牛病毒性腹泻病毒重组p80蛋白的间接ELISA方法的建立

为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定优化反应条件,建立了检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示,该方法与BVDV阳性血清反应呈阳性,而与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、口蹄疫病毒及猪瘟病毒等常见病原的阳性血清无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示本实验建立的间接ELISA方法在阳性血清11280倍稀释时检测结果仍呈阳性,而病毒中和试验结果显示该阳性血清稀释度在1512时检测结果就已为阴性,表明该方法的敏感性较高。重复性试验结果显示批内批间变异系数均小于10%,表明该方法重复性较好。采用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测90份牛血清,结果显示二者的符合率为95%。利用本研究建立的间接ELISA方法对188份采自国内两个不同地区的牛血清样品进行了检测,检出BVDV阳性血清162份,阳性血清检出率为86.2%。本研究建立的检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法可用于国内BVDV的血清流行病学调查,为相关疫病的防控提供技术支持。

基于两个重组蛋白的牛支原体免疫胶体金抗体检测试纸条的研究

本研究以牛支原体(Mycoplasma bovis)重组膜蛋白P48、P80和鸡IgY抗体标记胶体金溶液,以蛋白A和蛋白G包被T线,山羊抗鸡IgY包被C线,制备检测牛支原体抗体的胶体金免疫层析试纸条。用本实验室保存的39份牛支原体感染来源血清、56份免疫来源血清以及142份临床血清对研制的试纸条进行质量评估。结果显示,该试纸条能检测出感染和免疫14 d后的牛血清中的牛支原体抗体,对感染来源血清敏感性为95.83%、特异性为93.75%,对免疫来源血清的敏感性为92.31%、特异性为93.75%,对临床血清的敏感性为90.12%、特异性为98.36%。上述结果表明,该试纸条能用于牛支原体抗体现场快速检测、群体监测和辅助诊断。