豌豆清蛋白1(PA1)基因的克隆及对苜蓿的转化

本研究用PCR方法从豌豆(食荚大菜豌)克隆出富含硫氨基酸、同时具有抗虫作用的双功能的蛋白质基因-豌豆清蛋白1(PA1)基因,并构建了植物表达载体pCAMBIAl301-PA1。采用农杆菌介导法转化了紫花苜蓿,并对其转化体系进行了优化,得到了多个转基因胚性愈伤组织及其再生植株。PCR和Southern杂交检测表明,PA1基因和潮霉素抗性基因已被整合到了宿主细胞。SDS-PAGE分析表明该基因在再生植株中有一定表达。游离氨基酸分析表明,PA1基因的表达转基因苜蓿中蛋氨酸和半胱氨酸的含量从0.1%提高到0.4%。

竞争抑制ELISA法检测植物中豌豆胰岛素PA1b

为研究豌豆胰岛素PA1b在植物生长发育中的作用,利用竞争抑制ELISA法,检测PA1b在豌豆、芋头、姜、西红柿、苦瓜、蒜头、洋葱、丝瓜、黄瓜等植物中的分布,以及PA1b在豌豆种子发芽过程中的含量变化。结果显示PA1b在豌豆中含量最高,且随着豌豆种子发芽时间的增加含量逐渐减少,PA1b可能对植物生长发育起调控作用。

NOBIAS PA1螯合树脂富集--ICP-MS定量测定近海水体中的稀土元素

稀土元素是海洋中一类极为重要的地球化学过程的示踪剂,但因其浓度多在pmol/kg数量级,分析测试一直是难点,为了使稀土元素在海洋研究中得到更广泛的应用,必须对海洋中低浓度的稀土元素进行准确测量。本研究建立了NOBIAS PA1螯合树脂富集—ICP-MS法,可以对近海的小体积水样中的稀土元素进行高准确度、高精密度分析。研究表明,调节样品溶液pH为4.59~4.69、清洗溶液为6 mL 0.05 mol/L NH_4AC、洗脱溶液为2 mL 1 mol/L HNO_3时,实验测试条件为最优。本方法对稀土元素的回收率在94%~106%,检出限范围为0.001~0.424 pmol/kg,分析精密度优于5%(n=5)。本研究所建立的方法,可用于河水、海水与河口盐度梯度区稀土元素的分析。

豆类活性肽PA1b在大肠杆菌中的多拷贝串联表达

为构建能表达串联豆类活性肽PA1b(peaalbumin 1 subunitb)基因的重组大肠杆菌,并进行诱导表达和产物纯化。通过合成PA1b基因,采用同尾酶技术构建1~4拷贝数的串联PA1b基因,分别克隆至pET32a(+)原核表达载体上,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,亲和层析纯化融合蛋白,肠激酶切除融合标签和切开串联体,获得单体PA1b肽。结果显示,大肠杆菌转化子中的重组质粒pET32a(+)-nPA1b(n=1~4)经PCR及测序验证正确,经1mmol/LIPTG25℃诱导8h,均能以包涵体形式表达出重组融合蛋白。SDS-PAGE分析结果表明,串联拷贝数越多,融合蛋白中PA1b含量越高。Ni-NTA亲和纯化得到高纯度的4拷贝串联PA1b融合蛋白,经肠激酶充分酶切、超滤浓缩后获得重组PA1b多肽。获得了表达1~4拷贝串联PA1b基因的重组大肠杆菌,并通过酶解4拷贝PA1b融合蛋白制备了重组PA1b,为多拷贝法制备PA1b肽奠定基础。

豆类活性肽PA1b研究进展

从豆科植物种子中提取的37个氨基酸残基的PA1b是一种富含半胱氨酸的结构紧凑的小分子多肽,理化性质稳定,对多种提取试剂和蛋白酶不敏感,能杀伤象鼻虫、蚜虫、蚊虫等害虫,具有开发成新型生物杀虫剂的巨大潜力。此外PA1b还是一种激素类蛋白,具有调节植物细胞生长分化和哺乳动物糖代谢等功能。综述了PA1b的结构、生物多样性、作用机制及异源表达等方面的研究进展,并展望了发展前景。

PA1 contributes tothe integrity of blood-testis barrier via the epigenetic regulation in sertoli cells

Sertoli cells play essential roles in the process of spermatogenesis such as maintaining the integrity of blood-testis barrier(BTB),engulfing sperm resid ual cytoplasm and secreting critical cytokines.PA1 has been reported to be a unique component of histone lysine methylation modification complex MLL3/4,regulating gene transcription by histone 3 lysine 4 methylation(H3K4me).However,it is unknown whether PA1 is involved in the epigenetic regulation in male reproductive system.

