逐步负调,而抗原组在2h内和12～24h有2个正调表达,2～12h负调至谷底,后再正调、负调表达,环孢素A组表达较稳定,抗原+环孢素组48h达到谷底,后迅速上升。CD4基因对照组2h、抗原组6h到谷底,后迅速上升,环孢素A组48h达到峰值,抗原+环孢素A组2h内有一个峰值,2组后逐步负调。CD8基因4组均负性表达,除抗原组无谷底外,对照组加药12h出现谷底,环孢素组加药6h出现谷底,抗原+环孢素A组加药12h出现谷底,3组后迅速上升。结论:异体心肌组织抗原可在2h内引发白细胞开始释放细胞表面蛋白分子IL-2R、P59基因表达,刺激6h可以诱发CD4基因开始转录表达,环孢素A 2h开始释放ICAM-I、IL-2R分子。这些结果为更加具体的描述移植免疫排斥反应的时间进程提供了详实的依据,并为更深入阐述环孢素A抑制移植排斥反应的机理提供了可靠依据。