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猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究
被引量:
4
1
作者
韦艳娜
熊祺琰
+2 位作者
董璐
冯志新
邵国青
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1016-1019,共4页
为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学...
为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学评价。结果表明,电镜下观察所制备的ISCOM-P97R1具有ISCOM的典型蜂窝状结构,直径为30 nm^40 nm,P97R1蛋白的包封率可达85.6%。免疫后7 d即可在小鼠血清中检测到高水平的特异性P97R1抗体,并且其针对Mhp全菌蛋白的抗体也显著高于无佐剂的活疫苗对照组。结果表明,ISCOM-P97R1对Mhp活疫苗免疫刺激能力具有显著的增强作用,同时可以有效诱导产生针对P97R1的免疫应答,进一步增强了疫苗的保护能力。
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关键词
免疫刺激复合物
p97r1
猪支原体肺炎
活疫苗
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职称材料
重组蛋白CTB-P97R1对猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫效果的评价
被引量:
2
2
作者
韦艳娜
张珍珍
+5 位作者
王丽
王佳
陈蓉
冯志新
邵国青
熊祺琰
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期74-79,共6页
为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体...
为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体外神经节苷脂(GM1)结合试验检测r CTB-P97R1的佐剂活性。随后将r CTB-P97R1与活疫苗混合后滴鼻免疫小鼠,免疫后采血和收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),分别检测其中的特异性Ig G抗体和s Ig A抗体的水平评价免疫效果。结果显示,r CTB-P97R1可以特异性结合GM1,具有生物学活性。小鼠免疫后的血清Ig G抗体显著高于活疫苗对照组(p<0.01),同时产生了高水平的P97R1特异性Ig G抗体(p<0.01);小鼠BALF中的s Ig A抗体也显著高于活疫苗对照组(p<0.05)。结果表明,r CTB-P97R1能够显著增强经滴鼻免疫的猪支原体肺炎活疫苗的免疫效力,同时可提升P97R1的免疫应答,有望作为经黏膜免疫的猪支原体肺炎活疫苗的新型佐剂。
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关键词
霍乱毒素B亚单位
p97r1
佐剂
滴鼻
猪支原体肺炎活疫苗
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职称材料
猪肺炎支原体黏附因子P97R1区单抗制备
被引量:
1
3
作者
冯志新
刘茂军
+3 位作者
王海燕
甘源
吴叙苏
邵国青
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2009年第6期1438-1441,共4页
猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)与呼吸道黏膜纤毛的特异性吸附是引起猪支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaeofswilqe,MPS)的先决条件.Minmn等研究表明,97蛋白R1区直接参与支原体与呼吸道纤毛的黏附,同时P97的主要抗原...
猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)与呼吸道黏膜纤毛的特异性吸附是引起猪支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaeofswilqe,MPS)的先决条件.Minmn等研究表明,97蛋白R1区直接参与支原体与呼吸道纤毛的黏附,同时P97的主要抗原决定簇也位于该区域。P97R1区在猪8市炎支原体的检测诊断与致病机理研究方面具有重要意义。本研究以纯化的猪肺炎支原体全菌蛋白作为免疫原,以大肠杆菌表达的P97R1融合蛋白作为筛选抗原制备锗肺炎支原体P97R1区的特异性单抗,为Mhp的诊断检测及致病机制研究提供基础。
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关键词
猪肺炎支原体
p97r1
区
单克隆抗体
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职称材料
猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用(英文)
被引量:
1
4
作者
刘茂军
祝永琴
+2 位作者
冯志新
吴叙苏
邵国青
《Agricultural Science & Technology》
CAS
2013年第5期710-715,共6页
[目的]研究猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用。[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白P97R1基因,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵...
[目的]研究猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用。[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白P97R1基因,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P97R1;PICZα-A-P97R1经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115;将PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P97R1蛋白于发酵上清液中,并通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting对其进行鉴定。[结果]P97R1蛋白基因获得了分泌性表达,表达量达499μg/ml,而且具有良好的反应原性;同时用表达蛋白经过各项优化建立了猪肺炎支原体间接ELISA检测方法,经检测该方法具有良好的特异性和重复性。[结论]该研究为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。
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关键词
猪肺炎支原体
p97r1
毕赤酵母
间接ELISA
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职称材料
猪肺炎支原体不同蛋白抗原检测疫苗诱导IgG产生规律的研究
被引量:
5
5
作者
杜改梅
刘茂军
+3 位作者
韦艳娜
甘源
马庆红
邵国青
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期925-930,共6页
为了筛选出特异性好和敏感性高的ELISA用猪肺炎支原体抗原蛋白,作者分别将猪肺炎支原体灭活疫苗和168株菌活疫苗分别经肌肉和肺内注射途径免疫猪,免疫后7、15、30和56d采集分离血清。以P97R1、P36、P46、DnaK单个蛋白和混合蛋白为猪支...
