长链非编码RNAPANDAR在肾癌中的表达分析及临床意义

目的检测长链非编码RNA PANDAR在肾癌及癌旁组织中的表达水平,探讨其在肾癌中的临床意义。方法提取48对组织(肾癌及对应癌旁组织)中的总RNA,经逆转录获得c DNA后通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)方法检测PANDAR表达量,分析正常组织与肾癌组织中的表达差异,探讨其表达水平与患者临床特征之间的联系。结果肾癌组织中PANDAR的表达水平明显低于配对癌旁正常组织(P<0.001),标本中共有38例(79.17%)肾癌标本PANDAR表达下调,癌组织中PANDAR表达与患者TNM分期和AJCC分级相关,与患者年龄、性别及肾癌病理类型无明显相关性(P>0.05),PANDAR低表达组患者生存率低于高表达组患者(P<0.05)。结论 PANDAR在肾癌组织中表达明显下调,且和肾癌TNM、AJCC分级和预后相关,提示其有作为肾癌标志物应用于临床的可能。

PANDAR在分化型甲状腺癌中的表达及临床意义研究

目的探讨PANDAR在分化型甲状腺癌(DTC)中的表达及其临床意义。方法选取97例DTC患者的DTC组织及其配对的癌旁正常组织(距癌组织>2cm),采用qRT-PCR法检测其PANDAR表达水平并进行比较;采用PCR法检测DTC组织BRAFV600E突变情况。以DTC组织PANDAR表达水平的平均值为截点,将患者分为PANDAR高表达组(≥平均值)、低表达组(<平均值),比较两组患者临床病理特征与BRAFV600E突变情况。结果 DTC组织PANDAR表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。PANDAR高表达组患者56例,低表达组41例。与低表达组比较,PANDAR高表达组患者T分期较晚、淋巴结转移率较高、TNM分期较晚、肿瘤复发率较高(均P<0.05),BRAFV600E突变率也较高(P<0.05)。结论 PANDAR在DTC组织中表达上调,PANDAR高表达的患者预后较差。

长非编码RNA PANDAR在舌鳞状细胞癌中的功能研究

目的探究长非编码RNA(lncRNA)PANDAR在舌鳞状细胞癌中的表达及调控机制。方法利用实时定量荧光PCR(q RT-PCR)检测PANDAR在舌鳞癌临床样本及细胞系的表达水平,通过CCK-8法及流式细胞仪分析检测敲低PANDAR对舌癌细胞增殖和凋亡的影响。qRT-PCR和Western-blot检测敲低PANDAR对凋亡相关基因Bax表达的影响。结果 LncRNA PANDAR在舌鳞癌样本和细胞系内均显著高表达。敲低PANDAR可抑制Cal27和SCC25细胞的增殖并促进其凋亡。此外,敲低PANDAR有利于Bax蛋白的表达。结论 PANDAR在舌鳞癌组织中高表达。PANDAR通过下调促凋亡基因Bax的表达,促进舌鳞癌细胞的增殖并抑制其凋亡。

长链非编码RNA PANDAR在恶性肿瘤发生发展中的作用

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)最初被认为是不具有功能的"转录噪声",但越来越多的研究发现,lncRNA的失调在很多肿瘤中起着癌基因或抑癌基因的作用,是癌症发展的关键分子。PANDAR作为一种重要的lncRNA受到了诸多关注。有研究证明,PANDAR在许多肿瘤中特异性表达,在大多数肿瘤中上调,但在非小细胞肺癌中显著下调,PANDAR的特异性表达与肿瘤大小、TNM分期和总生存率显著相关。本文通过对lncRNA PANDAR在恶性肿瘤细胞中的主要作用模式、表达情况、作用机制及对各类肿瘤发生发展的影响进行综述,旨在为临床恶性肿瘤生物学诊治疗提供新的靶标。

长链非编码RNA PANDAR在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs)近年来成为研究的热点。lncRNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)在多种肿瘤中表达上调,其主要通过结合核转录因子Y(NF-Y)抑制细胞凋亡激活因子的转录等途径参与肿瘤的发生、发展。进一步研究发现,PANDAR还可作为肿瘤预后标志物,在肿瘤的早期诊断、疗效判断及预后评估等方面具有重要的应用前景。

