PA-X基因的长度变化对H3N2犬流感病毒复制能力和致病性的影响

H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)已在中国多地的犬群中流行,是禽流感跨宿主感染并形成新分支的近期案例。研究表明,PA-X基因与甲型流感病毒适应新宿主的能力相关,且其长度能够影响甲型流感病毒的复制及致病能力。为了解PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV复制能力及致病力的影响,本研究利用H3N2 CIV的8质粒操作系统,拯救了三株重组H3N2 CIV毒株:PA-X基因表达大小为232个氨基酸多肽的亲本病毒CIV_PA-X_232;对PA编码区第191、192位氨基酸的密码子进行改造,PA-X基因不表达蛋白的重组病毒CIV_PA-X_Knock;对PA+1编码区第232位氨基酸进行突变,PA-X基因表达大小为252个氨基酸多肽的重组病毒CIV_PA-X_252。通过比较3株重组病毒的聚合酶活性,在MDCK细胞中的复制效率及对小鼠致病性的差异,来评价表达不同长度的PA-X基因对H3N2 CIV的影响。结果显示,CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_232,且CIV_PA-X_252的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_Knock;CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock在MDCK细胞中的复制能力显著(P<0.05)强于CIV_PA-X_232;小鼠攻毒试验结果显示,3株重组病毒对小鼠的体重变化无明显影响,且对小鼠无致死性;仅能在感染后第1天的小鼠肺中检测出3株重组病毒的TCID50,且病毒滴度无显著差异;3株重组病毒均能对小鼠肺造成病理损伤,其中,CIV_PA-X_252对小鼠的致病性最强,CIV_PA-X_232次之,CIV_PA-X_Knock对小鼠的致病性最弱。上述结果表明,PA-X基因的延长能够提高H3N2 CIV在MDCK细胞中复制能力和对小鼠肺造成病理损伤的能力,但该变化可能对H3N2 CIV在小鼠肺内的复制能力没有影响。本试验初步探究了PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV的影响,为后续H3N2 CIV致病机制的研究提供了初步的参考。

猪流感病毒新型核糖体移码蛋白PA-X特有序列的原核表达、纯化及鉴定

核糖体移码蛋白PA-X是流感病毒的一种新型蛋白,为了研究该蛋白对于猪流感病毒的生物学特性的影响,我们进行了PA-X特有序列的原核表达、蛋白纯化及其鉴定。通过RT-PCR和重叠PCR方法扩增PA-X特有序列的基因,利用基因重组技术构建原核表达载体,并进行菌液PCR和菌液测序鉴定,鉴定正确后克隆转化到BL21(DE3)中,进行蛋白表达及可溶性分析,同时用镍柱亲和层析法对其进行纯化。通过菌液PCR序列鉴定,PA-X特有序列的原核表达载体序列正确,编码框正确。转化BL21后目的蛋白表达成功,且大多数为可溶性蛋白。Western blot结果表明制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应性。

H9N2亚型禽流感病毒PA-X蛋白功能研究

本研究选取了一株H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/2093/2009毒株(简称A2093),分别构建了共表达PA-X和PA蛋白的真核表达质粒、单表达PA蛋白和PA-X蛋白的真核表达质粒,研究PA-X对宿主蛋白表达及流感病毒聚合酶活性的影响。结果显示:同时表达PA-X和PA蛋白可以强烈抑制宿主蛋白表达,单独表达A2093的PA-X同样具有较强抑制宿主蛋白表达的功能,而仅表达PA蛋白不影响宿主蛋白表达;在A2093的复制子系统中PA-X缺失后聚合酶活性明显提高;利用反向遗传操作技术拯救出缺失PA-X的A2093ΔPA-X毒株,在MDCK和LMH细胞上比较其与亲本A2093毒株复制能力的差异,发现在MDCK和LMH细胞上,从接种后12~36 h的不同时间点A2093ΔPA-X比A2093病毒低度明显降低。

利用GST pull-down联合质谱技术鉴定H7N9禽流感病毒PA-X的互作蛋白

【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白。利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析。【结果】经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质。通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程。对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位。【结论】利用GST pulldown联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础。

