金鱼DEAD-box家族基因p68和p110在配子发生中的表达特征

利用组织原位杂交技术,以地高辛标记的反义RNA为探针,检测了金鱼(Carassius auratus)DEAD-box家族基因p68和p110在卵子发生及精子发生中的表达分布特点。结果表明:在金鱼配子发生中,p68基因在各个时期的卵母细胞均有表达,Ⅰ、Ⅱ期卵母细胞中的表达水平较Ⅲ、Ⅳ期卵母细胞中更高。p68基因的表达只限于精原细胞和初级精母细胞中。p110基因在金鱼精子发生各阶段持续表达,其中精原细胞和初级精母细胞中表达水平较高;在卵子发生中,Ⅰ期卵母细胞中没有p110 RNA阳性信号,Ⅱ期卵母细胞中信号较为强烈,但在Ⅲ、Ⅳ期卵母细胞中杂交信号明显减弱。

赖型钩体DNA重组质粒rpDJt及其表达蛋白P68对豚鼠的免疫保护研究

为了进一步鉴定赖型钩体ＤＮＡ重组质粒ｒｐＤＪｔ及其纯化表达蛋白质Ｐ６８的免疫保护作用，采用随机、双盲和对照法对５０只豚鼠进行了３次和６个部位主动免疫接种，并于接种后３０天以强毒力、大剂量活钩体攻击。结果：Ｐ６８组存活率１００％（７／７）；ｒｐＤＪｔ组存活率７７％（１０／１３）；ｐＴ７－７组（无重组质粒）存活率２５％（３／１０）；全钩灭活疫苗组存活率９３％（１３／１４）。作者认为该质粒的表达蛋白质Ｐ６８可作为钩体基因工程亚单位疫苗的候选抗原。

赖型钩体重组质粒及表达保护性抗原,p68的研究

目的 寻找钩体病基因工程疫苗保护性抗原候选。方法 （１） 鸟枪法构建赖型钩体０１７ 株基因库； （２） α互补、 Ｄ Ｎ Ａ 原位杂交筛选重组质粒； （３） Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交行 Ｄ Ｎ Ａ 同源性分析； （４） 双脱氧链中止测重组 Ｄ Ｎ Ａ 序列及与外膜蛋白基因 （ｏｍｐ） 匹配； （５） Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导重组子表达； （６） 免疫印迹、 Ｍ Ａ Ｔ、 Ｅ Ｉ Ａ、 Ｍ Ｔ Ｔ 检测表达蛋白抗原特性及 Ｉ Ｌ—２ 、 Ｉ Ｌ—６ 活性； （７） 纯化表达蛋白ｐ６８ 进行豚鼠主动免疫 攻击实验， 观免疫保护性。结果 （１） 重组质粒ｐ Ｄ Ｊ Ｈ２ （ 亚克隆ｐ Ｄ Ｊｔ） 插入片段１９ｋｂ ， 与各致病钩体不同片段 Ｄ Ｎ Ａ 高度同源； （２） 序列测定插入片段实际１８１１ｂｐ ， 推测有２ 个读框 （ Ｏ Ｒ Ｆ） ， 各有启动子、终止密码。查 Ｇｅｎ Ｂａｎｋ Ｅ Ｍ Ｂ Ｌ 无类似序列； （３） 表达蛋白分子量６８ｋ Ｄ （ｐ６８） ； （４） ｐ６８ 是胸腺依赖性 （ Ｔ Ｄ） 抗原，有良好抗原特性， 抗血清效价１ ： ５２４２８８ ， （ Ｅ Ｉ Ａ） 具很强的动物免疫保护作用。结论 （１） ｐ６８ 编码基因是致病钩体保护性抗原基因； （２） ｐ６８ 是致病钩体外膜保护性抗原，