非小细胞肺癌中uPA和PAI-2的表达及其临床意义

【目的】探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)及其抑制因子PAI-2蛋白的表达,分析两指标与临床病理学指标的关系。【方法】应用免疫组织化学方法检测108例NSCLC组织中uPA和PAI-2蛋白的表达,分析它们与性别、年龄、肿瘤的大小、癌的组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移、手术后总生存期的关系。【结果】108例NSCLC组织uPA和PAI-2的阳性率分别为38.9%和43.5%;uPA的表达在男性组和淋巴结转移组的阳性率分别明显高于女性组和无淋巴结转移组,且随着NSCLC临床分期的升高,uPA的阳性率也明显升高(P<0.05);鳞癌组织中PAI-2的表达明显较腺癌组织中高(P<0.05);uPA和PAI-2的表达均与术后生存期的长短有密切关系。【结论】NSCLC组织中uPA和PAI-2的表达与肿瘤的生物学行为有着密切关系,影响着患者的预后,对uPA和PAI-2蛋白表达的干预,可能可以改变NSCLC的预后。

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在大肠杆菌中的表达和分离纯化

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）ｃＤＮＡ，与ｐＵＣ１８重组，经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析，获得全长人ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ．ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ与原核表达载体重组，构建原核表达质粒并转化大肠杆菌．经温度诱导表达，重组ＰＡＩ－２占全菌总蛋白的１４％，以可溶性形式存在，具纤溶抑制活性．工程菌发酵、压榨后，用硫酸铵分级沉淀，沉淀物经分子筛、离子交换和疏水性色谱的分离，每升菌液可获得约３０ｍｇ纯度达９０％的蛋白质，比活性为１１８６６ＡＩＵ／ｍｇ蛋白质，得率为１９．２％．

正常妊娠妇女和妊娠期高血压疾病患者血浆TAFI和PAI-2变化的研究

目的:探讨凝血酶活化的纤维蛋白溶解抑制物(TAFI)和纤维酶原激活抑制物-2(PAI-2)在正常妊娠妇女和妊娠高血压疾病患者血浆中的变化及其临床意义。方法:研究对象包括22例妊娠期高血压疾病患者(其中子痫前期10例、妊娠期高血压12例)、30例正常妊娠妇女和30例正常未孕妇女,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定研究对象妊娠早、中、晚三期血浆中的TAFI和PAI-2抗原水平。结果:与未孕对照组比较,正常妊娠组妊娠各期PAI-2均明显升高,差异均有显著统计学意义(P均<0.01),而TAFI在孕晚期才明显高于未孕组,差异有统计学意义(P<0.05),与正常妊娠组比较,妊娠期高血压组妊娠三期中TAFI、PAI-2抗原水平差异无统计学意义(P>0.05),子痫前期组妊娠三期TAFI明显高于正常妊娠组,而PAI-2均低于正常妊娠组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:TAFI、PAI-2在正常妊娠妇女发挥着纤溶抑制作用,维持母体凝血和纤溶的平衡。TAFI是一个预测子痫前期的敏感指标,有助于预测子痫前期患者血栓前状态的形成,而PAI-2不能用来判断母体内纤溶水平变化,但可能预示不良妊娠结局。两者对于妊娠期高血压患者的临床意义不大。

tPA和PAI-2在兔角膜碱烧伤修复过程中的作用

目的 研究兔角膜碱烧伤后修复过程中 ,组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)和 2型纤溶酶原激活剂抑制剂 (PAI 2 )的作用。方法 在构建离体和在体兔角膜碱烧伤模型的基础上 ,采用细胞培养、组织切片、免疫细胞化学以及图象分析等技术。结果 tPA的表达在碱烧伤后 2 4小时左右达到峰值 ,而PAI 2则在伤后4 8小时表达最高 ,离体表达部位位于胞浆 ,并相对靠近胞膜和核膜 ,在体表达部位主要位于角膜上皮层。结论 tPA和PAI

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因，与ｐＰＵＣ１８重组，经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析，获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组，构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒，转化ＧＳ１１５宿主菌，经表型筛选和ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆，用甲醇诱导表达，重组ＰＡＩ－２以分泌型表达，占分泌总蛋白的３０％，具ＰＡＩ－２抗原性，与低分子量尿激酶形成了抗ＳＤＳ复合物，具抑制纤溶的活性（９１．４ＡＩＵ／ｍｌ）．对培养条件也进行了探讨．