PA-X蛋白对HH9N2亚型禽流感病毒致病性的影响

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在我国家禽中循环存在,可跨种间传播感染人,对公共卫生产生重大影响。PA-X蛋白是流感病毒PA基因核糖体移码后编码的一种新蛋白,对病毒的致病性起调控作用。试验通过反向遗传技术构建并拯救了H9N2 AIV SH7株的PA-X变异病毒SH7-FS株,使PA-X的表达量下降至原来的0.2%^([1]),测定野生型SH7株和变异病毒SH7-FS株在不同来源细胞中的生长曲线,并通过小鼠感染试验测定病毒在肺中病毒载量及其对肺的病理损伤来分析其对小鼠的致病性。结果表明:SH7-FS株对小鼠的致病力比野生型SH7株低,造成的小鼠肺部炎症比SH7株轻。SH7株和SH7-FS株在小鼠体内复制能力无显著差异,但是SH7-FS株在Vero细胞和MDCK细胞上复制水平比SH7株低,推测PA-X蛋白是协助病毒更好适应环境的辅助蛋白。研究结果为H9N2 AIV PA-X蛋白的生物学功能的探索提供了理论基础,推进了人们对于流感病毒PA-X蛋白功能的认识。

霉菌性鼻窦炎的CT表现及其病理学基础

【目的】探讨霉菌性鼻窦炎CT表现及病理学特点，以提高对本病的认识和诊断水平。【方法】回顾性分析28例经手术病理证实的霉菌性鼻窦炎，其中病变累及单侧上颌窦者17例，累及一侧上颌窦及同侧筛窦者5例，累及一侧上颌窦及同侧筛窦、鼻腔者3例，累及双侧上颌窦者3例。【结果】霉菌性鼻窦炎CT表现主要为：病变窦腔内软组织影充填22例，病灶内斑点、条片样钙化26例，窦腔骨壁增厚20例，窦腔缩小16例，骨壁破坏5例。病理表现为被覆假复层纤毛柱状上皮黏膜组织中有较多炎性渗出物、坏死物及淋巴细胞和多形核细胞浸润，可见茵丝、孢子。【结论】病变内钙化影的出现是本病的主要CT表现，是诊断该病较为可靠的依据。

X波段12W GaAs功率放大器MMIC

基于0.25μm Ga As赝配高电子迁移率晶体管（PHEMT）工艺研制了一款可工作在脉冲和连续波条件下的X波段高性能大功率放大器（HPA）。根据Ga As材料的导热特性和热分布特点,设计了能够在连续波条件下工作的功率器件,并提取了器件的EEHEMT可定标模型参数。HPA原理图设计采用低损耗高效率母线拓扑结构,并基于最优效率原则优化了HPA各级阻抗匹配参数。对HPA容易出现的几种稳定性问题进行了分析,并在设计过程中采取了相应的防范措施。采用电磁场仿真技术优化设计的HPA芯片尺寸为3.5 mm×4.0 mm。在栅源电压为-0.7 V,漏源电压为8 V,工作频率为9～10 GHz的条件下,连续波输出功率达到12 W以上,功率附加效率大于45%,在9.6 GHz时功率附加效率达到50%。

纳米Cu固体材料的X射线衍射与正电子湮没研究

采用自悬浮-冷压法,在不同压力下制得纳米Cu固体材料并对其在不同温度和保温时间下进行退火,利用X射线衍射(XRD)和正电子湮没寿命谱(PAS)分析对材料的结构和微观缺陷进行了表征。XRD分析表明,压制而得的样品晶粒度为20 nm,低于300℃退火3 h后并未发现晶粒显著长大;PAS分析表明,压制后的样品缺陷主要为单空位和空位团,大空隙很少,随着退火温度的升高和退火时间的延长,单空位通过扩散结合成空位团,大空隙也在温度较高时分解为空位团,导致空位团的含量增加,而单空位和大空隙的含量降低。