长链非编码RNA PANDAR对骨肉瘤细胞阿霉素耐药的机制研究

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)PANDAR对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及对阿霉素化疗耐药的影响,并探讨其机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测骨肉瘤细胞系和人正常成骨细胞及阿霉素耐药骨肉瘤细胞中lncRNA PANDAR和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因相对表达水平。抑制lncRNA PANDAR表达后,采用qPCR和蛋白质印迹法检测Bcl-2的相对表达水平;同时过表达Bcl-2,CCK-8检测各组细胞增殖情况,Annexin V-FITC PI染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率。在耐药与非耐药的骨肉瘤细胞培养基中加入阿霉素检测各组细胞生存率。结果与人正常成骨细胞相比,骨肉瘤细胞中lncRNA PANDAR过表达(P<0.05)。抑制lncRNA PANDAR表达后,骨肉瘤细胞中Bcl-2表达下调(P<0.05)。抑制lncRNA PANDAR表达后,细胞增殖能力明显减弱(P<0.05),凋亡增加(P<0.05),而过表达Bcl-2后,凋亡减少(P<0.05)。在耐药与非耐药的骨肉瘤细胞培养基中加入阿霉素,抑制lncRNA PANDAR后,肿瘤耐药能力减弱,加入Bcl-2后部分恢复,si-lncRNA PANDAR对肿瘤耐药的抑制作用在非耐药细胞中效果更为明显(P<0.05)。结论lncRNA PANDAR可通过调控Bcl-2的表达而调节骨肉瘤细胞的增殖、凋亡和化疗耐药,参与骨肉瘤的发生、发展。

LncPANDAR通过靶向miR-637调控甲状腺癌增殖、转移的机制研究

目的:探究长链非编码RNA PANDAR(long-chain non-coding RNA PANDAR,PANDAR)促进甲状腺癌生长转移的分子机制。方法:首先运用实时荧光定量PCR测定甲状腺癌患者血清和癌组织中PANDAR表达情况,再通过MTT、流式、Transwell等方法测定PANDAR对甲状腺癌细胞生长、凋亡、迁移能力的影响,通过双荧光素酶报告基因实验确定PANDAR的作用靶点为miR-637,最后再测定miR-637在PANDAR对甲状腺癌细胞生长、凋亡和迁移能力中的作用。结果:PANDAR在甲状腺癌患者血清和癌组织中表达明显升高,且PANDAR能明显促进细胞生长和迁移,并抑制细胞凋亡,且PANDAR的作用靶点为miR-637,miR-637能逆转PANDAR诱导的细胞增殖、转移和凋亡减少。结论:PANDAR通过靶向miR-637调节甲状腺癌的增殖和转移。

lncRNA PANDAR对宫颈癌细胞、耐受细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨lncRNA PANDAR对宫颈癌细胞顺铂(Cisplatin)耐受及敏感性的影响。方法构建顺铂耐受的宫颈癌细胞HeLa-DDP,用1、2、4、8、16μg/mL浓度顺铂处理亲本HeLa细胞及HeLa-DDP;将PANDAR重组质粒及慢病毒载体sh-PANDAR转染HeLa-DDP、HeLa细胞,设置control组、vector组、PANDAR组、sh-NC组及shPANDAR组;qRT-PCR检测PANDAR表达,CCK-8检测细胞活性,流式检测细胞凋亡。结果与亲本HeLa细胞比较,HeLa-DDP细胞显示出强的顺铂耐受性(P <0.05)。与亲本HeLa细胞比较,PANDAR在HeLa-DDP细胞中的表达水平显著降低(P <0.05)。与control组比较,PANDAR过表达可显著降低Cisplatin作用下HeLa-DDP细胞的存活率(P <0.05),同时增加细胞凋亡率(P <0.05);而抑制PANDAR表达则增加Cisplatin处理组中细胞活性(P <0.05)。此外,HeLa细胞中PANDAR的沉默可增加Cisplatin作用下细胞存活率(P <0.05)。结论 PANDAR可调节HeLa-DDP及HeLa细胞对顺铂的耐受性。