为了筛选出特异性好和敏感性高的ELISA用猪肺炎支原体抗原蛋白,作者分别将猪肺炎支原体灭活疫苗和168株菌活疫苗分别经肌肉和肺内注射途径免疫猪,免疫后7、15、30和56d采集分离血清。以P97R1、P36、P46、DnaK单个蛋白和混合蛋白为猪支原体肺炎血清抗体ELISA用特异性蛋白抗原,与猪肺炎支原体IDEXX抗体检测试剂盒比较检测免疫后抗体的发生规律,并对检测结果进行对比。结果表明,P36和P97R1能够检测出比较高的母源抗体水平;DnaK和P46检测的抗体滴度变化趋势相一致,且检测的抗体高滴度维持时间较长;与其它抗原相比,混和蛋白在56d时检测到较高的抗体水平。混合抗原的检测结果与IDEXX具有较高的符合率,但检测敏感性比IDEXX高,且较IDEXX符合抗体变化规律。结果表明混合蛋白具有较高的检测敏感性,可以更加准确地监测该病的感染或免疫状态。
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关键词
猪肺炎支原体
IGG
疫苗
p97r1
P36
P46
DNAK
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职称材料
广西陆川猪猪肺炎支原体P97基因R1区克隆及序列分析
被引量:
5
6
作者
黎珂钰
赵武
+6 位作者
李斌
秦毅斌
卢冰霞
梁家幸
何颖
周英宁
韦英益
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015年第9期2270-2277,共8页
本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体(Mhp)地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎(MPS)有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地...
本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体(Mhp)地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎(MPS)有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地方流行毒株特性打下坚实的基础。参考Mhp基因组序列设计扩增P97基因R1区的1对引物,以2011年—2014年广西陆川猪MPS阳性病料为研究对象,提取基因组DNA,PCR扩增P97基因R1区,对PCR产物进行测序,将广西陆川猪Mhp不同地方流行毒株的P97基因R1区序列的碱基组成和推导的氨基酸序列进行比对。DNAStar软件分析结果表明,所获得的15株广西陆川猪Mhp毒株(GXLC-1、GXLC-2、GXLC-3、GXLC-4、GXLC-5、GXLC-6、GXLC-7、GXLC-8、GXLC-9、GXLC-10、GXLC-11、GXLC-12、GXLC-13、GXLC-14、GXLC-15)和3株广西其他品种猪Mhp毒株(GX227、GX595、GX674)的P97基因R1区的多处碱基发生变异。通过推导氨基酸序列统计P97R1区五氨基酸(AAKPV/E)重复数为9~18,平均值为12,TN重复数为1~4,结果发现广西陆川猪Mhp流行毒株变异使其毒力和黏附能力增强,再加上陆川猪呼吸道短小狭窄的特殊结构,更易导致广西陆川猪MPS的发生。
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关键词
广西陆川猪
猪肺炎支原体
P97基因R1区
克隆
序列分析
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职称材料
题名
猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究
被引量:
4
1
作者
韦艳娜
熊祺琰
董璐
冯志新
邵国青
机构
江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1016-1019,共4页
基金
江苏省农业自主创新基金项目[cx(12)5047]
文摘
为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学评价。结果表明,电镜下观察所制备的ISCOM-P97R1具有ISCOM的典型蜂窝状结构,直径为30 nm^40 nm,P97R1蛋白的包封率可达85.6%。免疫后7 d即可在小鼠血清中检测到高水平的特异性P97R1抗体,并且其针对Mhp全菌蛋白的抗体也显著高于无佐剂的活疫苗对照组。结果表明,ISCOM-P97R1对Mhp活疫苗免疫刺激能力具有显著的增强作用,同时可以有效诱导产生针对P97R1的免疫应答,进一步增强了疫苗的保护能力。
关键词
免疫刺激复合物
p97r1
猪支原体肺炎
活疫苗
Keywords
immunostimulating complex
p97r1
Mycoplasma hyopneumonia
live vaccine
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
重组蛋白CTB-P97R1对猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫效果的评价
被引量:
2
2
作者
韦艳娜
张珍珍
王丽
王佳
陈蓉
冯志新
邵国青
熊祺琰
机构
江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期74-79,共6页
基金
国家重点研发计划(2017YFD0501604)
文摘
