原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。

远志总皂苷干预β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞Caspase-3及Par-4的表达

背景:远志总皂苷具有良好的神经保护作用。目的:分析远志总皂苷对β-淀粉样蛋白致伤海马神经干细胞的保护作用及机制。方法:自昆明小鼠海马分离培养神经干细胞,取第3代神经干细胞,用含不同质量浓度远志总皂苷与β-淀粉样蛋白致伤体外培养的神经干细胞共孵育。结果:应用免疫组织化学法检测Caspase-3阳性神经干细胞,与对照组相比,远志总皂苷组Caspase-3阳性细胞率及Par-4的表达明显降低,差异具有显著性意义(P<0.05)。提示远志总皂苷能够降低β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞中Caspase-3及Par-4的表达。

Par-4诱导细胞凋亡发生机制的研究进展

Par-4基因(prostate apoptosis response-4gene,前列腺凋亡反应基因-4)是从凋亡的前列腺癌细胞中分离出来的一种促凋亡基因。Par-4是该基因编码的产物,是一个广泛表达的蛋白,可以通过多种途径诱导癌细胞凋亡及促进肿瘤消退,其SAC区可以选择性的针对肿瘤细胞诱导其凋亡而正常细胞不受影响。随着Par-4研究的深入将对进一步了解肿瘤的发病机制及肿瘤治疗具有重要意义。

新生儿缺氧缺血性脑病血清中Par-4蛋白测定及临床意义

目的探讨测定缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清中Par_4蛋白的临床意义。方法采用ELISA法检测42例HIE患儿外周血中Par_4蛋白表达量。设立正常对照组。结果HIE组患儿的Par_4蛋白表达量显著高于正常对照组(P<0.01)。HIE组内,高阴离子间隙(AG)患儿的Par_4蛋白表达量显著高于正常AG患儿(P<0.01)。HIE患儿治疗1周后,Par_4蛋白表达量显著下调(P<0.01)。结论测定外周血中Par_4蛋白表达量对HIE疾病严重程度和治疗效果的判断有一定的临床价值。

阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元NF-κB、par-4基因表达的影响

目的探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡及NF-κBP65、par-4基因表达的影响。方法采用SD大鼠海马神经元原代培养,经终浓度分别为10、20、40、80、120、160μmol/L的SF预处理后,用50μmol/L的SNP处理24h,采用MTT法检测细胞存活率,Hochest33258荧光染色检测凋亡,Westernblot及RT-PCR检测NF-κBP65、par-4基因表达。结果不同剂量SF(10～160μmol/L)预处理6h可显著提高神经元的存活率,减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象;降低NF-κBP65、par-4mRNA及蛋白的表达。结论SF抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡,其机制可能与降低促凋亡基因NF-κBP65、par-4表达有关。

H_2O_2对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响

为观察H2 O2 对分化的PC12细胞par 4基因表达的影响 ,采用终浓度分别为 0、10 0、2 0 0和 4 0 0nmol L的H2 O2处理PC12细胞 8h ,用RT PCR检测par 4基因mRNA表达变化 ,Westernblot检测蛋白表达的变化。结果表明 ,随着H2 O2 剂量的增加 ,PC12细胞存活率降低 ,凋亡明显增加 ,且par 4mRNA表达及蛋白表达亦增加 ,提示在H2 O2 诱导PC12细胞凋亡过程中Par 4可能起重要作用。

肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量检测及其与肿瘤增殖、侵袭的关系研究

目的:探讨肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量检测及其与肿瘤增殖、侵袭的相关关系。方法:选取确诊肾母细胞瘤的患者60例,活检留取肾母细胞瘤组织、瘤旁组织,采用荧光定量PCR检测其中Par-4基因,增殖相关基因IGF-Ⅱ、IRS-2、TGF-β、PTEN及侵袭相关基因Axin、Ecad、Ki-67表达量的差异;采用Pearson检验评估肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量与增殖、侵袭相关基因表达量的相关关系。结果:肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量低于瘤旁组织;增殖相关基因IGF-Ⅱ、IRS-2、TGF-βmRNA的表达量高于瘤旁组织,PTEN mRNA的表达量低于瘤旁组织;侵袭相关基因Axin、E-cad mRNA的表达量低于瘤旁组织,Ki-67mRNA的表达量高于瘤旁组织。Pearson检验发现,肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达量与IGF-Ⅱ、IRS-2、TGF-β、Ki-67表达量呈负相关,与PTEN、Axin、E-cad表达量呈正相关。结论:肾母细胞瘤组织中Par-4基因表达异常降低并且与增殖、侵袭基因表达的改变存在相关性。

