PACE4组织芯片免疫组化检测方法的比较

目的探讨非小细胞肺癌组织偶合基本氨基酸裂解酶4(PACE4)免疫组织化学(简称免疫组化)检测方法,寻求其实验条件的规范化。方法172例非小细胞肺癌组织按照ABCAM抗体手工免疫组化的结果分为3组:A组(45例)弥漫强阳性,评分为9~12分;B组(66例)局灶阳性,评分为1~<9分;C组(61例)阴性,评分为0分。采用ABCAM和KALANG 2种PACE4抗体,石蜡切片行手工免疫组化染色技术(手工染色)和全自动免疫组化机器染色技术(全自动染色),比较2种染色方法的染色结果。结果ABCAM和KALANG 2种PACE4抗体手工染色和全自动染色在样本中着色效果均较良好。全自动染色整体检测结果与手工染色有良好的可重复性,与手工染色比较,全自动染色背景更干净,对比更清晰;且大大缩短了染色时间,节省了人力,更有利于整体科研实验工作的安排,可使免疫组化实验流程具有可重复性、流程可靠。结论ABCAM及KALANG 2种抗体的免疫组化染色效果无显著差异,整体有良好的可重复性。全自动染色背景更干净,对比更清晰,省时省力,从规范和效率角度出发,全自动免疫组化染色可以更好地解放双手,同时得到更理想的实验结果。

PACE4对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究前体蛋白转化酶枯草溶菌素(PACE4)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌细胞凋亡的作用及其可能的作用机制。方法:构建pFLAG-PACE4重组表达载体并转染H9c2心肌细胞。将心肌细胞分为四组:正常对照组(无任何干预因素)、ISO组(10μmol/L ISO)、ISO+pFLAG组(空载质粒pFLAG转染+10μmol/LISO)、ISO+pFLAG-PACE4组(pFLAG-PACE4重组表达质粒转染+10μmol/LISO)。采用AnnexinV-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测活性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-12、钙网蛋白、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)和PERK的表达以及真核起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平。结果:与正常对照组相比,ISO组中PACE4表达水平明显降低,而转染pFLAG-PACE4质粒后,其表达水平显著增加。PACE4过表达可以显著抑制ISO诱导的细胞凋亡和caspase-3以及caspase-12的蛋白表达。ISO处理显著增加内质网应激分子钙网蛋白、GRP78和CHOP的表达,而PACE4过表达则可以抑制这些蛋白的表达。ISO诱导的PERK、eIF2α和ATF4的表达可以显著被PACE4过表达抑制。结论:PACE4过表达可以抑制ISO诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其机制可能与PERK信号通路介导的内质网应激反应有关。

配对碱性氨基酸裂解酶4在甲状腺结节中的表达

目的比较配对氨基酸转换酶4(paired amino acids converting enzyme 4,PACE4)亚型PACE4-FL和PACE4-CT在良性和恶性甲状腺结节中的表达分布情况,为其作为鉴别甲状腺良恶性结节生物学标志物提供参考数据。方法查找鞍山市肿瘤医院2017—2020年接受甲状腺切除术的患者的甲状腺组织块。根据病理分型对其进行分类,恶性结节选择乳头状癌、滤泡癌和髓样癌。良性结节,选择增生型、胶质、腺瘤型结节、滤泡腺瘤以及甲状腺炎类型。使用PACE4的亚型-全长PACE4蛋白即PACE4-FL及其替代亚型PACE4-CT抗体对相应的组织切片进行免疫染色。对肿瘤病变区域和其周围的正常组织进行比较,由有经验的病理医生对染色情况进行评估分析。结果非病变甲状腺组织不表达或低表达PACE4-FL,差异有统计学意义(P<0.01)。恶性结节组PACE4-FL表达率明显高于良性结节组,差异有统计学意义(P<0.01),PACE4-FL免疫染色特异性为95.8%。在恶性病变区域,PACE4-FL在典型的乳头状癌变中表达最明显。与此相反,在滤泡型乳头状癌中均呈低表达。在滤泡癌中,60%显示免疫染色高表达。良性结节中,PACE4-CT在病变和非病变(正常)的组织中表达大体相同,差异无统计学意义(P>0.05)。而在恶性结节中,PACE4-CT在病变区域中的表达明显低于相邻非病变区域。结论PACE4-FL和PACE4-CT在甲状腺恶性肿瘤中高、低差异性表达,尤其是PACE4-FL的差异性表达有望成为检测或筛选甲状腺癌的一个潜在生物学标志物。