欧芹苯丙氨酸脱氨酶cDNA在乳酸乳球菌中的表达研究

将欧芹（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍｃｒｉｓｐｕｍ）苯丙氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）ｃＤＮＡ亚克隆到组成型表达载体ｐＭＧ３６ｅ启动子Ｐ３２下游，电穿孔法转化乳酸乳球菌，获得有ＰＡＬ表达活性的乳酸乳球菌工程菌（ｐＭＧ３６ｅＰＡＬ／Ｌ．ｌａｃｔｉｓＭＧ１３６３）。通过递归ＰＣＲ合成了一段１２０ｂｐ的调控片段，用以将ｐＭＧ３６ｅ改造为分泌型表达载体ｐＸＨＳ，以翻译偶联的方式表达ＰＡＬ，可使ＰＡＬ的Ｎ末端带上ｕｓｐ４５信号肽，结果亦检测到ＰＡＬ酶活性。自行分离克隆了乳酸乳球菌热休克蛋白基因ｄｎａＪ的启动子区域，构建了热诱导表达载体ｐＸＨＪ，获得ＰＡＬ热诱导表达工程菌（ｐＸＨＪＰＡＬ／Ｌ．ｌａｃｔｉｓＩＬ１４０３），经３０℃至３７℃热诱导，可使ＰＡＬ表达活性提高至２倍。