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南方水稻黑条矮缩病毒P7-2基因的克隆与原核表达
1
作者
胡昱颛
王全兴
+3 位作者
张金艺
宋水林
蒋军喜
熊桂红
《生物灾害科学》
2023年第4期432-437,共6页
【目的】为克隆获得南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的P7-2基因并实现其原核表达。【方法】利用RT-PCR技术从感染SRBSDV的水稻叶片中扩增出P7-2基因。利用Gateway重组技术将基因P7-2整合到原核...
【目的】为克隆获得南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的P7-2基因并实现其原核表达。【方法】利用RT-PCR技术从感染SRBSDV的水稻叶片中扩增出P7-2基因。利用Gateway重组技术将基因P7-2整合到原核表达载体pDEST17上,获得重组原核表达载体pDEST17-P7-2。随后将原核表达载体pDEST17-P7-2转化到原核表达菌株Rosetta中。利用IPTG诱导P7-2蛋白表达并优化其诱导条件。【结果】利用RT-PCR技术扩增得到基因P7-2,其大小为930 bp。测序结果表明获得原核表达载体pDEST17-P7-2。菌液PCR鉴定了原核表达阳性菌株。在温度为28℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导表达8 h,可获得大量大小约为42 kDa含HIS标签的融合蛋白。【结论】克隆获得了SRBSDVP7-2的基因序列,实现了该基因的原核表达并探索其最佳诱导条件,为南方水稻黑条矮缩病的田间诊断、预测预报及P7-2的功能研究奠定了基础。
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关键词
南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)
RT
-
p
CR
p7-2基因
原核表达
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职称材料
四种水稻蛋白与水稻黑条矮缩病毒编码非结构蛋白P7-2的互作分析
被引量:
1
2
作者
张上林
孙丽英
陈剑平
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第6期1298-1303,共6页
水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是斐济病毒属的成员之一,可侵染玉米和水稻等作物,给亚洲地区的田间生产带来严重的损失。RBSDV有10条双链RNA(double strand RNA,dsRNA)基因组,编码12个蛋白。其中6个蛋白是病毒粒子的结构成分(P1,P2,P3,P4,P8,P...
水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是斐济病毒属的成员之一,可侵染玉米和水稻等作物,给亚洲地区的田间生产带来严重的损失。RBSDV有10条双链RNA(double strand RNA,dsRNA)基因组,编码12个蛋白。其中6个蛋白是病毒粒子的结构成分(P1,P2,P3,P4,P8,P10),6个非结构蛋白分别为P5,P6,P7-1,P7-2,P9-1,P9-2。在非结构蛋白中,P5,P6和P9-1已被证实参与形成毒质结构,P7-1被认为可在细胞质中形成类似管状的结构作为病毒胞间扩散的通道,P7-2和P9-2的功能目前尚不明确。文章采用Pull-Down和液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)等技术来鉴定水稻蛋白(日本晴)与P7-2蛋白间可能存在的互作关系。通过Pull-Down实验分析,发现有4种水稻蛋白可与P7-2相结合,其中2个蛋白为转录相关蛋白,1个为氨基转移酶,还有1个为假定的分子伴侣60前体。实时荧光定量PCR分析显示,感病寄主中的转录相关蛋白和假定的分子伴侣60前体的表达量上调,而氨基转移酶的表达量降低。
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关键词
水稻黑条矮缩病毒
p7-2基因
原核表达
蛋白质互作
实时荧光定量
p
CR
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职称材料
题名
南方水稻黑条矮缩病毒P7-2基因的克隆与原核表达
1
作者
胡昱颛
王全兴
张金艺
宋水林
蒋军喜
熊桂红
机构
江西农业大学农学院
江西农业大学江西省薯芋生物学重点实验室
出处
《生物灾害科学》
2023年第4期432-437,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31960533)
江西省自然科学基金项目(20192BAB214004)
江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ170293)。
文摘
【目的】为克隆获得南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的P7-2基因并实现其原核表达。【方法】利用RT-PCR技术从感染SRBSDV的水稻叶片中扩增出P7-2基因。利用Gateway重组技术将基因P7-2整合到原核表达载体pDEST17上,获得重组原核表达载体pDEST17-P7-2。随后将原核表达载体pDEST17-P7-2转化到原核表达菌株Rosetta中。利用IPTG诱导P7-2蛋白表达并优化其诱导条件。【结果】利用RT-PCR技术扩增得到基因P7-2,其大小为930 bp。测序结果表明获得原核表达载体pDEST17-P7-2。菌液PCR鉴定了原核表达阳性菌株。在温度为28℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导表达8 h,可获得大量大小约为42 kDa含HIS标签的融合蛋白。【结论】克隆获得了SRBSDVP7-2的基因序列,实现了该基因的原核表达并探索其最佳诱导条件,为南方水稻黑条矮缩病的田间诊断、预测预报及P7-2的功能研究奠定了基础。
关键词
南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)
RT
-
p
CR
p7-2基因
原核表达
Keywords
SRBSDV
RT
-
p
CR
p
7
-
2 gene
p
rokaryotic ex
p
ression
分类号
S432.1 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
四种水稻蛋白与水稻黑条矮缩病毒编码非结构蛋白P7-2的互作分析
被引量:
1
2
作者
张上林
孙丽英
陈剑平
机构
安徽农业大学植物保护学院
浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第6期1298-1303,共6页
基金
公益性行业(农业)科研专项(201003031)
国家自然科学基金(31071660)
文摘
水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是斐济病毒属的成员之一,可侵染玉米和水稻等作物,给亚洲地区的田间生产带来严重的损失。RBSDV有10条双链RNA(double strand RNA,dsRNA)基因组,编码12个蛋白。其中6个蛋白是病毒粒子的结构成分(P1,P2,P3,P4,P8,P10),6个非结构蛋白分别为P5,P6,P7-1,P7-2,P9-1,P9-2。在非结构蛋白中,P5,P6和P9-1已被证实参与形成毒质结构,P7-1被认为可在细胞质中形成类似管状的结构作为病毒胞间扩散的通道,P7-2和P9-2的功能目前尚不明确。文章采用Pull-Down和液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)等技术来鉴定水稻蛋白(日本晴)与P7-2蛋白间可能存在的互作关系。通过Pull-Down实验分析,发现有4种水稻蛋白可与P7-2相结合,其中2个蛋白为转录相关蛋白,1个为氨基转移酶,还有1个为假定的分子伴侣60前体。实时荧光定量PCR分析显示,感病寄主中的转录相关蛋白和假定的分子伴侣60前体的表达量上调,而氨基转移酶的表达量降低。
关键词
水稻黑条矮缩病毒
p7-2基因
原核表达
蛋白质互作
实时荧光定量
p
CR
Keywords
Rice black streaked dwarf virus
p
7
-
2 gene
p
rokaryotic ex
p
ression
p
rotein interaction
real
-
time fluores
-
cence quantitative
p
CR
分类号
S435.111.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
南方水稻黑条矮缩病毒P7-2基因的克隆与原核表达
胡昱颛
王全兴
张金艺
宋水林
蒋军喜
熊桂红
《生物灾害科学》
2023
0
下载PDF
职称材料
2
四种水稻蛋白与水稻黑条矮缩病毒编码非结构蛋白P7-2的互作分析
张上林
孙丽英
陈剑平
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2013
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
统计分析
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