结核分枝杆菌对PA-824耐药的体外诱导及稳定性研究

目的体外诱导并获得结核分枝杆菌(MTB)对PA-824的耐药菌株。方法选取MTB标准株H_(37)Rv,在PA-824浓度二倍递增的含药培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对PA-824耐药,测定多种抗结核药物对PA-824耐药株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),并对耐药株测序鉴定ddn和fgd1基因的突变情况。将耐药株在无药固体培养基上连续传代培养10代以观察耐药稳定性。结果 H_(37)Rv经逐步诱导后得到5株MTB单克隆,它们对PA-824的MIC值是诱导前8倍以上,且对TBA-354同时发生交叉耐药。测序结果显示fgd1基因未发生突变,但5株均检测到ddn基因突变。耐药株在无药固体培养基上连续传代10代后,MIC值无明显变化。结论通过二倍递增体外诱导可以获得对2种硝基咪唑类(nitroimidazoles)药物均耐药的MTB菌株;MTB对硝基咪唑类药物的耐药可能与ddn基因突变有关;MTB对硝基咪唑类药物的耐药稳定性较强,不易复敏。

抗结核新药SQ109、PA-824、OPC-67683与R207910研究进展

近10余年来，由于HIV／AIDS的流行、移民、多种耐药结核菌的增多，以及不少国家和地区对结核病控制的忽视等因素，全球结核病形势急剧恶化，无论发达国家或发展中国家，结核病病人数都在增加。据世界卫生组织估算，全球已有近20亿人口受结核菌的感染，有2000万结核病人，每年新发生的结核病病人数为800～1000万人。结核病是一个全球性的严重公共卫生问题，现已引起国际社会的极大关注。

抗结核候选新药PA-824的研究进展

结核病严重危害人类健康,近年来在临床上频繁出现的多药耐药结核菌株使得结核病再次成为公共卫生的重大威胁,然而现有的治疗药物,治疗周期长,对结核耐药菌无效。美国全球抗结核药物开发公司联盟发现一系列具有抗结核活性的硝基咪唑吡喃类化合物,临床前研究表明,其中一个名为PA-824的先导化合物的药效好、毒性小、作用机制新,对多药耐药菌株和潜伏态的结核杆菌都表现出极强的杀菌效果,有着良好的临床应用前景。

抗结核候选药PA-824的合成研究

探索了一种合成PA-824的新方法:以2,4-二硝基咪唑(2)和缩水甘油丁酸酯(8)为原料发生亲核开环反应得到化合物(S)-1-(叔丁基二甲基硅氧基)-3-(2,4-二硝基-1H-咪唑-1-)丙-2-醇(9),然后用四氢-2H-吡喃(DHP)保护羟基,再经水解,合环,脱保护基,烷基化得到PA-824(1),总收率35%。

HPLC-MS/MS法测定比格犬血浆中PA-824的浓度及其药动学研究

目的:建立高效液相色谱-质谱连用(HPLC-MS/MS)测定比格犬血浆中PA-824的浓度,以及进行PA-824在比格犬体内的药动学研究。方法:以卡马西平为内标,生物样品预处理采用乙酸乙酯萃取。色谱柱为Eclipse Plus C18柱(100 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为甲醇-水(90∶10),流速为0.6 ml·min^(-1),柱温为30℃,进样量为5μl,样品分析时间为5 min;电喷雾电离源(ESI),正离子多反应监测扫描分析,PA-824离子对为m/z 360.1→m/z 175.0(碰撞能量:35,解簇电压:65),卡马西平离子对为m/z 237.2→m/z 194.0(碰撞能量:28,解簇电压:83)。比格犬口服给药之后,在不同的时间点取血测定血浆中PA-824的含量,然后再用DAS 2.0软件进行药代动力学参数的计算。结果:比格犬口服给药之后,PA-824在50~10 000 ng·ml^(-1)(r=0.999 1)范围内呈线性关系,回收率为97.7%~105.1%,日内、日间精密度RSD均<5.0%。PA-824 3个不同给药量(100,200,500 mg)的AUC0-t分别为(5 735.18±1 918.76),(11 548.47±1 838.04),(21 987.88±4 587.58)ng·min·ml^(-1),t1/2分别为(14.17±5.97),(11.11±4.39),(13.13±5.46)h,Cmax分别为(626.66±188.48),(2 399.13±516.51),(4 861.33±2 253.61)ng·ml^(-1)。结论:该方法简单、准确、快速、重复性好,适用于比格犬血浆PA-824的药代动力学研究。