H_2O_2对PC12细胞par-4和NF-κBP65基因表达的影响

目的 探讨 H2 O2 对 PC12细胞前列腺细胞应答凋亡蛋白 - 4 ( prostate apoptosis response- 4 ,par- 4 )和核转录因子 - κBP6 5 ( NF- κBP6 5 )基因表达的影响。方法 用不同终浓度 H2 O2 ( 0～ 4 0 0 nm ol/ L)处理 PC12细胞 8h,或终浓度 2 0 0 nm ol/ L H2 O2 处理 PC12细胞不同时间 ( 0～ 8h) ,采用 RT- PCR检测 par- 4、NF- κBP6 5 m RNA表达变化 ,Western blot检测 Par- 4和 NF-κBP6 5蛋白表达的变化。结果 随 H2 O2 浓度从 10 0～ 4 0 0 nmol/ L增加 ,par- 4、NF-κBP6 5 m RNA表达和 Par- 4、NF-κBP6 5蛋白表达水平逐渐增加 ;2 0 0 nm ol/ L H2 O2 作用 PC12细胞 0～ 8h,par- 4 m RNA表达和 Par- 4蛋白表达 ,在 2～ 8h随时间延长表达增加 ;在 0～ 8h NF- κB P6 5 m RNA表达和 NF- κBP6 5蛋白表达无明显变化。结论 H2 O2 可时间、剂量依赖性的增加 par- 4 m RNA表达和 Par- 4蛋白表达 ;H2 O2 可剂量依赖性的增加NF-κBP6 5 m RNA表达和 NF-κBP6 5蛋白表达 ;NF-κBP6 5 m RNA表达和 NF-κBP6

血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA联合检测在新生儿缺氧缺血性脑病中的临床意义

目的研究血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA联合检测在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)中的临床意义。方法选择32例新生儿HIE(HIE组),30例非HIE的窒息新生儿(非HIE组)和12例健康新生儿(正常组),检测3组出生后24 h血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA表达量,并比较3组实验指标阳性者与阴性者生后28 d新生儿神经行为测定(NBNA)变化。结果出生24 h HIE组S-100B蛋白和Par-4 mRNA表达量阳性率显著高于其他2组(P均<0.05),HIE组中两者同时阳性对HIE诊断特异性最高(P<0.05),且28 d NBNA评分低于单项阳性的2组(P均<0.05)。结论出生24 h血清S-100B蛋白和Par-4 mRNA表达量与HIE患儿的脑部损伤程度相关,联合检测特异性更高。

新生儿缺氧缺血性脑病血清中Par-4蛋白与S100b蛋白含量水平变化及临床研究

目的:测定新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清中Par-4蛋白及S100b蛋白含量,探讨其临床意义。方法:采用ELISA法检测104例HIE患儿血清中Par-4蛋白及S100b蛋白量,并设立对照组。结果:HIE组患儿的Par-4蛋白及S100b蛋白量显著高于正常对照组(P<0.01),HIE患儿血清中的高阴离子间隙(AG)患儿的Par-4蛋白及S100b蛋白量显著高于正常AG患儿(P<0.01)。HIE患儿治疗一周后,Par-4蛋白及S100b蛋白量均显著回降(P<0.01)。结论:测定HIE患儿血清中Par-4蛋白及S100b蛋白对HIE疾病程度和治疗效果的判断都有重要的临床意义。

新生大鼠缺氧缺血后不同部位脑组织中Par-4基因的表达

目的:观察Par-4基因在新生大鼠脑缺氧缺血后,不同脑组织中的表达。方法:制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型。利用RT-PCR检测脑缺氧缺血后不同时间点海马组织、大脑额叶皮质及小脑中Par-4的mRNA表达的改变,利用Westernblot检测在缺氧缺血24h后,海马组织大脑额叶皮质和小脑中Par-4蛋白表达量的改变。结果:①海马组织和大脑额叶皮质中的Par-4mRNA在脑缺氧缺血后2h已明显升高,至6h已达高峰。而小脑未见表达;②在新生大鼠脑缺氧缺血24h后,海马组织及大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量显著升高,并且海马组织中Par-4蛋白表达量高于大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量。而小脑未见其蛋白表达。结论:缺氧缺血对新生大鼠不同脑组织中Par-4基因表达影响不同,Par-4可能参予了缺氧缺血对新生大鼠海马组织和大脑额叶皮质的致病过程。