PA 6/PET共混体系的X射线衍射分析

用宽角Ｘ射线衍射分析，考察尼龙６／ＰＥＴ共混体系的结晶态，表明在共混物中尼龙６和ＰＥＴ是各自结晶的，即晶相分离的。研究了结晶条件、组份比等对晶态结构的影响，发现共混体系相对结晶度低于纯组份的算术加和，说明共混体系的结晶相分离过程中，由于存在相互作用导致的干扰。

黄色肉芽肿性胆囊炎CT和病理特征

【目的】探讨黄色肉芽肿性胆囊炎（XGC）的CT和病理特征。【方法】回顾性分析经手术病理证实的13例XGC患者的CT影像学和病理学资料。【结果】13例XGC均表现为胆囊壁不同程度增厚，增强扫描增厚的胆囊壁轻一中度强化，n例增厚的胆囊壁内见条片状、结节状低密度影，增强扫描低密度影均无明显强化；7例囊内壁光整，黏膜线连续；6例黏膜面毛糙，不完整；13例胆囊内见均见结石，4例累及肝脏，5例与周围肠管粘连、分界不清；13例病理特点均表现为胆囊壁特征性的黄色肉芽肿结构，主要为泡沫样组织细胞，大量纤维组织增生，伴有淋巴细胞和浆细胞浸润，6例黏膜糜烂、渍疡形成。【结论】XGC的CT表现及病理具有一定的特征性，CT检查有助于XGC的诊断。

支气管黏液表皮样癌的CT诊断及鉴别

目的分析支气管黏液表皮样癌的CT表现。方法回顾性分析5例经病理学确诊的支气管黏液表皮样癌的CT资料。结果 5例均为单发肿瘤,中央型4例,周围型1例。中央型中1例呈支气管腔内型,表现为右主支气管内边界清楚的等密度类圆形结节,相应基底支气管壁稍增厚;其余3例呈支气管腔内-外型,表现为支气管腔内、外生长的等及稍低密度不规则结节或肿块,1例边界较清晰,2例边界不清,2例伴有点状钙化。2例肿瘤远端条片肺不张,内见支气管黏液栓,近侧支气管腔内见黏液围绕肿瘤呈液性新月征。1例周围型呈左肺舌叶边界较清晰的等密度类圆形结节,边缘见浅分叶。CT增强后肿瘤强化均不均匀,4例中央型较明显强化,1例周围型中度强化。4例中央型均继发不同程度的支气管阻塞性改变,2例伴肺门及纵隔淋巴结肿大,1例伴中等量胸腔积液。结论CT对支气管黏液表皮样癌的诊断具有较大价值。

X射线光声成像的信号检测与仿真

通过理论仿真和实验检测结果,分析由医用直线加速器产生的X射线照射铅块所产生的光声信号特性.使用光电二极管搭建一个光电检测电路,检测到医用直线加速器所产生的脉冲X射线的光脉冲宽度约为4μs.采用K-wave工具包仿真分析脉冲宽度为几个微秒的光脉冲所产生的光声信号.搭建了一个光声信号检测系统,对比分析分别使用Olypus V301商用探头与自制的PZT-4陶瓷换能器时的检测性能.结果表明,两款探头都检测到了光声信号,V301商用探头检测结果与理论仿真波形一致性较好,但信噪比低,而本研究设计的PZT-4检测灵敏度高,但检测到的信号波形与理论仿真结果偏差较大.两款探头在检测脉冲宽度为4μs的X射线脉冲所产生的声信号时都存在不足,为更好的检测该光声信号,需设计一款中心频率在70 kHz附近、带宽较宽、检测灵敏度较高的探头.

Synthesis and Crystal Structure of Picrates of 3,5-Diamino-1,2,4-triazole

The title compound C2N5H6＋C6N3O7H2-was synthesized by the reaction of 3,5-diamino-1,2,4-triazole and picric acid in the mixture of ethanol and water solution.Single crystals suitable for X-ray measurement were obtained at room temperature.The structure was characterized by elemental analysis and IR and determined by X-ray diffraction analysis.Crystallographic data：C8N8H8O7,Mr = 328.22,monoclinic,space group C2/c with a = 22.815（2）,b = 4.8086（5）,c = 22.564（2）,β = 93.976（2）°,V = 2469.6（4）3,Dc = 1.766 g/cm3,Z = 8,μ = 0.156 mm-1,F（000） = 1344,the final R= 0.0309,wR= 0.0864.

