PACAP受体激活对抗Aβ_(25-35)致神经元凋亡作用的观察

目的和方法 :本研究采用体外原代培养新生大鼠海马神经元的方法探讨了垂体腺苷环化酶激活多肽(PACAP)对抗淀粉样蛋白 (Aβ2 5-3 5)致凋亡的作用机理。结果 :2 5 μmol/L的Aβ蛋白处理神经元 5d即有明显的凋亡特征出现。PACAP2 7(P2 7)在正常情况下对海马神经元无明显营养作用 ,但当Aβ导致神经元凋亡时P2 7有显著的保护作用 ,可以提高神经元的活性 ,减少细胞凋亡数目 ,降低基因组小片段DNA含量。PACAP受体拮抗剂PACAP6 - 2 7(P6 - 2 7)可以逆转P2 7的保护作用。结论 :研究结果说明PACAP通过受体激活参与对抗Aβ的神经毒性效应。

启动子荧光素酶报告系统检测低浓度过氧化氢激活神经肽PACAP特异受体PAC1-R启动子的作用

垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)特异受体PAC1-R(PACAP receptor 1)是神经系统疾病药物开发的重要靶点。为了研究其表达的生物学机制,本研究克隆了PAC1-R基因转录起始位点上游从-2 500到+26的2 526 bp启动子片段,构建PAC1-R启动子驱动的荧光素酶基因报告载体p GL3-PAC1-Rp,并确证PAC1-R启动子荧光素酶报告系统在小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中工作正常。运用此PAC1-R启动子荧光素酶报告系统,首次发现低浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)有效激活PAC1-R启动子,此作用可被转录因子特化蛋白1(specificity protein 1,SP1)抑制剂光神霉素A(mithramycin A)所抑制,提示SP1参与介导H_2O_2对PAC1-R启动子的激活作用。生物信息学分析显示,PAC1-R启动子含有多个SP1结合位点。PAC1-R启动子的荧光素酶报告系统的构建为深入探索PAC1-R高表达的作用与机制奠定了基础,低浓度H_2O_2对PAC1-R启动子激活作用的发现有助于深入诠释低浓度活性氧的生理学作用。

胃癌细胞垂体腺苷环化酶激活肽相关受体的分析

垂体腺苷环化酶激活肽(PACPA)属血管活性肠肽(VIP)家族的脑肠肽,它广泛分布于胃肠道,并参与许多胃肠功能的调节。在胃粘膜细胞及十二指肠、胰腺等组织细胞上存在有PACAP受体;研究亦发现,胰腺癌细胞膜上也表达PACAP受体,提示它可能与某些消化系肿瘤有一定关系,但是在胃癌细胞膜上是否存在PACAP受体,尚未见报道。

垂体腺苷酸环化酶激活肽增加新生大鼠小脑颗粒细胞钙通道电流

应用膜片箝"全细胞"电流记录方法，研究了垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）对新生大鼠小脑颗粒细胞高电压激活（HVA）的钙电流作用。实验结果发现：PACAP－38、PACAP－27能明显增加小脑颗粒细胞钙电流的幅值，两者增加钙内流的效应无显著差异，并且都具有脱敏现象；而出于同一家族的血管活性肠肽（VIP）对此电流却没有任何影响。当记录电极内加入GTPγS后，PACAP增加钙电流的效应成为不可逆；而细胞内液加入GDPβS或预先用百日咳毒素孵育细胞12h后，PACAP的钙通道激活作用完全消失。此外，细胞内应用cAMP和磷酸二酯酶抑制剂3－isobutyl－1－methylxanthine（IBMX），既不影响钙通道本身的活动，也不修饰PACAP增加颗粒细胞钙通道电流的效应。我们的结果提示：新生大鼠小脑颗粒细胞上存在着具有功能意义的PACAP受体，该受体被PACAP－38和PACAP－27激活后可增加细胞膜上钙通道的开放，促进钙内流。PACAP的这种作用与百日咳毒素敏感的G蛋白偶联，但并不依赖腺苷酸环化酶参与的第二信使系统。

High-voltage-activated calcium current and its modulation by dopamine D_4 and pituitary adenylate cyclase activating polypeptide receptors in cerebellar granule cells

小脑颗粒细胞是离体单细胞水平中枢神经元生物学研究的理想模型．随着细胞发育，其ＨＶＡ钙电流的基因表达、门控性质和药理学特征发生明显变化，提示钙电流涉及颗粒细胞的成熟和兴奋性的产生．多巴胺通过激活膜上的Ｄ４受体抑制Ｌ型钙电流，这种抑制效应并不需要腺苷酸环化酶系统的参与．功能性Ｄ４受体的首次发现不仅有助于研究抗精神病药，更揭示了多巴胺也参与小脑神经元之间的兴奋传递过程．ＰＡＣＡＰ则通过激活其Ｉ受体增加钙内流和钙库的释放使胞浆内钙浓度提高，ＰＡＣＡＰ的钙通道刺激效应可能需要ＰＬＣ系统的介导，并与颗粒细胞的成熟和成活有关．