极性蛋白Par3在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨极性蛋白Par3(Par3蛋白)在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变Ⅱ~Ⅲ(CINⅡ~Ⅲ)、宫颈鳞状细胞癌(CSCC)以及转移淋巴结组织中的表达及临床意义。方法选择新疆医科大学第一附属医院妇科2016年1月~2017年12月收治的CINⅡ~Ⅲ、CSCC以及因良性疾病行子宫切除术患者宫颈组织标本存档石蜡包埋组织共93例,其中慢性宫颈炎14例、CINⅡ~Ⅲ36例、CSCC43例。另CSCC淋巴结转移灶组织标本7例。应用免疫组织化学染色法检测极性蛋白Par3在上述组织中的表达。结果Par3蛋白在慢性宫颈炎、CINⅡ~Ⅲ、CSCC和转移淋巴结组织中的阳性表达率分别为100.0%(14/14)、97.2%(35/36)、62.8%(27/43)、0,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。CSCC中高分化组Par3蛋白100%(7/7)表达,而中低分化组的表达下调为55.6%(20/36),差异有统计学意义(P<0.05);根据是否发生淋巴结转移分组(淋巴结转移组7例;未发生淋巴结转移组36例),Par3蛋白在淋巴结转移组宫颈组织中阳性表达率是28.6%(2/7),而非转移组为58.3%(21/36),差异有统计学意义(P<0.05)。Par3蛋白的低表达与组织学分化和发生淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论极性蛋白Par3在慢性宫颈炎、CINⅡ~Ⅲ以及CSCC、淋巴结转移灶组织中的表达有差异,CSCC组织中表达下调,其异常低表达与CSCC发生发展有关,可以作为判断宫颈上皮内瘤变发展为CSCC预警指标以及判断CSCC恶性程度和预后的指标。

IL-29对胰蛋白酶诱导的肥大细胞PARs表达的调节作用

目的:检测白细胞介素29(Interleukin-29,IL-29)对胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体(Protease activated receptor,PAR)-1,2,3,4表达的调节作用。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的IL-29、胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,在不同时间点收集激发细胞,用流式细胞术(FCM)及实时定量PCR检测P815肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29单独作用能够下调肥大细胞PAR-1蛋白及mRNA水平的表达,上调PAR-3、PAR-4 mRNA的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);以IL-29预处理肥大细胞后,IL-29对胰蛋白酶诱导的肥大细胞PAR-2、PAR-3、PAR-4表达起促进作用,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-29能够调节胰蛋白酶引起的肥大细胞PARs表达,从而参与肥大细胞相关的炎症反应。

Par3、p-JAK、p-STAT3蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及病理特点分析

目的探讨极性蛋白Par3(partioning defective protein 3, Par3)、磷酸化的酪氨酸激酶(pJAK)、磷酸化的信号传导子和转录激活子3(p-STAT3)蛋白在慢性宫颈炎(chronic cervicitis,CC)、宫颈上皮内瘤变(cervical icalintfaepithelial neoplasia Ⅱ-Ⅲ,CIN Ⅱ-Ⅲ)和宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous carcinoma,CSCC)、转移淋巴结组织中的表达特征及其与宫颈鳞癌的关系。方法选择新疆医科大学第一附属医院妇科2016年1月-2017年12月收治的因CINⅡ-Ⅲ、CSCC以及良性疾病行子宫切除术患者,调取存档石蜡包埋组织共93例,其中CC 14例,CINⅡ-Ⅲ36例,CSCC 43例。另选取CSCC组中7例阳性淋巴结组织标本。应用免疫组织化学染色法测定Par3、p-JAK和p-STAT3蛋白在CC、CIN Ⅱ-Ⅲ、CSCC及阳性淋巴结组织中的表达;分析三者与宫颈鳞癌临床病理参数关系;探讨三者在上述组织表达的相关性。结果 Par3在CSCC中的阳性表达率低于CC和CIN(P<0.05),p-JAK在CSCC中的阳性表达率高于CC,低于CIN(P<0.05),p-STAT3在CSCC中的阳性表达率高于CC(P<0.05)。Par3低表达与肿瘤组织学分化、淋巴结转移有关;p-JAK、p-STAT3表达上调与肿瘤临床分期、组织学分化有关(P<0.05)。CINⅡ-Ⅲ组织中Par3与p-JAK、Par3与p-STAT3蛋白表达关系均呈负相关(r=-5.553、-6.092、, P均<0.05);(r=-6.092, P<0.05)。结论宫颈鳞癌中Par3蛋白低表达,p-JAK、p-STAT3蛋白高表达上调,与宫颈鳞癌发病机制有关。

