PAPSS1的表达与脑胶质瘤临床指标和预后的相关性及对细胞增殖和凋亡的影响

目的研究PAPSS1表达与脑胶质瘤临床指标和预后的相关性,及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用免疫组化方法检测PAPSS1、PDL1蛋白在脑胶质瘤样本的表达,并纳入SPSS统计学分析。其中,PAPSS1和PDL1之间及其与临床指标的相关性分析采用Spearman法;生存期单因素分析采用Kaplan-Meier法和log-rank检验,将单因素分析中具有统计学意义的变量纳入COX多元回归生存分析。使用siRNA技术降低PAPSS1在脑胶质瘤细胞的表达。转染48 h后,利用MTT法检测细胞增殖比率,利用Hochest/PI法检测细胞凋亡率;PAPSS1、PDL1、ki67和Bcl2等基因的表达变化使用qPCR检测。上述实验数据采用GraphPad软件分析。P<0.05为有统计学意义。结果IHC数据分析显示,癌组织PAPSS1浆表达和患者年龄、病理分级、复发等显著正相关,而PAPSS1核表达和各临床指标均无关,PDL1表达仅和年龄有关;PAPSS1浆表达和PDL1表达之间也显著正相关。生存分析显示,PAPSS1浆高表达的脑胶质瘤患者拥有更差的总生存期和无病生存期;PAPSS1核表达和PDL1表达都与预后无关。当使用siRNA技术降低了PAPSS1在癌细胞的表达时,细胞增殖比率出现下降而凋亡率上升,PDL1、ki67和Bcl2等基因的mRNA表达水平出现显著下调。结论本研究发现PAPSS1浆表达与脑胶质瘤患者的年龄、病理分级、复发及更短的预后显著相关;降低PAPSS1表达能抑制细胞增殖并促进凋亡,同时也下调了PDL1、ki67、Bcl2等基因的表达水平,提示PAPSS1与脑胶质瘤的个性化治疗相关,值得进一步研究和探讨。

构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒

目的构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒,并感染巨噬细胞使PAPSS1过表达,为研究其在胆固醇代谢中的作用提供工具。方法PCR扩增hpapss1全长cDNA,继而构建了真核表达载体pCDNA3.0-hpapss1,再将hpapss1片段亚克隆入腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV,得到转移质粒pshuttle-CMV-hpapss1,并将其转化含腺病毒基因组质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态菌(AdEasier-1cells)。筛选并鉴定重组正确的腺病毒质粒pAdEasy-1-hpapss1,在阳离子脂质体介导下,转染腺病毒包装细胞(293细胞)进行包装和扩增。携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒感染THP-1来源的巨噬细胞48h后,用Western blot方法测定蛋白水平来确定PAPSS1的过表达。结果成功制备携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒,滴度为5.3×108pfu/mL,实现了hpapss1基因在巨噬细胞中的过表达。结论携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒的成功制备为进一步探讨PAPSS1及氧化固醇硫酸化在巨噬细胞胆固醇代谢平衡中的作用及机制建立了很好的模型和工具。