植物多肽PA1b打开胰腺β细胞L型钙通道促使钙内流和细胞分泌

利用海藻酸在pH2.7的条件下对小分子多肽的吸附作用,从豌豆种子中分离并纯化出含37个氨基酸的小分子肽PA1b(pea albumin 1b),它的肽链内具有6个半胱氨酸并形成一个胱氨酸结构模体.采用荧光显微技术和膜片钳技术,发现胞外施加PA1b在胞外钙离子存在的情况下使胰腺β细胞内钙离浓度增加,该效应被特异性的L型钙通道的阻断剂尼莫地平(nimodipine)阻断,在零钙外液中PA1b对胞内钙离子浓度无影响;此外,PA1b使β细胞膜去极化并使膜电容增加.因此推断PA1b使原代β细胞上去极化细胞膜,使L型钙离子通道开放,细胞外钙离子内流并促发细胞分泌.

PA1b, a plant peptide, induces intracellular [Ca^(2+)] in- crease via Ca^(2+) influx through the L-type Ca^(2+) channel and triggers secretion in pancreatic β cells

Using alginic acid to adsorb polypeptides at pH 2.7, we isolated a peptide pea albumin 1b (PA1b) from pea seeds. The PA1b is a single chain peptide consisting of 37 amino acid residues with 6 cysteines which constitutes the cystine-knot structure. Using microfluorometry and patch clamp techniques, we found that PA1b significantly elevated the intracellular calcium level ([Ca2+ ]i) and elicited membrane capacitance increase in the primary rat pancreatic β cells. The PA1b effect on [Ca2+]i elevation was abolished in the absence of extracellular Ca2+ or in the presence of L-type Ca2+ channel blocker, ni- modipine. Interestingly, we found that PA1b significantly depolarized membrane potential, which could lead to the opening of voltage-dependent L-type Ca2+ channels and influx of extracellular Ca2+, and then evoke robust secretion. In this study we identified the plant peptide PA1b which is capable of affecting the excitability and function of mammalian pancreatic β cell.

利用豌豆植物瞬时表达抗虫蛋白PA1b

PA1b是一种来源于豌豆种子的生物活性多肽,具有非常重要的生物杀虫活性,本研究以豌豆幼苗为材料,利用RT-PCR技术克隆抗虫基因PA1b,通过酶切连接技术构建了适用于豌豆植物的瞬时表达载体pCAPE2-PA1b,转化农杆菌GV3101后,利用真空侵染技术将含有PA1b及报告基因GFP的农杆菌分别接种发芽的豌豆种子,在0.08 MPa真空条件下侵染3~5 min后播种豌豆种子,预期在豌豆幼苗中瞬时表达抗虫蛋白PA1b,幼苗出土后利用手提式紫外灯跟踪观察,在报告基因GFP表达高峰期(幼苗出土后5~7 d)提取豌豆幼苗可溶性总蛋白,利用His标签抗体检测豌豆抗虫基因PA1b的表达,实验结果表明抗虫基因PA1b在豌豆幼苗中成功表达,为进一步分析PA1b抗虫机制提供基础。

Corrigendum: PA1426 regulates Pseudomonas aeruginosa quorum sensing and virulence: an in vitro study

There is an error in the title of the published paper "PA1426 regulates Pseudomonas aeruginosa quorum sensing and virulence: an in vitro study" (DOI: 10.1097/JBR.0000000000000088) because of a mistake in description and also oversight during final proof checking.[1] The correct one should be“PA2146 regulates Pseudomonas aeruginosa quorum sensing and virulence:an in vitro study.”