结核分枝杆菌对PA-824耐药的体外诱导及稳定性研究

目的体外诱导并获得结核分枝杆菌（MTB）对PA-824的耐药菌株。方法选取MTB标准株H37Rv，在PA-824浓度二倍递增的含药培养基上进行传代培养，逐步诱导菌株对PA-824耐药，测定多种抗结核药物对PA-824耐药株的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC），并对耐药株测序鉴定ddn和fgd1基因的突变情况。将耐药株在无药固体培养基上连续传代培养10代以观察耐药稳定性。结果H37Rv经逐步诱导后得到5株MTB单克隆，它们对PA．824的MIC值是诱导前8倍以上，且对TBA．354同时发生交叉耐药。测序结果显示fgd1基因未发生突变，但5株均检测到ddn基因突变。耐药株在无药固体培养基上连续传代10代后，MIC值无明显变化。结论通过二倍递增体外诱导可以获得对2种硝基咪唑类（nitroimidazoles）药物均耐药的MTB菌株；MTB对硝基咪唑类药物的耐药可能与ddn基因突变有关；MTB对硝基咪唑类药物的耐药稳定性较强，不易复敏。

Pretomanid(PA-824)治疗耐多药结核病的应用建议

耐多药结核病治疗疗程长达18~24个月、药物不良反应重、患者治疗依从性差,部分患者因耐药谱广泛,不能选择二线抗结核药物组成有效的治疗方案,导致死亡率高。因此,耐多药结核病治疗新药的研究是全球结核病控制的重要问题,也是我国改变耐多药结核病防治现状亟待解决的问题。全球结核病药物研发联盟研发的pretomanid(PA-824)与贝达喹啉和利奈唑胺组成的BPaL方案,针对严重耐多药结核病的治疗,具有疗程短、全程口服、治疗依从性高、治愈率高等优势,为严重耐多药结核病患者的治疗带来了新的希望。该方案于2020年被世界卫生组织在全球推荐使用。目前,贝达喹啉和利奈唑胺两种药品已经在我国上市,并作为二线抗结核药物用于耐多药结核病治疗。因此,亟待PA-824能早日在我国获批使用,以挽救更多耐多药结核病患者的生命。为此,中国防痨协会联合中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心组织全国结核病防治、临床和基础研究等领域的专家,经反复讨论撰写了《Pretomanid(PA-824)治疗耐多药结核病的应用建议》,以期为加快PA-824及BPaL方案在我国的注册使用提供参考。

结核分枝杆菌德拉马尼和PA-824耐药相关机制研究进展

结核病仍是全球十大死因之一,而耐药结核病的出现,给全球结核病的防控工作带来了极大的困难与挑战。德拉马尼和PA-824(Pretomanid)同为硝基咪唑类抗结核药物,对耐多药结核病及广泛耐药结核病均有较好的疗效,尤其是PA-824与贝达喹啉和利奈唑胺组成的BPaL方案对高度耐药的结核病患者具有更高的治愈率。但近年来有研究表明,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对德拉马尼和PA-824已经出现了耐药现象。准确及时的对德拉马尼和PA-824耐药菌株进行检测,可有效避免耐药现象的加剧并提高药物的临床应用效果。本文综述了MTB对德拉马尼和PA-824耐药的机制及相关基因突变情况,以期为今后德拉马尼和PA-824耐药株的快速检测及其在临床上的合理应用提供参考。

抗结核候选药物PA-824的合成工艺优化

对抗结核候选药物PA-824的合成方法进行了优化。以4-硝基咪唑为原料,依次经亲核开环氧反应、氧烷基化反应和脱酯基反应制得(S)-3-(4-硝基-1 H-咪唑-1-)-2-[(4-三氟甲氧基)苄氧基]丙烷-1-醇(3);3在铜催化下发生分子内碳氢键活化烷氧化反应合成PA-824,总收率达到56.5%,其结构经1H NMR,13CNMR和MS(ESI)确证。