lncRNA PANDAR对KTC-3细胞生物学行为及RSK4信号通路的影响研究

目的探究lncRNA PANDAR对甲状腺癌细胞(KTC-3细胞)生物学行为及RSK4信号通路的影响。方法在华中科技大学实验室购买KTC-3细胞,随机分为过表达组(O组):将lncRNA PANDAR慢病毒质粒与KTC-3细胞混合培养;阴性对照组(N组):将sh PANDAR慢病毒质粒与KTC-3细胞混合培养;空白对照组(B组):KTC-3细胞与慢病毒包装质粒混合培养。通过克隆实验检测KTC-3细胞增殖,免疫细胞化学法检测RSK4蛋白阳性表达,qRT-PCR法检测lncRNA PANDAR表达量,Transwell检测KTC-3细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中RSK4蛋白含量,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡情况的差异性进行实验探究。结果与B组、N组比较,O组KTC-3细胞内lncRNA PANDAR表达量显著上升(P均<0.05),说明转染成功。与B组、N组相比较,O组KTC-3细胞增殖数量、侵袭能力显著升高(P均<0.05),B组与N组之间KTC-3细胞增殖数量、侵袭能力相差较小(P>0.05)。O组细胞的细胞核出现核固缩的概率显著高于B组、N组(P均<0.05),其中,B组、N组KTC-3细胞凋亡数量相差较小(P>0.05)。O组KTC-3细胞中RSK4蛋白表达、RSK4阳性数最高,与B组、N组相比较,O组KTC-3细胞RSK4蛋白表达、RSK4阳性数显著升高(P均<0.05),B组与N组之间KTC-3细胞中RSK4蛋白、RSK4阳性数含量相差较小(P>0.05)。结论lncRNA PANDAR过表达对KTC-3细胞生物行为有显著影响作用,对于细胞的增殖有正向促进能力,lncRNA PANDAR作用于甲状腺癌细胞生物行为可能与活化RSK4信号通路的表达相关。

LncRNA PANDAR、miR-637表达与甲状腺癌临床病理参数及预后的关系

目的探讨甲状腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)PANDAR与微小RNA-637(miR-637)的表达水平,并分析其与临床病理参数及预后的关系。方法选取2015年1月—2017年2月广州中医药大学第三附属医院收治的82例甲状腺癌患者,检测甲状腺癌组织和癌旁组织(距肿瘤组织边缘超过5 cm)中LncRNA PANDAR与miR-637的相对表达量,分析两个指标与患者临床病理特征及预后的关系。结果甲状腺癌组织中LncRNA PANDAR的相对表达量高于癌旁组织,miR-637的相对表达量低于癌旁组织(P <0.05)。LncRNA PANDAR与miR-637的表达呈负相关(r=-0.634,P <0.05)。甲状腺癌组织中LncRNA PANDAR、miR-637的表达与肿瘤TNM分期、细胞分化程度、淋巴转移有关(P <0.05)。LncRNA PANDAR高表达组3年总生存率低于LncRNA PANDAR低表达组(P <0.05)。miR-637高表达组与低表达组3年总生存率比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论甲状腺癌组织中LncRNA PANDAR相对表达量高于癌旁组织,miR-637相对表达量低于癌旁组织,与肿瘤TNM分期、细胞分化程度及淋巴转移有紧密联系,有望成为甲状腺癌诊断、治疗以及评估预后的新的生物学指标。

lncRNA PANDAR通过TGF-β/Smad4通路抑制宫颈癌细胞的顺铂耐药

目的探讨lncRNA PANDAR抑制宫颈癌细胞株HeLa顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的机制。方法构建宫颈癌耐Cisplatin细胞株HeLa-DDP。将PANDAR过表达或敲减载体转入HeLa或HeLa-DDP细胞。转化生长因子-β(TGF-β)处理PANDAR过表达的HeLa-DDP细胞。蛋白质免疫印迹检测上皮间质转化标志分子E-cadherin,N-cadherin以及TGF-β和Smad4的表达。CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与HeLa细胞相比,HeLa-DDP细胞中E-cadherin降低,N-cadherin升高。PANDAR过表达显著上调了HeLa-DDP细胞的E-cadherin相对表达水平,下调了N-cadherin相对表达水平,而PANDAR敲减则呈现相反的结果。HeLa^(PANDAR)细胞中TGF-β相对表达为(0.28±0.06),Smad4相对表达为(0.38±0.03),与HeLa-DD^(PNC)(TGF-β:0.96±0.13;Smad4:1.07±0.15)比较差异有统计学意义(P<0.05)。HeLa^(sh-PANDAR)细胞中TGF-β和Smad4蛋白相对表达量相比HeLa^(sh-NC)细胞显著升高。与HeLa-DDP^(PANDAR)细胞中E-cadherin(1.00±0.08)和N-cadherin(1.00±0.03)蛋白相对表达水平比较,TGF-β处理的HeLa-DDP^(PANDAR)细胞中E-cadherin蛋白表达水平(0.46±0.06)相对降低,N-cadherin蛋白相对表达水平(2.58±0.13)升高,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,TGF-β处理逆转了PANDAR介导的HeLa-DDP细胞耐药,表现为细胞活力上升,细胞凋亡下降。结论PANDAR通过抑制TGF-β/Smad4通路抑制上皮间质转化,进而抑制HeLa细胞的Cisplatin耐药。