肝特异性表达HCV5′NCR调控荧光素酶质粒的构建及表达

小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白 ,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的 .以2 2 35A- 1质粒为模板 ,通过 PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段 ,用小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段取代 p HCV- neo4质粒 (含 HCV5′NCR调控荧光素酶基因 )的 CMV启动子 ,构建了一种白蛋白启动子启动转录的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 (p A1 b- HCV) .该质粒能在小鼠肝癌细胞中表达且较小鼠其它癌细胞中表达水平明显增高 ,表明成功地构建了肝特异性表达的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 .该研究为建立肝特异性表达的 HCV5′NCR转基因小鼠模型奠定了基础 ,对评价

非诺贝特对培养的兔脂肪细胞表达凝血和纤溶因子的影响

目的探讨非诺贝特对培养的兔脂肪细胞表达组织因子(TF)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的影响。方法取正常兔脂肪组织分离培养脂肪细胞,以不同浓度(分别为0,1,10和100μmol/L)非诺贝特孵育兔脂肪细胞24 h后收集细胞。RT-PCR测定脂肪细胞TF和PAI-1 mRNA表达。用ELISA方法测定TF和PAI-1浓度。结果不同浓度非诺贝特均可抑制兔脂肪组织细胞TF和PAI-1的表达和蛋白产生,其抑制作用呈浓度依赖性增强。在非诺贝特10μmol/L培养时兔脂肪细胞TF和PAI-1 mRNA分别为(0.504±0.016)和(1.500±0.096),明显低于对照[分别为(0.579±0.018)和(1.607±0.063),均P<0.01]。在非诺贝特100μmol/L培养时兔脂肪细胞TF和PAI-1 mRNA分别为(0.451±0.023)和(1.269±0.084),与对照比显著降低(均P<0.001)。结论非诺贝特能抑制兔脂肪细胞TF和PAI-1mRNA和蛋白的表达,提示非诺贝特可能具有独立于降脂作用外的抗血栓作用。

Aglycin在小鼠组织中的定位

在研究胃肠道生物活性肽时,从猪小肠中分离鉴定了一个蛋白aglycin.初步的研究表明,aglycin对糖代谢具有调节作用,为了进一步探讨aglycin在体内生理功能,本研究采用western blot和免疫组织化学的手段检测其在SD小鼠机体不同组织中的分布情况.结果显示在小肠、肌肉和脑组织中存在aglycin阳性免疫反应.

通络糖泰方对实验性糖尿病周围神经病变大鼠纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)影响研究

目的:观察通络糖泰方对实验性糖尿病周围神经病变大鼠,纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平的影响,并探讨其作用的可能机制。方法:选用SD大鼠以120 mg/kg体重隔日腹腔注射2%四氧嘧啶生理盐水溶液,按血糖值随机分为通络糖泰高、低剂量组,西药弥可保合二甲双胍组,模型组,另设正常对照组。分别用不同剂量的通络糖泰浸膏(0.72 g/kg.d,2.88 g/kg.d),弥可保0.1 mg/kg.d、二甲双胍50 mg/kg.d和生理盐水灌胃,每天1次,给药12周后通过葡萄糖氧化酶法、酶联免疫法及生化检测等方法,测定各组大鼠空腹血糖(FPG)、糖化血清蛋白(GSP)、神经纤溶蛋白酶原激活物抑制物1(PAI-1)活性水平、神经电生理传导速度。结果:各治疗组均可改善DPN大鼠的坐骨神经传导速度(P<0.05或P<0.01);各治疗组均可降低PAI-1水平(P<0.05或P<0.01)。结论:通络糖泰对糖尿病大鼠周围神经病变有治疗作用,可能与降低2型糖尿病周围神经病变大鼠的PAI-1水平有关。

胰岛素抵抗与凝血、纤溶系统功能异常

胰岛素抵抗(insulinresistance,IR)是代谢综合征的中心环节,可导致多种代谢异常而引起肥胖、2型糖尿病等疾病。在IR状态下会引起多种凝血因子和纤溶因子包括组织因子、vWF、纤维蛋白原和PAI-1的血浆含量异常,从而导致凝血、纤溶系统功能紊乱。IR属心血管系统疾病的危险因子。由其导致的高胰岛素血症也已成为冠心病、动脉粥样硬化的独立危险因子。

利用药剂诱导玉米孤雌生殖Pa_1代植株的倍性变异

为研究药物诱导玉米孤雌生殖植株的倍性变异 ,用 2 %DMSO + 4 0mg/kgMH诱导掖单1 3号等材料获得结实。实验结果表明 ,孤雌生殖根尖体细胞以二倍体细胞最多 ,其次为非整倍体细胞 ,其它异倍体和单倍体细胞极少。Pa1 植株可分为二倍体和混倍体两类 ,以二倍体占绝对多数的混倍体植株最多。