PA-824的合成方法改进

本实验提出了改进抗结核临床筛选药PA-824(1)的合成方法,以2-溴-4-硝基咪唑和缩水甘油硅醚为原料,亲核进攻开环反应得到(S)-1-(叔丁基二甲基硅氧基)-3-(4-硝基-1H-咪唑-1-)丙烷-2-醇(4),然后用对三氟甲氧基苄溴与羟基反应得到的中间体(6)再脱保护基,直接环合得到PA-824(1),总收率44.0%。

大鼠血浆PA-824的HPLC-MS/MS测定及药动学研究

目的建立高效液相色谱一质谱联用（HPLC-MS／MS）法测定PA-824在大鼠血浆中浓度，并进行药动学研究。方法以甲硝唑为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白，富集生物样品中的PA-824，然后进行HPLC-MS／MS检测。色谱柱为Inertsil ODS3 C18 colunm（150min×4．6mm，5μm）；C18保护柱（50min×4．6mm，5μm），流动相为甲醇一0．03％三乙胺溶液（90：10），流速0．5mL·min^-1，采用电喷雾电离源，正离子多反应监测扫描分析，PA-824和内标的离子选择通道分别为荷质比（m／Z）360．1→m／z 175．0（CE=30，DP=66），m／z 172．1→m／z 128．0（CE=21，DP=53），柱温30℃；大鼠灌服给药后．于不同时间点取血测定血浆中药物的含量，利用DAS2．0版软件计算其药动学参数。结果PA-824在0．1～10．0μg·mL^-1范围内呈线性关系，平均回收率均〉92．13％，RSD均〈6．6％。大鼠灌服PA-824后浓度一时间曲线下面积[AUC（0-i）]为（3297．503±320．958）mg·L^-1·min^-1，AUC（0-∞）、为（3558．315±338．860）mg·L^-1·min^-1，达峰时间（tmax）为（360．000±64．143）min，峰浓度（Cmax）为（3．5±0．3）μg·mL^-1。结论该方法快速、精确、简便，可用于大鼠血浆中PA-824的测定及药动学研究。

结核病临床诊治进展年度报告(2011年)(第二部分 结核病临床治疗)

一、抗结核新药的研究进入21世纪以来,抗结核药物的研究取得了较大进展,遴选出了20余种化合物,其中10余种已进入了临床前及临床研究阶段。（一）硝基咪唑类药物硝基咪唑类药物是对Mtb有较高活性的一类新的化合物。其中,PA-824和OPC-67683已在进行治疗结核病的Ⅱ期临床试验中。

具有抗结核活性的硝基咪唑类化合物的研究进展

结核病是目前世界上仅次于艾滋病的第二大致死感染性疾病。近10年来,抗结核药物开发已取得很多实质性进展。其中硝基咪唑类化合物很有希望成为新型抗结核化疗药物,防治结核病。这类化合物可有效地缩短了治疗时间,并对耐药性结核分枝杆菌菌株有效。在目前研究开发的硝基咪唑类化合物中,PA-824、OPC-67683目前已进入抗结核病的临床2期实验,这对具有抗结核活性的硝基咪唑类化合物的未来发展方向有着重要意义。本文综述了这些具有抗结核活性的硝基咪唑类化合物的研究历程和目前的发展状况。

耐药结核病的药物治疗及研究进展

近年来,耐药结核病的流行越来越严重,全球范围内的耐药结核病对各国的公共卫生已构成了严重威胁,各国的专家学者都在关注耐药结核病的产生原因,并开展大量的研究遏制耐药结核病的发展。本文检索并分析了关于耐药结核病产生以及治疗药物的相关报道,对耐药结核病的发生机制、诊断方法以及最新的治疗药物报道进行了综述。