Par3蛋白和p-STAT3蛋白在宫颈病变组织中的表达及临床意义

目的探讨极性蛋白Par3(partitioning defective protein 3,Par3)和磷酸化的信号传导子和转录激活子3(p-signal transducers and activators of transcription 3,p-STAT3)在宫颈病变组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学染色法检测Par3和p-STAT3蛋白在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变Ⅱ-Ⅲ(cervical intraepithelial neoplasia Ⅱ-Ⅲ,CIN Ⅱ-Ⅲ)以及宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous carcinoma,CSCC)和淋巴结转移灶中的表达情况,分析其与临床病理参数之间的关系。结果Par3蛋白在慢性宫颈炎、CIN Ⅱ-Ⅲ、CSCC和淋巴结转移灶中的蛋白表达量呈现逐渐降低趋势(P<0.001);上述4种组织中p-STAT3蛋白的表达量是随着宫颈病变加重而逐渐增高(P=0.0062)。比较二者与临床病理参数的关系发现,宫颈鳞癌中Par3表达与肿瘤淋巴结转移(P=0.003)以及组织学分化程度(P=0.017)有关,宫颈鳞癌组织p-STAT3阳性表达与肿瘤临床分期、组织学分化程度有关(P=0.001)。CINⅡ-Ⅲ组织中极性蛋白Par3与p-STAT3蛋白水平呈负相关(r=-5.553,P<0.05)。结论宫颈鳞癌中极性蛋白Par3低表达,p-STAT3蛋白高表达,二者表达差异与宫颈鳞癌发生、组织学分化、肿瘤淋巴结转移以及临床分期有关。

下调蛋白酶活化受体4(PAR4)的表达抑制SW620结直肠癌细胞迁移

目的建立诱导型蛋白酶活化受体4(PAR4)表达抑制的人肠癌细胞SW620/PAR4D细胞模型,探讨PAR4对肠癌细胞增殖迁移的影响。方法建立带有四环素诱导表达调控系统的SW620/Tet-On人肠癌细胞,并构建针对PAR4的诱导型人工小RNA(miRNA)表达慢病毒载体p LVX-Tight-Puro-PAR4-miR,获得诱导型PAR4表达抑制的SW620/PAR4D细胞模型。用Western blot法对经强力霉素(DOX)药物诱导后SW620细胞中PAR4的表达抑制情况进行验证,采用CCK-8法检测抑制PAR4对SW620细胞增殖的影响,划痕实验检测SW620细胞的迁移情况。结果成功建立了PAR4低表达的SW620/PAR4D细胞模型。与对照组细胞相比,DOX诱导PAR4表达抑制前后,SW620/PAR4D细胞的生长增殖情况无明显变化,但运动迁移能力明显下降。结论下调PAR4水平不影响SW620细胞的增殖但抑制其迁移。

PAR2调控GFAP与Vimentin在大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成早期中的表达