化瘀解毒汤对肾小球硬化症PAI-1mRNA的影响

目的 :旨在探讨化瘀解毒汤延缓慢性肾衰、肾小球硬化的机理。方法 :采用单肾切除加重复尾静脉注射阿霉素的大鼠肾小球硬化模型 ,用原位杂交的方法检测肾组织PAI -1mRNA的表达。结果 :PAI -1mRNA在正常组肾小球内弱阳性表达 ,模型组表达明显高于各中药治疗组、西药治疗组及正常组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。西药治疗组表达略高于各中药治疗组 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。中药各治疗组之间比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :化瘀解毒汤可能通过下调肾小球PAI -1mRNA基因的表达 ,促进肾小球细胞外基质降解 ,从而达到延缓肾小球硬化作用。

PTIP相关蛋白1在小鼠睾丸发育过程中的表达及定位

目的探索PTIP相关蛋白1(PTIP associated protein 1,PA1)在小鼠睾丸发育过程中的表达定位。方法采用RTPCR、实时定量PCR和免疫组织化学方法,对PA1在小鼠睾丸不同发育阶段的表达及定位进行检测。结果 RT-PCR和实时定量PCR结果显示,PA1 m RNA在1w、2w、4w、8w、12w、18w和24w的小鼠睾丸中均有表达,且其表达量在2w时达到最高峰,在小鼠性成熟(8w)以后,PA1的表达量趋于平稳。ABC法免疫组织化学染色显示PA1在1w、2w、4w和8w小鼠睾丸各级生精细胞、支持细胞和间质细胞的胞核中均有表达,免疫荧光双标进一步确定PA1表达于支持细胞和间质细胞。结论 PA1可能在维持生精细胞的正常分化及调节睾丸内分泌的平衡中起重要作用。

海洋沉积物孔隙水中痕量金属元素的测试分析方法

孔隙水是沉积物-海水界面链接沉积物颗粒和上覆水体的一个重要过渡相态,针对其研究可更好地了解痕量金属在固-液界面的早期成岩过程。近年来,针对孔隙水中痕量元素研究的方法较为匮乏,为此建立了一种分析测定海洋沉积物孔隙水中7种痕量金属元素(Mn、Cu、Zn、Ni、Cd、Co、Pb)的方法,该方法使用Nobias PA1树脂进行富集分离,再使用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)进行测试,可针对孔隙水中的痕量金属元素进行准确分析。通过实验结果发现该方法最优实验条件为:Nobias PA1树脂富集时的pH值为5.5~6.0,洗脱酸浓度为1.3 mol/L硝酸,体积为1 mL。同时,样品需进行紫外消解4 h以上以分解有机络合物,该消解步骤对Cu和Co这两种元素尤其重要。该方法通过加标回收获得Mn、Cu、Ni、Co和Pb的回收率在92%~100%,Zn和Cd的回收率分别为72%和82%;Mn、Cu、Zn、Ni的方法检出限范围为0.03~0.53 nmol/L,Cd、Co、Pb的方法检出限范围为2.66×10^(-3)~8.60×10^(-3)nmol/L,满足孔隙水中痕量金属浓度的测试需求。同时,根据检出限计算的结果显示,孔隙水样品只需1 mL,即可应用该方法进行测试。应用该方法测试了一根采集于北黄海中部沉积物短柱的孔隙水样品,测试结果显示其垂相分布合理、较符合早期成岩过程规律。此研究为分析海洋沉积物孔隙水中痕量金属元素提供了一种准确而简便的方法。

高血压患者血压正常子女的运动肾显像研究

目的 观察原发性高血压 (EH)患者其血压正常子女 (NOH)是否存在潜在的、与遗传有关的肾功能损伤并探讨导致该异常的可能机理。方法 分别对 31例NOH、31例无高血压家族史的血压正常年轻人 (NON)、2 1例高血压双亲及 10例血压正常的老年人进行静息与运动介入99Tcm DTPA动态肾显像。结果 NOH组静息双侧肾脏高峰时间、平均通过时间比NON组显著延长 ;运动状态下此差异更为显著 ,且肾小球滤过率、肾脏指数显著低于NON组 ,2 0min计数 高峰计数比值比NON组显著增高 ;上述各组分别有 4 ,0 ,5 ,2例受试者出现明显异常的运动肾显像。结论 NOH存在潜在的、与遗传有关的肾功能损伤 ;肾脏在EH的遗传和发病中可能起重要作用。