为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体外神经节苷脂(GM1)结合试验检测r CTB-P97R1的佐剂活性。随后将r CTB-P97R1与活疫苗混合后滴鼻免疫小鼠,免疫后采血和收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),分别检测其中的特异性Ig G抗体和s Ig A抗体的水平评价免疫效果。结果显示,r CTB-P97R1可以特异性结合GM1,具有生物学活性。小鼠免疫后的血清Ig G抗体显著高于活疫苗对照组(p<0.01),同时产生了高水平的P97R1特异性Ig G抗体(p<0.01);小鼠BALF中的s Ig A抗体也显著高于活疫苗对照组(p<0.05)。结果表明,r CTB-P97R1能够显著增强经滴鼻免疫的猪支原体肺炎活疫苗的免疫效力,同时可提升P97R1的免疫应答,有望作为经黏膜免疫的猪支原体肺炎活疫苗的新型佐剂。
关键词
霍乱毒素B亚单位
p97r1
佐剂
滴鼻
猪支原体肺炎活疫苗
Keywords
cholera toxin subunit B
p97r1
adjuvant
intranasal
Mycoplasma hyopneumoniae live vaccine
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
猪肺炎支原体黏附因子P97R1区单抗制备
被引量:
1
3
作者
冯志新
刘茂军
王海燕
甘源
吴叙苏
邵国青
机构
江苏省农业科学院兽医研究所
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2009年第6期1438-1441,共4页
基金
国家公益性行业(农业)科研专项经费项目(200803020)
中国博士后基金项目(20070421022)
江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(08)608]
文摘
猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)与呼吸道黏膜纤毛的特异性吸附是引起猪支原体肺炎(Mycoplasmapneumoniaeofswilqe,MPS)的先决条件.Minmn等研究表明,97蛋白R1区直接参与支原体与呼吸道纤毛的黏附,同时P97的主要抗原决定簇也位于该区域。P97R1区在猪8市炎支原体的检测诊断与致病机理研究方面具有重要意义。本研究以纯化的猪肺炎支原体全菌蛋白作为免疫原,以大肠杆菌表达的P97R1融合蛋白作为筛选抗原制备锗肺炎支原体P97R1区的特异性单抗,为Mhp的诊断检测及致病机制研究提供基础。
关键词
猪肺炎支原体
p97r1
区
单克隆抗体
Keywords
Mycoplasma hyopneumoniae
p97r1
monoclonal antibody
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用(英文)
被引量:
1
4
作者
刘茂军
祝永琴
冯志新
吴叙苏
邵国青
机构
江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心
出处
《Agricultural Science & Technology》
CAS
2013年第5期710-715,共6页
基金
Supported by the National Natural Science Foundation of China(31100136)
the Special Fund for Independent Innovation of Agricultural Science and Technology in Jiangsu Province[CX(12)5051]~~
文摘
[目的]研究猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用。[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白P97R1基因,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P97R1;PICZα-A-P97R1经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115;将PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P97R1蛋白于发酵上清液中,并通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting对其进行鉴定。[结果]P97R1蛋白基因获得了分泌性表达,表达量达499μg/ml,而且具有良好的反应原性;同时用表达蛋白经过各项优化建立了猪肺炎支原体间接ELISA检测方法,经检测该方法具有良好的特异性和重复性。[结论]该研究为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。
关键词
猪肺炎支原体
p97r1
毕赤酵母
间接ELISA
Keywords
Mycoplasma hyopneumoniae
p97r1
Pichia pastoris
Indirect ELISA method
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪肺炎支原体不同蛋白抗原检测疫苗诱导IgG产生规律的研究
被引量:
5
5
作者
杜改梅
刘茂军
韦艳娜
甘源
马庆红
邵国青
机构
江苏省农业科学院兽医研究所 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室 国家兽用生物制品工程技术研究中心
金陵科技学院动物科学与技术学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期925-930,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31103116)