杭州市2013年-2014年甲型H3N2流感病毒PA基因的进化分析

目的分析2013年-2014年杭州市甲型H3N2流感病毒PA基因及其编码蛋白的特征,揭示其分子特征与演化趋势。方法对76株H3N2流感病毒PA基因进行扩增和测序,采用序列多重比对、突变位点比较分析、选择压力分析、系统发育分析等方法进行遗传进化分析。结果 76株流感病毒PA基因的核苷酸序列、编码蛋白序列及PA-X蛋白序列一致性分别为98.28%~100.00%、98.46%~100.00%和98.41%~100.00%;PA蛋白以及PA-X蛋白的氨基酸序列与参考株A/Ohio/2/2012相比,分别有15个位点和2个位点发生了显著的氨基酸突变;筛选到321、432共2个正向选择压力位点;构建系统进化树发现PA基因分2个支系,支系Ⅱ有2个分支,第3个流行高峰集中在分支ⅡC上。结论杭州市2013年-2014年甲型H3N2流感病毒PA基因呈现出2个不同支系,编码蛋白的部分氨基酸位点发生了突变,个别位点具有正向选择压力,可能与病毒的复制能力和致病性的改变相关。

甲型流感病毒PA蛋白新成员的研究进展

流感严重地威胁着人们的生活和健康,研究流感病毒的蛋白组成将有助于流感病毒疫苗及检测试剂等的研发。流感病毒含有结构和非结构蛋白。最初人们认为甲型流感病毒的8个基因节段只能编码8个病毒蛋白,以后发现M基因和NS基因可以分别编码M2离子通道蛋白和非结构蛋白NS2。自2012年以来人们从甲型流感病毒中鉴定出了数种新的病毒蛋白,本文将主要介绍于2012年和2013年分别发现的甲型流感病毒PA蛋白新成员PA-X、PA-N155和PA-N182。

健康管理中代谢综合征与良性前列腺增生之间的关系

目的探讨健康管理中代谢综合征与良性前列腺增生之间的关系。方法选择2015年1月至2015年12月在本院健康管理中心进行健康检查的5 721例良性前列腺增生患者。测量身高、体重,计算体重指数(BMI),测量动脉压,检测血清前列腺特异抗原(PSA)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖、餐后血糖、尿酸(UA);行前列腺B超检查,测量前列腺体积。根据是否合并代谢综合征分为两组,合并代谢综合征组为观察组,不合并代谢综合征组为对照组,分析两组间代谢综合征各指标及前列腺体积的差别;分析代谢综合征各项指标与良性前列腺增生及前列腺体积的相关性。对合并代谢综合征组患者进行健康干预1年,观察前列腺体积及症状的变化。结果合并代谢综合征组患者中,BMI、TG、TC、血糖(空腹+餐后2 h)及前列腺体积、血清PSA均高于对照组;高血压、高甘油三酯血症与良性前列腺增生诊断相关;前列腺体积与肥胖、高血压、高密度脂蛋白降低和代谢综合征相关。进行健康干预后,代谢综合征的指标降低,患者良性前列腺增生的症状较前缓解。结论肥胖、高血压、高密度脂蛋白降低和代谢综合征相关;代谢综合征和良性前列腺增生存在一定的关系,对代谢综合征进行健康干预将有助于对良性前列腺增生的健康管理,从而延缓良性前列腺增生疾病的发生和发展。