目的探讨蛋白酶激活受体2(protease activated receptor 2,PAR 2)对大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成早期(2周)损伤区神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及波形蛋白(Vimentin)表达的作用。方法建立大鼠重型脊髓损伤模型后立即和第2d于损伤局部给予生理盐水NS(model组)、PAR2特异性抑制剂FSLLRY-NH2(FSLLRY-NH2组)、PAR2 siRNA(PAR2 siRNA组)及PAR2特异性激动剂SLIGRL-NH2(SLI GRL-NH2组);对假手术组(sham operation组)大鼠只打开椎板,不进行其他处理。应用免疫荧光标记技术和蛋白质印迹法检测术后第1d、7d及14dGFAP及Vimentin的表达情况,并进行大鼠后肢运动功能Basso Beattie Bres nahan(BBB)评分。结果伤后第7d及第14d,免疫荧光及蛋白印迹检测皆显示FSLLRY-NH2组及PAR2 siRNA组GFAP及Vimentin蛋白的表达均显著低于model组,而SLIGRL-NH2组该两种蛋白的表达则显著高于model组(P皆<0.05)。伤后第14d,FSLLRY-NH2组及PAR2 siRNA组大鼠BBB评分显著高于model组,而SLIGRL-NH2组则显著低于model组(P皆<0.05)。而在伤后第1d,各干预组GFAP及Vimentin蛋白的表达与model组相比未见明显差异;损伤后第1d及第7d,各干预组大鼠BBB评分与model组相比亦未见明显差异(P皆>0.05)。结论激动PAR2能促进大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成早期损伤区GFAP与Vimentin的表达,而抑制PAR2则可抑制该两种蛋白的表达,改善胶质瘢痕形成早期的功能预后。

GM-CSF对肥大细胞P815蛋白酶激活受体表达的影响

目的蛋白酶激活受体(PARs),为G蛋白偶联受体(GPCR)家族中的新成员,参与过敏反应的发生,粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)具有调节免疫应答的功能,然而GM-CSF对肥大细胞PARs表达的影响还不甚清楚。因此本研究探讨GM-CSF对肥大细胞P815 PARs表达的影响情况。方法肥大细胞P815激发后,收集各时间点的细胞。细胞处理后采用实时定量PCR和流式细胞术的方法在信使核糖核酸(mRNA)和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4表达情况。结果GM-CSF上调PAR-2蛋白和mRNA在肥大细胞P815上的表达;GM-CSF上调PAR-1和PAR-3 mRNA在肥大细胞P815的表达;GM-CSF抗体的应用可以阻断GM-CSF对PARs蛋白表达的调节作用。结论GM-CSF能够调节肥大细胞PARs表达,二者可能在过敏反应和炎症中存在更加复杂的相互作用。

FⅦa依赖TF及FⅩ活化PAR2上调SW 620细胞IL-8表达

目的探讨凝血FⅦa、Ⅹ、Ⅱa在蛋白酶激活受体2(PAR2)活化及诱导SW620细胞IL-8表达中的作用。方法用PAR2激动剂(PAR2-AP)、FⅦa、Ⅹ、Ⅱa等不同刺激物处理SW620细胞,以ELISA法检测细胞上清IL-8水平,以实时定量PCR检测细胞IL-8mRNA表达。结果血浆浓度的Ⅶa需在FⅩ存在下才能促进细胞IL-8表达;单克隆抗TF及抗PAR2抗体均可抑制FⅦa的作用;FⅡa轻微下调细胞IL-8表达,Hirudin、抗PAR1及抗PAR2抗体均可阻断此作用。结论TF-FⅦa及TF-FⅦa-FⅩa复合物,而非FⅡa,活化PAR2上调SW620细胞IL-8表达,从而促进细胞增殖及迁移。

IL-29调节的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体表达分析

目的:检测白细胞介素(interleukin,IL)-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体(protease activated recep-tor,PAR)-1,2,3,4表达。方法:肥大细胞P815培养后以不同浓度的IL-29激发肥大细胞,在不同时间点收集细胞,给予透膜和非透膜处理后用流式细胞术检测肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29激发肥大细胞2、6和16 h后肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达与相应对照相比差异有统计学意义,而IL-29调节的膜表面PAR-1表达与胞浆内PAR-1表达相比,差异无统计学意义。IL-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达与相应对照相比,差异无统计学意义;而IL-29激发2 h肥大细胞膜表面PAR-2表达与胞浆内PAR-2表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发6 h肥大细胞膜表面PAR-3表达与胞浆内PAR-3表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发2、6和16h后肥大细胞膜表面PAR-4表达与胞浆内PAR-4表达相比,差异有统计学意义。结论:IL-29可以下调P815肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达,且IL-29引起的膜表面和胞浆内PAR-1表达无差异;尽管检测到PAR-2,3,4在膜表面和胞浆内的表达情况不同,但IL-29对膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达的调节作用不明显;流式细胞术检测的膜表面和胞浆内PARs表达结果均可反应IL-29调节的P815肥大细胞PARs表达情况。

