PACE4组织芯片免疫组化检测方法的比较

目的探讨非小细胞肺癌组织偶合基本氨基酸裂解酶4(PACE4)免疫组织化学(简称免疫组化)检测方法,寻求其实验条件的规范化。方法172例非小细胞肺癌组织按照ABCAM抗体手工免疫组化的结果分为3组:A组(45例)弥漫强阳性,评分为9~12分;B组(66例)局灶阳性,评分为1~<9分;C组(61例)阴性,评分为0分。采用ABCAM和KALANG 2种PACE4抗体,石蜡切片行手工免疫组化染色技术(手工染色)和全自动免疫组化机器染色技术(全自动染色),比较2种染色方法的染色结果。结果ABCAM和KALANG 2种PACE4抗体手工染色和全自动染色在样本中着色效果均较良好。全自动染色整体检测结果与手工染色有良好的可重复性,与手工染色比较,全自动染色背景更干净,对比更清晰;且大大缩短了染色时间,节省了人力,更有利于整体科研实验工作的安排,可使免疫组化实验流程具有可重复性、流程可靠。结论ABCAM及KALANG 2种抗体的免疫组化染色效果无显著差异,整体有良好的可重复性。全自动染色背景更干净,对比更清晰,省时省力,从规范和效率角度出发,全自动免疫组化染色可以更好地解放双手,同时得到更理想的实验结果。

PACE4对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究前体蛋白转化酶枯草溶菌素(PACE4)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌细胞凋亡的作用及其可能的作用机制。方法:构建pFLAG-PACE4重组表达载体并转染H9c2心肌细胞。将心肌细胞分为四组:正常对照组(无任何干预因素)、ISO组(10μmol/L ISO)、ISO+pFLAG组(空载质粒pFLAG转染+10μmol/LISO)、ISO+pFLAG-PACE4组(pFLAG-PACE4重组表达质粒转染+10μmol/LISO)。采用AnnexinV-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测活性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-12、钙网蛋白、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)和PERK的表达以及真核起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平。结果:与正常对照组相比,ISO组中PACE4表达水平明显降低,而转染pFLAG-PACE4质粒后,其表达水平显著增加。PACE4过表达可以显著抑制ISO诱导的细胞凋亡和caspase-3以及caspase-12的蛋白表达。ISO处理显著增加内质网应激分子钙网蛋白、GRP78和CHOP的表达,而PACE4过表达则可以抑制这些蛋白的表达。ISO诱导的PERK、eIF2α和ATF4的表达可以显著被PACE4过表达抑制。结论:PACE4过表达可以抑制ISO诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其机制可能与PERK信号通路介导的内质网应激反应有关。