人胚胎表皮角蛋白细胞分化中PAI-2表达的研究

目的 通过研究人胚胎期表皮分化中PAI 2的表达及变化规律 ,探讨PAI 2与人表皮角蛋白细胞的关系。 方法 用免疫细胞化学及原位杂交技术对早、中、晚期人胚胎表皮角蛋白细胞染色 ,观察PAI 2蛋白及其mRNA原位分布、合成情况 ;用免疫细胞化学及核酸斑点杂交实验检测离体培养的人胚胎表皮角蛋白细胞中PAI 2的表达情况。 结果 PAI 2在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层角蛋白细胞内。胚胎期的表达高峰在胚胎中期 ,胚胎晚期其蛋白水平开始降低 ,而mRNA则维持在相对高位。PAI 2聚集于原位及离体培养的角质蛋白细胞胞浆近胞膜处。 结论 PAI 2可能参与了表皮角蛋白细胞分化的调控。

伴高甘油三酯血症的2型糖尿病患者PAI-1活性变化及机制探讨

目的 探讨伴高甘油三酯血症的2型糖尿病患者血浆纤溶酶原激活物抑制物-1 (PAI-1) 活性变化及机制。方法 对108例2型糖尿病患者和40例健康对照者分别运用等位基因特异性PCR扩增技术测定PAI-1基因启动子区4G/5G多态性, 发色底物法测定血浆PAI-1活性。结果 (1) 伴高甘油三酯血症的2型糖尿病组患者血浆PAI-1活性明显高于单纯糖尿病组及对照组(P<0. 001); (2) 伴高甘油三酯血症的2型糖尿病患者和不伴者的4G/4G、5G/5G基因型频率间差别无显著性意义(P>0 .05); (3)血浆PAI-1活性与4G/5G基因多态性及空腹胰岛素存在显著相关性(P<0. 01); (4) 甘油三酯与PAI-1活性的相关性与基因类型有关, 4G/4G基因型者甘油三酯与PAI-1活性密切相关(r=0.42,P<0. 01), 4G/5G和5G/5G者相关性不明显(P>0 .05)。结论 糖尿病患者PAI-1活性升高是环境和遗传因素共同作用的结果, 高甘油三酯和PAI-1活性的相关性与4G/5G基因多态性有关。

疏血通对2型糖尿病合并冠心病患者血浆PAI-1及D-二聚体作用的临床观察

目的观察疏血通治疗糖尿病合并冠心病血浆纤溶酶原活化物抑制剂-1(PAI-1)及D-二聚体(DD)变化并观察其心绞痛及心电图ST-T的改善。方法将糖尿病合并冠心病患者120例随机分为治疗组60例(在冠心病常规二级预防的基础上加用疏血通治疗14d),对照组(冠心病常规二级预防)60例,分别观察两组治疗前后血浆PAI-1、DD、血浆凝血酶原时间(PT),活化的部分凝血活酶时间(APTT)、国际标准化比值(INR)的变化;心绞痛症状及心电图ST-T改善情况。结果治疗组治疗后PAI-1下降(P<0.05),PT、APTT、INR延长(P<0.05),15例(25%)患者DD值较治疗前升高,但差异无统计学意义(P>0.05),45例(75%)患者较治疗前降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组PAI-1、DD、PT、APTT、INR的变化差异无统计学意义,治疗组心绞痛症状及心电图的ST-T较对照组有明显改善。结论疏血通可安全有效降低2型糖尿病合并冠心病患者血浆PAI-1、DD,延长PT、APTT、INR,并明显改善2型糖尿病合并冠心病患者心绞痛症状及心电图ST-T。

PAI-2ΔCD突变体的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

目的构建ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体基因，实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ的分离纯化方法。方法用ＰＣＲ扩增ＰＡＩ－２ΔＣＤ基因，经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后，突变体基因与原核表达载体ｐＬＹ－４重组并转化蛋白酶缺陷型菌株ＪＦ１１２５。经温度诱导表达，表达产物用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后，经高压匀浆破菌，用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实在相应相对分子质量处出现表达条带，约占全菌总蛋白的１５％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实表达产物具有ＰＡＩ－２免疫原性，溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。５Ｌ发酵菌液可得湿菌约１００ｇ，经多步纯化后，每升发酵菌液可得纯度达９７％的ＰＡＩ－２ΔＣＤ约３６ｍｇ，比活性为２８６４０ＡＩＵ／ｍｇ。结论成功构建了ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体，实现了在大肠杆菌中的表达，并成功地分离纯化了重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ蛋白。