江苏省博士后基金项目(6511201)
文摘
为了筛选出特异性好和敏感性高的ELISA用猪肺炎支原体抗原蛋白,作者分别将猪肺炎支原体灭活疫苗和168株菌活疫苗分别经肌肉和肺内注射途径免疫猪,免疫后7、15、30和56d采集分离血清。以P97R1、P36、P46、DnaK单个蛋白和混合蛋白为猪支原体肺炎血清抗体ELISA用特异性蛋白抗原,与猪肺炎支原体IDEXX抗体检测试剂盒比较检测免疫后抗体的发生规律,并对检测结果进行对比。结果表明,P36和P97R1能够检测出比较高的母源抗体水平;DnaK和P46检测的抗体滴度变化趋势相一致,且检测的抗体高滴度维持时间较长;与其它抗原相比,混和蛋白在56d时检测到较高的抗体水平。混合抗原的检测结果与IDEXX具有较高的符合率,但检测敏感性比IDEXX高,且较IDEXX符合抗体变化规律。结果表明混合蛋白具有较高的检测敏感性,可以更加准确地监测该病的感染或免疫状态。
关键词
猪肺炎支原体
IGG
疫苗
p97r1
P36
P46
DNAK
Keywords
Mycoplasma hyopneumoniae IgG
vaccine
p97r1
P36 P46 DnaK
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
广西陆川猪猪肺炎支原体P97基因R1区克隆及序列分析
被引量:
5
6
作者
黎珂钰
赵武
李斌
秦毅斌
卢冰霞
梁家幸
何颖
周英宁
韦英益
机构
广西兽医研究所
广西大学动物科学技术学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015年第9期2270-2277,共8页
基金
广西水产畜牧兽医局科研计划(桂渔牧科1304522
1204929)
+1 种基金
广西畜禽疫苗新技术重点实验室开发基金项目(14-045-31-B-3)
南宁市西乡塘区科学研究与技术开发计划项目(2014304)
文摘
本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体(Mhp)地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎(MPS)有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地方流行毒株特性打下坚实的基础。参考Mhp基因组序列设计扩增P97基因R1区的1对引物,以2011年—2014年广西陆川猪MPS阳性病料为研究对象,提取基因组DNA,PCR扩增P97基因R1区,对PCR产物进行测序,将广西陆川猪Mhp不同地方流行毒株的P97基因R1区序列的碱基组成和推导的氨基酸序列进行比对。DNAStar软件分析结果表明,所获得的15株广西陆川猪Mhp毒株(GXLC-1、GXLC-2、GXLC-3、GXLC-4、GXLC-5、GXLC-6、GXLC-7、GXLC-8、GXLC-9、GXLC-10、GXLC-11、GXLC-12、GXLC-13、GXLC-14、GXLC-15)和3株广西其他品种猪Mhp毒株(GX227、GX595、GX674)的P97基因R1区的多处碱基发生变异。通过推导氨基酸序列统计P97R1区五氨基酸(AAKPV/E)重复数为9~18,平均值为12,TN重复数为1~4,结果发现广西陆川猪Mhp流行毒株变异使其毒力和黏附能力增强,再加上陆川猪呼吸道短小狭窄的特殊结构,更易导致广西陆川猪MPS的发生。
关键词
广西陆川猪
猪肺炎支原体
P97基因R1区
克隆
序列分析
Keywords
Guangxi Luchuan pig Mycoplasma hyopneumoniae P97gene R1region clone sequence analysis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究
韦艳娜
熊祺琰
董璐
冯志新
邵国青
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
下载PDF
职称材料
2
重组蛋白CTB-P97R1对猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫效果的评价
韦艳娜
张珍珍
王丽
王佳
陈蓉
冯志新
邵国青
熊祺琰
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
3
猪肺炎支原体黏附因子P97R1区单抗制备
冯志新
刘茂军
王海燕
甘源
吴叙苏
邵国青
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2009
1
下载PDF
职称材料
4
猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用(英文)
刘茂军
祝永琴
冯志新
吴叙苏
邵国青
《Agricultural Science & Technology》
CAS
2013
1
下载PDF
职称材料
5
猪肺炎支原体不同蛋白抗原检测疫苗诱导IgG产生规律的研究
杜改梅
刘茂军
韦艳娜
甘源
马庆红
邵国青
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
下载PDF
职称材料
6
广西陆川猪猪肺炎支原体P97基因R1区克隆及序列分析
黎珂钰
赵武
李斌
秦毅斌
卢冰霞
梁家幸
何颖
周英宁
韦英益
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2015
5
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职称材料
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