CT动态增强技术在肝脏占位性病变诊断中的临床价值

目的 探讨动态增强CT技术在肝脏占位性病变诊断中的临床价值.方法 选取2013年3月至2015年10月收治的肝脏占位性疾病患者54例为研究对象,对所有患者均行CT平扫、动态增强扫描,分别记录分析病灶显示率和动脉期、门静脉期及延时期扫描的病灶、血管及肿块性质的CT表现.结果 平扫病灶显示率为64.16％,明显低于动态增强扫描中动脉期的98.33％、门脉期的81.67％和延迟期的78.33％,差异有统计学意义（均P＜0.01）;动态增强扫描中动脉期病灶显示率高于门脉期和延迟期,而门脉期高于延迟期（均P ＜0.05）;平扫病灶总检测率明显低于病理检测和动态增强三期扫描检测率（均P ＜0.01）;动态增强三期检测率与病理检测率差异无统计学意义（P＞0.05）;二期增强扫描与三期增强扫描的病灶边缘清晰度、血管清晰度和密度方面的比较差异有统计学意义（均P ＜0.05）;三期扫描对肝脏肿块恶性、良性确诊率明显高于二期扫描,且肿块性质判定与病理诊断相似度明显高于二期扫描（均P ＜0.05）.结论 动态增强CT扫描能够有效提高肝脏占位性病变的检出率,提高定性诊断及鉴别诊断,减少漏诊和误诊的发生.

广东省腰椎片检查受照剂量的调查与分析

目的了解广东省腰椎正、侧位片受检者的受照剂量水平。方法按照全国X射线诊断医疗照射的剂量水平调查方案进行。结果得出正、侧位腰椎片受检者的平均受照剂量分别是7.34和12.40 mGy。腰椎正、侧位片受检者的受照剂量男性为5.37和14.37 mGy,女性为6.69和11.79 mGy,体胖、体中、体瘦者分别为5.68和14.93 mGy、6.41和12.22 mGy、5.91和11.67 mGy,在省、市、县、镇级医院检查时所受照剂量的结果分别是6.20、6.93、7.01和8.85mGy;12.56、12.17、11.76和13.21 mGy,受照剂量与不同性别、体型、医院级别关系不大。结论其均值基本代表广东省腰椎正、侧位片受检者的受照剂量水平。

肾脏CT扫描在判断分肾功能中的价值

目的探讨肾脏CT扫描在判断分肾功能中的价值。方法选取2009年6月至2011年6月进行肾脏CT检查患者147例，男66例，女81例。年龄17～87岁，平均53岁。其中梗阻性肾积水73例，肾肿瘤74例。排除74个有肿瘤的肾脏，共220个肾脏。于CT检查后10d内进行肾动态显像（SPECT）检查测量GFR，根据GFR将患肾分为3组：肾功能正常组113个（GFR〉34ml／min）、肾功能轻度减退组66个（GFR20-34ml／min）和肾功能重度减退组41个（GFR〈20ml／min）。采用单因素方差及线性回归分析肾脏CT扫描结果与分肾功能之间的关系。结果肾功能正常组、轻度减退组和重度减退组CT检查测量的肾皮质厚度分别为（0．62±0．11）cm、（0．45-t-O．10）cm及（0．26±0．07）cm，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），肾皮质厚度与GFR高度正相关（r=0．806，P〈0．05）。CT增强扫描检查肾功能正常组、轻度减退组和重度减退组的皮质期CT值分别为（162．1±25．3）HU、（121．60±21．O）HU及（63．5±20．0）HU，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），皮质期增强程度与GFR高度正相关（r=0．851，P〈0．05），肾实质期和排泄期增强程度与GFR中度正相关（r±0．467和r=0．451，P〈0．05）。结论CT扫描显示的肾皮质厚度及皮质期增强程度对判断分肾功能有一定的临床价值。

急性重型颅脑损伤患者环池动态CT影像学改变的临床意义

目的研究急性重型颅脑损伤患者环池动态CT影像学改变的临床意义。方法回顾性分析135例急性重型颅脑损伤患者环池CT动态改变的影像学资料。按首次CT扫描环池形态将环池分为5级，按格拉斯哥预后评分随访6个月，观察环池形态动态变化与预后之间的关系。结果环池形态及其动态变化与急性重型颅脑损伤患者的预后密切相关，环池形态改变愈明显，其预后愈差，死亡率亦愈高，尤其是动态变化中加重者死亡率更高（79．5％），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论环池形态及其动态变化与急性重型颅脑损伤患者的预后密切相关，是判断其预后的有效指标，治疗过程中动态观察环池变化具有重要临床意义。