单核细胞增多性李氏杆菌TA分离株P60基因的克隆与表达

目的对单核细胞增多性李氏杆菌TA分离株入侵相关蛋白P60基因进行克隆、测序和表达。方法利用PCR方法扩增P60基因,克隆入T载体中进行测序,并亚克隆到大肠埃希菌表达载体pET28a中进行诱导表达。结果该基因全长1122bp,编码374个氨基酸,其中前25个氨基酸残基构成信号肽序列。与GenBank已经报道的5个不同分离株P60基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性分别在96.4%～99.6%和97.1%～99.8%之间。在推导的P60蛋白氨基酸序列中,存在9个潜在的N-联糖基化位点,5个Thr-Asn重复序列区,Thr占所有氨基酸残基的16.3%。重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到分子质量单位为45.6ku的重组蛋白,Western blot分析表明重组蛋白为特异的。经凝胶薄层扫描,重组蛋白表达量可占菌体蛋白的31.6%。结论成功克隆和表达了单核细胞增多性李氏杆菌TA分离株P60基因。