胃癌组织中uPA系统及VEGF表达与侵袭转移的关系

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活系统uPA,uPAR, pAI-1蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系. 方法:采用免疫组化S—P法检测67例胃癌及癌旁组织中uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白表达情况,同时结合临床生物学特征进行分析. 结果:癌和癌周比较uPA,uPAR,PAI-1及VEGF蛋白阳性表达率明显升高(P<0.01),阳性产物主要分布在癌细胞胞质中.侵及浆膜组阳性率明显高于未及浆膜组(P=0.000,0.014,0.016,0.000).uPA,uPAR 蛋白在淋巴结转移组中的阳性率明显高于无淋巴结转移组(P=0.002,0.008).PAI-1蛋白在低分化组中的阳性率明显低于中分化和高分化组(P<0.05).uPA,upAR 及VEGF蛋白阳性率在胃癌组织不同分化程度间差异无显著性.在胃癌组织中uPA,uPAR蛋白的表达呈显著正相关(r=0.653,P<0.001).在uPA,uPAR蛋白同时阳性的41例病例中,有28例发生淋巴结转移,与阴性组(4/15)相比,转移发生率明显增高(P<0.01).胃癌组织中uPA蛋白表达与VEGF表达显著正相关(r=0.300. P<0.05).PAI-1蛋白表达与VEGF表达具有极显著正相关性(r=0.413,P<0.01).应用COX回归模型进行多变量分析并采用向前逐步回归法,仅浸润深度、uPA表达和病理类型对淋巴结转移有影响. 结论:uPA、uPAR、PAI-1及VEGF蛋白在胃癌组织中表达增强,uPA,uPAR与胃癌浸润转移密切相关.

神经系统发育期细胞不对称分裂机制

细胞不对称分裂产生两个不同命运的子细胞 ,是细胞多样性形成的基础。果蝇周围神经系统感觉刚毛由一个前体细胞按固定的程序不对称分裂而形成。膜相关蛋白Numb是细胞命运决定因子。在细胞有丝分裂期 ,Numb选择性地分布于细胞的一侧 ,在胞质分裂后则被分配于一个子细胞。Numb通过抑制跨膜受体Notch而发挥作用。Numb不对称分布由细胞极性分子控制。这些极性分子在细胞有丝分裂前即定位于细胞的一极。除了指导命运决定因子分布外 ,细胞极性分子还与其他一些因子协同作用调节纺锤体定向。纺锤体的排列方向必须与命运决定因子的分布一致 ,才能保证后者只被分配到一个子细胞中去。果蝇中枢神经系统的发育起始于成神经细胞 (NB)从神经外胚层的向下离层。离层后的NB沿着与上皮细胞平面垂直的方向以干细胞样方式分裂产生一个较大的位于顶部的NB和一个较小的位于底部的神经节母细胞 (GMC)。NB可沿顶 底轴以干细胞样方式继续分裂 ,而GMC则只分裂一次产生两个神经元或胶质细胞而不再分裂。NB继承了上皮细胞的顶 底极性 ,位于其顶部的细胞极性分子Bazooka ,DmPAR6和DaPKC使Inscuteable(Insc)蛋白 ,Insc的伙伴分子 (Pin)和G蛋白亚单元Gαi积聚于细胞顶部皮层而建立NB的顶部极性。顶部

