磷酸二酯酶PA4781对铜绿假单胞菌运动能力及毒力的影响

目的探讨磷酸二酯酶PA4781对细菌运动能力及毒力的影响。方法通过测量菌苔的直径检测细菌的运动能力,利用刚果红染色和苯酚-硫酸显色法检测细菌生物膜分泌胞外多糖的能力。通过实时荧光定量PCR检测介导蹭行运动的基因PilZ、与胞外多糖合成有关的基因PelA以及控制绿脓菌素的基因PhzM的mRNA表达量。利用琼脂糖凝胶电泳检测细菌不同时间段内产生的胞外DNA量,通过测量菌斑在牛奶平板中透明圈的直径检测胞外蛋白酶的总活性。结果相比于PA03野生型菌株,PA4781敲除菌株的运动能力及PilZ的mRNA表达量降低,PA4781过表达菌株的运动能力及PilZ的mRNA表达量增高,差异均有统计学意义(均P<0.05);相比于PA03野生型菌株,PA4781敲除菌株分泌的胞外多糖及PelA的mRNA表达量增多,PA4781过表达菌株分泌的胞外多糖及PelA的mRNA表达量减少,差异均有统计学意义(均P<0.05);PA4781敲除菌株和PA4781过表达菌株的胞外DNA分泌量、绿脓菌素基因PhzM的表达量及胞外蛋白酶的水解能力均低于PA03野生型菌株,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PA4781可能通过促进基因PilZ的表达,从而促进铜绿假单胞菌的运动能力。PA4781可能通过抑制基因PelA的表达,抑制胞外多糖的分泌。同时,PA4781可能不直接影响胞外DNA分泌量,毒力因子绿脓菌素和胞外蛋白酶的产生。