2型糖尿病患者血和尿中t-PA、PAI-1的变化及其临床意义

目的探讨2型糖尿病患者血和尿t-PA及PAI-1浓度的变化,了解它们在糖尿病血管病变中的变化及其临床意义。方法根据尿白蛋白排泄率(UAER)将37例2型糖尿病患者分为两组:正常白蛋白尿组(DM)17例,微量白蛋白尿组(DN)20例。另取正常健康者20例作为对照组。用ELISA法分别检测3组的血浆和尿液t-PA及PAI-1浓度。结果尿液中t-PA浓度在正常白蛋白尿组低于正常对照组(P<0.05);微量白蛋白尿组明显低于正常对照组(P<0.01)。结论尿液中t-PA浓度较血浆浓度更能反映中糖尿病的肾脏血管病变。

PAI-2基因多态性与冠心病的相关性研究

目的：探讨PAI-2基因多态性与汉族家族性冠心病的关系。方法：采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）对57例汉族家族性冠心病病人（冠心病组）以及62名汉族无冠心病家族史的健康人（对照组）的PAI-2基因型和等位基因频率分布进行分析，研究它与冠心病的相关性。结果：PAI-2基因Ser／Cys^413（15588位点）G／C多态性等位基因频率在冠心病组和对照组间的分布均有显著性差异（P〈0．05）。Logistic回归分析显示：CC、GG基因型与冠心病相关，且CC是冠心病发病的危险因素（OR=2．405，95％CI：1．059～5．667），GG是冠心病发病的保护性因素（OR：0．303，95％CI：0．089～1．029）。等位基因频率的相对风险分析发现，C等位基因携带者患冠心病的风险是G等位基因的28．88倍（OR=28．88，95％CI：1．96～437．62）。结论：PAI-2基因Ser／Cys^413（15588）G／C多态性与冠心病的发病具有相关性，其中C等位基因是冠心病发病的遗传易感因素，而G等位基因是冠心病发病的保护因素。

罗格列酮对2型糖尿病患者血脂水平和血浆PAI-1活性的影响

目的观察罗格列酮对2型糖尿病患者血脂水平和血浆纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)活性的影响。方法60例2型糖尿病患者随机分为常规治疗组和罗格列酮治疗组,每组30例,另选择20例健康体检者作为正常对照组。常规治疗组和罗格列酮治疗组分别于治疗前和治疗后12周检测空腹血糖(FPG)、血脂水平,采用发光底物法测定全部观察对象的PAI-1的活性。结果治疗12周后罗格列酮治疗组的血清甘油三酯(TG)下降、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高,血浆PAI-1活性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论罗格列酮可改善糖尿病患者的代谢紊乱,减少血浆PAI-1的表达,有助于改善或延缓糖尿病合并动脉粥样硬化的发生。

PGI_2/TxA_2、tPA/PAI动态平衡与黑色素瘤B_(16)侵袭率的关系

目的了解肿瘤侵袭率与ＰＧＩ２／ＴｘＡ２和ｔＰＡ／ＰＡＩ平衡的关系。方法参照Ｎｉｃｏｌｓｏｎ报道的方法建立体外黑色素瘤Ｂ１６侵袭血管内皮细胞单层模型，利用放射免疫酶联技术检测肿瘤侵袭过程中，ＰＧＩ２、ＴｘＡ２、ｔＰＡ、ＰＡＩ时相性分泌变化，以探究ＰＧＩ２／ＴｘＡ２、ｔＰＡ／ＰＡＩ比值变化，在肿瘤侵袭和转移过程中的作用。结果在肿瘤侵袭过程中，总ＰＧＩ２、ＰＡＩ分泌量呈下降趋势，ＴｘＡ２和ＰＡＩ分泌呈上升趋势；黑色素瘤Ｂ１６细胞能够通过分泌ｔＰＡ、ＰＡＩ、ＰＧＩ２和ＴｘＡ２来破坏血液循环系统中ＰＧＩ２／ＴｘＡ２和ｔＰＡ／ＰＡＩ平衡；ＰＧＩ２／ＴｘＡ２、ｔＰＡ／ＰＡＩ比值变化，肿瘤侵袭率呈对应性变动。结论ＰＧＩ２／ＴｘＡ２和ｔＰＡ／ＰＡＩ分泌的平衡失调可能是肿瘤侵袭和转移形成的重要原因之一。

血浆PAI-1、胱抑素C与2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨血浆PAI—1、CysC与2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化的关系。方法用放射免疫法及生物化学法检测133例患者血浆PAI—1、胱抑素C水平。结果（1）2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化组血浆PAI-1、胱抑素C水平与正常对照组、单纯2型糖尿病组比较差异有统计学意义俨〈0．05）。（2）回归分析显示：PAI-1、CysC与2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化独立相关（OR=1．133、1．012E7，P〈0．01）。结论PAI-1、CysC与2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化相关，可能成为2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化患者的预测指标。