老年脓毒症患者临床特征及预后相关因素分析

目的分析讨论老年脓毒症患者(年龄≥60岁)的临床特征与预后相关因素。方法纳入2016年1月1日-2021年6月30日复旦大学附属华东医院急诊内科病房收治的121例老年脓毒症患者,收集患者入院时的一般资料[年龄、性别、是否应用呼吸机辅助治疗(无创和有创)]、实验室指标[白细胞计数、中性粒细胞比例、血小板、降钙素原PCT、血清白蛋白、中性粒细胞/血小板比值(NPR)、降钙素原/白蛋白比值(PAR)],入院时的APACHEII评分和SOFA评分,入院后的感染原发部位以及总住院时间。根据住院期间的临床转归情况,将121例患者分为存活组(n=73)与死亡组(n=48),采用Cox比例风险回归模型,分析患者预后的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线,评估PCT、NPR、PAR、APACHEⅡ及SOFA评分对患者死亡率的预测价值。结果患者平均年龄84岁(77,88),平均住院时间22 d(19,24),61.1%患者接受呼吸机辅助通气治疗,住院期间死亡率为39.67%。与存活组相比,死亡组的年龄、NPR、PAR、APACHEⅡ评分及SOFA评分较高,差异有统计学意义(P<0.05),2组PCT比较,差异无统计学意义。Cox比例回归风险分析显示,年龄、APACHEⅡ评分是影响老年脓毒症患者预后的独立危险因素。ROC曲线分析显示,PCT、NPR、PAR及APACHEⅡ评分及SOFA评分预测老年脓毒症患者死亡率的曲线下面积(AUC)分别为0.603,0.699,0.611,0.860及0.78,最佳截断点分别为3.95,0.04,0.15,22.5及7.5。结论老年脓毒症患者住院时间较长、死亡率高,并且多数需要接受呼吸机辅助通气治疗。年龄和APACHE评分高是老年脓毒症患者预后的独立危险因素,其中APACHEⅡ评分对老年脓毒症患者的预后可能具有更好的评估价值。

肿瘤坏死因子调节的肥大细胞蛋白酶激活受体表达分析

目的检测肿瘤坏死因子（TNF）引起的肥大细胞蛋白酶激活受体（PAR）．1，2，3，4表达。方法肥大细胞P815培养后以不同浓度的TNF激发肥大细胞，在不同时间点收集细胞，给予聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX一100）非TritonX-100处理后用流式细胞术和激光共聚焦方法检测肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果TNF激发肥大细胞2h、6h和16h后，TritonX．100与非TritonX．100处理后，肥大细胞PAR-1，3表达均无明显变化；但TNF以浓度依赖方式上调P515肥大细胞PAR．2，4表达（P〈0．05）；上述各时间点检测PAR-1，2，3表达情况，TritonX．100处理组与非TritonX．100处理组检测结果无明显差异，但PAR-4表达结果显示TritonX-100处理组表达强于非TritonX．100处理组。结论TNF可以上调P815肥大细胞PAR-2，4表达，但对PAR-1，3表达的调节作用不明显，TritonX-100处理和非TritonX-100处理不影响TNF调节的肥大细胞PARs表达的检测结果。

PARD3在初级神经胚形成中的作用

初级神经胚形成是人类胚胎发育中的关键阶段,初级神经胚发育异常将导致神经管畸形的发生。细胞极性的建立是初级神经胚形成的基础。细胞极性蛋白Par3在初级神经胚形成具有重要作用,它通过引导纺锤体轴和中心体的正确定位直接影响间质细胞极性化成为神经上皮细胞,神经上皮细胞排列继而排列为神经板。在神经板弯曲整形融合为神经管的过程中,Par3-aPKC极性蛋白复合体作为细胞与细胞之间、细胞与胞外基质、细胞骨架组织信号的连接点,控制着神经管的形成以及腔肠的扩张。Par3-aPKC极性蛋白复合体成分的缺失,将导致相应的神经管畸形发生,因此PA;;RD3在初级神经胚形成的作用引起越来越多研究者的重视,本文对此做一综述。