谷氨酸对人骨髓间充质干细胞中Par-4蛋白表达的影响

目的探讨谷氨酸对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)中Par-4蛋白表达的影响及意义。方法用BMSCs分离液和密度梯度离心分离和培养人BMSCs,取第3～5代培养的细胞,分别加入小鼠抗人CD29-FITC、CD44-FITC、CD105-FITC、CD45-FITC、CD14-FITC、CD34-FITC单克隆抗体,流式细胞术鉴定其免疫表型。采用0.1nmol/L、1.0nmol/L、10.0nmol/L等不同剂量谷氨酸处理人BMSCs24h,并设正常对照组。Westernblot测定各组Par-4与突触素1(Synapsin-1)的蛋白表达量,并进行2种蛋白表达的相关性分析。结果在显微镜下,BMSCs呈星形或梭形。流式细胞术鉴定发现培养的细胞中CD29、CD44、CD105表达阳性,而CD45、CD14、CD34表达阴性,符合BMSCs特点。正常对照组Par-4蛋白相对表达量为17.43±5.9,0.1nmol/L、1.0nmol/L、10.0nmol/L谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4蛋白表达依次升高,分别为39.33±8.2、49.45±11.5、86.41±14.9(Pa<0.01)。谷氨酸处理导致BMSCs中Synapsin-1表达下调,并呈剂量依赖性(F=49.1P<0.01)。10.0nmol/L谷氨酸处理24h后,Par-4蛋白的表达与Synapsin-1的表达量呈显著负相关(r=-0.643P<0.01)。结论谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4表达升高,并可能使植入到缺血微环境中的BMSCs发挥神经细胞替代的作用受到负面影响。

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-amyloid peptide25—35（Aβ25-35）对PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响。方法：采用终浓度分别为0，5，10，201μmol／L的Aβ25-35处理PC12细胞24h，用MTT比色法分析细胞存活率；Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变；RT—PCR检测par-4和bcl-2基因mRNA表达变化；Western blot检测Par-4和Bcl-2蛋白表达变化。结果随着Aβ25-35剂量的增加，PC12细胞存活率降低，凋亡明显增加，且par-4基因表达增加，bcl-2基因表达降低。结论：Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡可能与上调Par-4表达和下调Bcl-2表达有关。

par-4 SAC基因的克隆及序列测定

目的:利用基因工程技术对par-4 SAC进行基因克隆并测定其序列,为进一步诱导肿瘤细胞靶向性凋亡的基因治疗奠定基础。方法:采用非对称互补引物/模板法,制备两端含有酶切位点的par-4 SAC的cDNA,PCR产物克隆入pGEM-T Easy载体并转化感受态大肠杆菌E.coli DH5α菌株,随机挑取数个菌落,筛选鉴定并测序。结果:经酶切鉴定、测序分析,表明所插入的基因片断为par-4 SAC基因,与设计完全相同。结论:应用非对称互补引物/模板法克隆par-4SAC基因是成功及可行的。

Par-4基因在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸的抗凋亡作用

目的研究前列腺凋亡反应基因4(Par4)在PC12细胞缺氧后的表达及其反义寡核苷酸(ASODN)的抗凋亡作用。方法在正常或缺氧条件下培养PC12细胞,分组将不同浓度Par4反义寡核苷酸转染PC12细胞,吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态,流式细胞分析评价凋亡百分率。Westernblot测定Par4蛋白表达量,比色法检测Caspase3的酶活性。结果缺氧24h,PC12细胞中Par4蛋白表达量上调157.42±7.53,明显高于正常对照组10.51±3.36(P<0.01)。10μmol/L的Par4,ASODN使Par4蛋白降为31.79±3.09,明显低于缺氧组157.42±7.53(P<0.01)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡,10μmol/LASODN使细胞凋亡百分数降为(34.5±3.5)%,明显低于缺氧组的(69.3±5.7)%(P<0.05)。Par4的ASODN抑制缺氧诱导的PC12细胞中Caspase3的酶活性上调,10μmol/LASODN使其活性降为0.549±0.078,与缺氧组0.917±0.051相比,差别有显著性意义(P<0.05)。结论Par4基因可能参与了缺氧诱导的PC12细胞损害。Par4ASODN可拮抗缺氧诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与Caspase3酶活性下调有关。