准噶尔盆地滩坝砂石油地质特征及勘探意义--以排2井沙湾组为例

排2井位于准噶尔盆地西缘车排子高凸起带。排2井新近系沙湾组"滩坝砂"是在第三纪类前陆盆地演化阶段的挤压背景下,随着车排子凸起的不断右旋、隆升,在盆地斜坡上形成"湖进扇摆"作用,由湖浪改造扇三角洲并在其前端或侧翼再沉积而成。"滩坝砂"具有岩性细、较疏松、厚度薄、累积概率曲线呈两段式、C-M图表现为以PQRS段为主、成分成熟度及结构成熟度中等、自然电位曲线呈指形、电阻率曲线呈半漏斗状的沉积特征及电性特征。充注轻质油后的"滩坝砂"油藏具有"强振幅、中低频率、高吸收系数"的地球物理属性特征和"周围边界清晰、上凸下平"的振幅能量分布特征。研究认为,"滩坝砂"是一种规律分布的储集群体,储集物性好,易形成岩性油气藏,具有较好的勘探前景。

鄂尔多斯盆地油坊庄油田长2油层组储层宏观非均质性研究

油坊庄油田长2油层组发育水上分流河道、天然堤、决口扇、沼泽等沉积微相类型,储集砂体以水上分流河道砂体为主,天然堤等次之。顺着物源方向,砂体连通性较好,物性较好,非均质性弱;垂直于物源方向砂体连通性、物性较差,非均质性强。储层层内非均质性较强,储集砂体垂向韵律以正韵律为主,不利于水驱油。长2油层组单砂层数越多,层间非均质性越强。综合研究表明,储层非均质性受沉积环境控制。

姬塬地区上三叠统长2油层组高岭石胶结与储层评价

姬塬地区长2油层组次生孔隙在储层砂岩的孔隙构成中比值偏大,成岩作用对储集空间的发育具有明显的控制优势。同时,该区长2油层组高岭石分布是鄂尔多斯盆地中南部较为集中且相对偏高的地区,显示出姬塬地区长2油层组在大气水作用、次生孔隙发育等方面具有特殊性。通过对该区高岭石胶结物含量和分布特征的研究,综合考虑储层物性的平面变化特征、沉积相带、构造高点等影响因素,对有利的储层区块提出了建议。

血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1基因启动子多态性与2型糖尿病、高血压病、冠心病的关系

目的:探讨中国人群中血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)基因变异和2型糖尿病(DM)、高血压病、冠心病的关系。方法:对281例门诊及住院病例,根据口服糖耐量试验(OGTT)分为非DM组(糖耐量正常者,糖耐量低减者)和2型DM组;并根据血压分为高血压病(HT)组和非高血压病(NGT)组。分析他们PAI-1基因启动子多态性。结果:2型DM者和非DM者相比:PAI-1基因型频率及等位基因频率有明显的统计学差异(x2分别为6.0和6.3,P<0.05);在DM组中冠心病者和非冠心病者相比:冠心病者PAI-1基因型频率及等位基因频率具有明显的统计学差异(x2分别为6.9和7.6,P<0.05和P<0.01);非条件多因素Logistic回归发现:冠心病和年龄有显著关系(P<0.001),与PAI-1基因多态性也有显著意义(P<0.01),与肥胖也有明显意义(P<0.05)。结论:PAI-1基因启动子多态性可能是冠心病的遗传因素;PAI-1基因突变可能是2型DM并发冠心病的危险因素;年龄、肥胖可能是冠心病的危险环境因素。

止消通脉宁对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞CTGF、PAI-1、MMP-9 mRNA表达的影响

目的观察止消通脉宁药物血清(以下简称"药物血清")清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养。实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测CTGF、PAI-1和MMP-9 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF、PAI-1 mRNA表达显著上升,MMP-9 mRNA表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。经止消通脉宁药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA表达逐步下降,MMP-9 mRNA表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF、PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关。

葛根素和缬沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏保护作用的对比研究

目的 :探讨葛根素对 2型糖尿病大鼠是否具有肾脏保护作用。方法 :通过饮食诱导和化学诱导相结合的方法建立 2型糖尿病动物模型 ,随机分为四组 ,即正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病缬沙坦治疗组和糖尿病葛根素治疗组。于 2 0周末留取 2 4h尿测尿Alb ,断头取血测定血糖、血脂、Scr、BUN及PAI - 1活性 ,并切取肾脏进行光镜及电镜观察。结果 :葛根素及缬沙坦治疗后糖尿病大鼠尿白蛋白排泄明显减少 ,血浆及肾组织PAI - 1活性明显降低 ,肾功能、体视学指标明显改善。结论