LncRNA-PANDAR介导EphA2、TRPM8对OSCC细胞侵袭、迁移及凋亡的作用机制

目的探究LncRNA-PANDAR介导EphA2、TRPM8对OSCC细胞生物活性的作用。方法人OSCC细胞系(SCC6、SCC9、SCC25)和正常人口腔角质形成细胞(HOK)来自上海子实公司,于实验室保存,经检测后PANDAR在SCC25细胞中水平最高,因此后续选择SCC25细胞进行实验。将PANDAR转染SCC25细胞后分为口腔癌组(癌细胞未处理)、对照组(转染不相关序列组)、转染组(转染PANDAR组)。运用RT-PCR、Transwell法、流式细胞仪、免疫印记法检测PANDAR水平、SCC25细胞侵袭、迁移、凋亡及EphA2、TRPM8、FAK蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测LncRNA-PANDAR与EphA2、TRPM8、FAK相关性。结果各口腔鳞癌细胞中PANDAR mRNA表达水平较HOK组细胞低(P<0.05),SCC25组中PANDAR表达水平高于其他口腔鳞癌细胞,组间比较显著差异(P<0.05),因此本文后续实验选用SCC25细胞进行。口腔癌组与对照组PANDAR、EphA2、TRPM8、FAK、侵袭数量、迁移数量、凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶结果显示,转染LncRNA-PANDAR后EphA2、TRPM8及FAK野生型活性下降(P<0.05),对突变基因无影响(P>0.05),表明EphA2、TRPM8及FAK是LncRNA-PANDAR的靶基因。结论 LncRNA-PANDAR通过靶向降低EphA2、TRPM8活性从而抑制口腔鳞癌细胞的迁移、侵袭,促进其凋亡。

直肠癌患者PANDAR mRNA表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨直肠癌患者PANDAR mRNA表达与临床病理特征及预后的关系。方法选取2015年1月—2016年12月在中国科学院大学附属肿瘤医院接受直肠癌根治术的120例患者为研究对象,比较直肠癌组织与癌旁正常组织中PANDAR mRNA表达水平,以及直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者临床病理特征及预后,采用多因素logistic回归分析直肠癌患者PANDAR m RNA表达的影响因素。结果直肠癌组织中PANDAR mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。PANDAR mRNA高表达(表达水平>5.25)65例,低表达(表达水平≤5.25)55例。直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者在远处转移、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、MRI-T分期、MRI-N分期等方面比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);在性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤组织分化、MRI-环周切缘状态等方面比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。MRI-T分期(OR=6.071,95%CI:1.281~28.783,P<0.05)、MRI-N分期(OR=12.481,95%CI:2.046~76.148,P<0.05)是直肠癌患者PANDAR mRNA表达的独立影响因素。术后随访48个月,PANDAR mRNA低表达患者4年总体生存率明显高于PANDAR mRNA高表达者,差异有统计学意义(39.2%比19.8%,P<0.05)。结论PANDAR在直肠癌组织中呈高表达,与MRI-T分期、MRI-N分期等临床病理特征及预后相关。

高温对A549细胞PANDAR、LncRNA-p21及ST8SIA基因影响

目的探讨高温对人肺腺癌细胞株A549细胞中PANDAR、LncRNA-p21和ST8SIA基因表达的影响。方法取A549细胞随机分为4组。对照组细胞于37℃保温箱中培养,实验组细胞分别于40、42、44℃保温箱中培养,1 h后,以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测PANDAR、LncRNA-p21以及ST8SIA基因相对表达水平。结果 40、42、44℃实验组A549细胞的PANDAR基因相对表达水平分别低于对照组(P<0.05);44℃实验组A549细胞的PANDAR基因相对表达水平分别低于40和42℃实验组(P<0.05)。4组A549细胞中LncRNA-p21和ST8SIA基因相对表达水平分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高温可降低A549细胞中PANDAR基因的表达。