H_2O_2对PC12细胞par-4和caspase-3基因表达的影响

目的:探讨H2O2对PC12细胞par-4和caspase-3基因表达的影响,为阿尔茨海默病神经元凋亡发生的机制提供实验依据。方法:用不同剂量H2O2(0～400nmol/L)处理PC12细胞8h,或终浓度200nmol/LH2O2处理PC12细胞不同时间(0～8h),采用RT-PCR检测par-4,caspase-3mRNA表达变化,Westernblot检测Par-4蛋白表达和Caspase-3P20活性片段的变化,用比色法检测Caspase-3相对活性。结果:随H2O2浓度从100～400nmol/L增加,par-4,caspase-3mRNA表达和Par-4蛋白表达水平及Caspase-3P20活性片段逐渐增加;200nmol/LH2O2作用PC12细胞0～8h,par-4mRNA表达和Par-4蛋白表达,在2～8h随时间延长表达增加;caspase-3mRNA表达和Caspase-3P20活性片段,在4～8h随时间延长而增加;随H2O2浓度从50～400nmol/L增加,Caspase-3相对活性增加(χ2=4.8,P<0.05),在400nmol/LH2O2时Caspase-3相对活性达最大值。结论:随着H2O2剂量依赖性的增加和同一剂量下H2O2处理PC12细胞时间增加par-4,caspase-3基因mRNA的表达,Par-4蛋白的表达,Cas-pase-3P20活性片段,Caspase-3活性均有所增加。

多巴胺对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响

目的 :观察多巴胺 (dopamine ,DA)对分化的PC12细胞par 4基因表达的影响。方法 :PC12细胞采用终浓度分别为 0 ,10 0 ,2 0 0 ,4 0 0 μmol/L的DA处理 2 4h后 ,用RT PCR检测mRNA表达的变化和Westernblot检测蛋白表达的变化。结果 :随着DA剂量的增加 ,PC12细胞存活率降低凋亡明显增加 ,且par 4mRNA表达及蛋白表达亦增加。结论 :在DA诱导PC12细胞凋亡过程中par 4可能起重要作用。

原花青素对Aβ25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素（Procyanidins，PC）对β淀粉样肽（βamyloid peptide25—35，Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡的影响及其机理。方法采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst33258-PI荧光染色法检测凋亡，RT—PCR检测par-4和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡，提高细胞的存活率，减少Aβ25-35引起的核固缩，凝聚和碎裂，降低par-4 mRNA表达以及蛋白表达，增加bcl-2mRNA表达以及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与调节凋亡基因par-4和抗凋亡基因bcl-2表达有关。

Par-4对胰岛β细胞凋亡的影响

目的:通过抑制前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)的表达,观察并探讨Par-4对高糖高脂干预的胰岛细胞凋亡的影响及其机制。方法:将小鼠胰岛β细胞株NIT-1随机分成正常对照组、Par-4阻断组、高糖高脂干预组、高糖高脂+Par-4阻断组,TUNEL法检测各组细胞凋亡,Western印迹检测各组细胞Par-4和葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达水平。结果:与正常对照组[凋亡率为(3.14±1.08)%]比较,高糖高脂干预组胰岛β细胞凋亡率[(33.82±3.15)%]明显增加,Par-4和GRP78表达明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高糖高脂干预组比较,高糖高脂+Par-4抑制组细胞凋亡率[(18.34±2.11)%]明显下降,Par-4和GRP78表达明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:抑制Par-4表达可改善高糖高脂诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡,其机制可能与降低了β细胞内质网应激水平有关。

癌症相关促凋亡蛋白Par-4的信号转导途径预测研究

利用支持向量机(SVM)技术构建Par-4关联的蛋白质相互作用网络,预测出与Par-4有相互作用的蛋白质82个;这些蛋白质按照功能划分为8大类,主要包括:蛋白激酶、泛素化蛋白酶、死亡受体相关因子、与细胞周期或DNA复制相关蛋白质、调节蛋白质、与疾病相关蛋白质、具有特定结构域结合蛋白质和其他蛋白质等。结合文献挖掘和数据库检索信息,推断出了Par-4的2条可能新的信号转导途径。首次预测到Par-4与一大类泛素化蛋白有密切的关系。研究发现,Par-4与多种蛋白质具有复杂的相互作用,并且,在多个细胞凋亡途径中扮演了重要角色。