负载抗结核药物与骨形态发生蛋白2缓释微球的3D打印人工骨能促进骨髓间充质干细胞成骨

背景:脊柱结核病灶清除术后局部有效药物浓度不足及残留骨缺损的修复是目前脊柱结核治疗的难题,新型抗结核药物联合骨形态发生蛋白2成为解决该问题的新思路,可有效促进骨缺损修复。目的:观察PA-824、莫西沙星和吡嗪酰胺/骨形态发生蛋白2/纳米羟基磷灰石抗结核人工骨对兔骨髓间充质干细胞成骨分化和黏附能力的影响。方法:提取并纯化兔骨髓间充质干细胞;以纳米羟基磷灰石为材料,制备含抗结核药物PA-824、莫西沙星和吡嗪酰胺与骨形态发生蛋白缓释微球的3D打印人工骨,并与第3代骨髓间充质干细胞共培养,作为实验组;将骨形态发生蛋白2与骨髓间充质干细胞共培养,作为阳性对照组;将骨髓间充质干细胞单独培养,作为空白对照组。培养第1,3,7,14,21天检测兔骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化及细胞黏附效果,以评估该人工骨对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响,以CCK-8法检测细胞增殖和细胞毒性,以钙结节沉积程度及碱性磷酸酶表达活性评价成骨分化效果,荧光定量PCR和Western blot法检测成骨相关基因和蛋白表达水平,扫描电镜观察细胞黏附特性。结果与结论:①新合成的抗结核人工骨微观结构呈现良好的空间性,利于细胞附着;②CCK-8法检测结果表明各组细胞均增殖良好,其中实验组、阳性对照组持续14 d呈现增殖状态,空白对照组7 d后趋于平稳状态,说明此人工骨具有良好的生物相容性;③碱性磷酸酶活性呈先上升后降低的变化趋势,至14 d达到高峰,在第7,14天时阳性对照组碱性磷酸酶活性高于实验组(P<0.05),但第21天时实验组高于阳性对照组,而空白对照组在各时间点变化不大;④茜素红染色实验显示实验组、阳性对照组均有钙结节形成,两组钙结节数量和大小差别不明显;两组成骨相关基因和蛋白(Runx2和Ⅰ型胶原蛋白)表达均高于空白对照组(P<0.05);⑤扫描电镜下观察到细胞在支架上紧密黏附,且呈“八爪”状或长梭形生长;⑥结果表明,新合成的抗结核人工骨具有独特的空间结构和良好的生物相容性,能促进骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化,是一种理想的骨组织工程材料。

硝基咪唑类抗结核药物结构修饰研究策略

结核病现已成为全球第二大致死疾病,虽然目前结核病的发生率呈现缓慢下降趋势,但耐药结核及耐多药结核仍是严重威胁人类健康的疾病.近年来,以PA-824,OPC-67683为代表的硝基咪唑类药物对结核杆菌尤其是耐多药结核杆菌表现出良好的抗菌活性.研究者进行了大量硝基咪唑化合物的构效关系研究,期望通过结构修饰改善其溶解性及安全性.综述了近年来硝基咪唑类化合物在抗结核领域的研究进展.

抗感染药

11066 FDA批准Zmax单一剂量疗法；11067 阿奇霉素新配方与标准治疗等同；11068 J＆J公司购得新的广谱抗生素；11069 氟喹诺酮与ICU中多重耐药细菌相关；11070 PA-824将开始Ⅰ期试验；11071 结核药物开发需“兴奋剂”……

对付结核病的新武器

“那是动脉血！”诗人约翰·基茨（Ｊｏｈｎ Ｋｅａｔｓ）在检查其手帕上的污物时不禁脱口而出。作为曾是一名受过培训的医生，他自然明白这意味着什么。夺去基茨生命的就是肺结核（ＴＢ），另外也叫肺病，痨病；用约翰·班扬（Ｊｏｈｎ Ｂｕｎｙａｎ）的话说，此病乃“所有致死性疾病之首”。

钯催化2,3-二氢咪唑并[2,1-b]噁唑类衍生物的合成

目的建立一种高效、温和的钯催化构建2,3-二氢咪唑并[2,1-b]噁唑杂环的方法,并用于合成CGI-7341及PA-824关键中间体。方法通过条件筛选,以Pd2(dba)3为催化剂、John Phos为配体、Cs2CO3为碱、甲苯和四氢呋喃为溶剂、反应温度为90℃的最优反应条件,制备一系列2,3-二氢咪唑并[2,1-b]噁唑类衍生物。结果与讨论成功构筑了2,3-二氢咪唑并[2,1-b]噁唑杂环,并制备了一系列衍生物,有效地提高了CGI-7341及PA-824关键中间体的收率,为快速高效构建含硝基咪唑并噁唑类抗结核化合物奠定了基础。