基于PARP-1/AIF信号通路分析针刺对急性缺血性卒中大鼠脑血流及行为学恢复的影响

目的基于PARP-1/AIF信号通路分析针刺对急性缺血性卒中大鼠脑血流及行为学恢复的影响。方法将40只健康成年雄性SPF级大鼠分为Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组,每组10只,除Sham组外均建立动物模型,针刺组及针刺+PJ34组大鼠均进行针刺治疗,针刺+PJ34组以10μmoL/g腹腔注射多聚腺苷二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)抑制剂PJ34,Sham组及模型组不进行针刺干预,均注射相同体积的0.9%生理盐水。11分制单盲评分评价建模后、干预第1、2、3天行为学评分;多普勒仪探头记录软脑膜微循环血流量;HE染色观察脑组织病理形态;TUNEL法检测各组神经细胞凋亡率;免疫组化检测Bax、Bcl-2阳性表达;免疫印迹检测PARP-1、凋亡诱导因子(AIF)蛋白含量。结果建模后,模型组、针刺组及针刺+PJ34组的行为学评分均升高,与Sham组比较差异有统计学意义(P<0.05),干预第1、2、3天时与模型组相比,针刺组行为学评分均降低(P<0.05),针刺+PJ34组上述时间行为学评分均降低,与针刺组比较差异有统计学意义(P<0.05);Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组的软脑膜微循环血流量分别为(756.35±102.33)、(233.06±45.17)、(416.40±63.55)、(560.80±72.04)AU,组间比较差异均有统计学意义(F=90.390,P<0.001);HE染色示Sham组大鼠脑组织及神经细胞排列整齐,模型组脑组织紊乱且神经细胞数目减少,针刺组及针刺+OJ34组神经细胞存活较多,排列整齐;Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组的神经细胞凋亡率分别为(3.30%±0.21%)、(30.04%±4.52%)、(16.30%±2.25%)、(11.69%±1.33%),组间比较差异均有统计学意义(F=90.390,P<0.001);与Sham组比较,模型组大鼠Bax阳性细胞数降低,Bcl-2阳性细胞数、PARP-1、AIF蛋白升高(均P<0.05),与模型组相比,针刺组及针刺+PJ34组的Bax阳性细胞数及Bcl-2阳性细胞数、PARP-1、AIF蛋白升高(均P<0.05),针刺组及针刺+PJ34组上述指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论急性缺血性卒中大鼠采用针刺干预后能够改善行为学,增加脑血流灌溉的同时可通过调节细胞凋亡因子而减少神经细胞凋亡,研究机制可能与抑制PARP-1、AIF活性相关。

MicroRNA-21/PARP-1作为生物标志物在AR和CARAS中的诊断价值分析

目的:评估外周血microRNA(miR)-21、血浆聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]在过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)和过敏性鼻炎-哮喘综合征(combined allergic rhinitis and asthma syndrome,CARAS)中的诊断价值。方法:收集44例CARAS患者、31例AR患者和42例健康对照的外周血,采用RT-qPCR法检测外周血中miR-21的表达水平,采用ELISA法检测血浆中PARP-1蛋白水平。应用Pearson进行相关性分析。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线判断miR-21和PARP-1的诊断灵敏度与特异度。结果:CARAS组患者外周血miR-21的表达较健康对照组升高。AR组患者血浆PARP-1的水平较CARAS组和健康对照组升高。Pearson相关性分析结果显示,外周血miR-21的表达水平在AR患者中与嗜酸性粒细胞计数相关,在CARAS患者中与鼻呼出气一氧化氮(fractional nasal nitric oxide,FnNO)水平相关;血浆PARP-1在AR患者中与1秒钟用力呼气量占预计值百分比(forced expiratory volume in onesecond percent predicted,FEV_(1)%_(pred))相关,在CARAS患者中与FEV_(1)%_(pred)及1秒钟用力呼气量(forced expiratory volume in one second,FEV_(1))/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)(FEV_(1)/FVC)相关。ROC曲线分析显示,外周血miR-21作为CARAS的诊断标志物时,灵敏度为51.35%,特异度为80.95%。血浆PARP-1作为AR的诊断标志物时,灵敏度为90.32%,特异度为54.76%。血浆PARP-1作为AR进展为CARAS的诊断标志物时,灵敏度为45.45%,特异度为90.32%。结论:AR和CARAS患者外周血miR-21、PARP-1存在差异表达,外周血miR-21可作为CARAS的诊断标志物,PARP-1可作为AR的诊断标志物及AR进展为CARAS的生物标志物。这对寻求AR和CARAS的诊治靶点有十分重要的价值。

PARP-1在染料木素作用小鼠卵泡发生进程中的表达特征

【目的】旨在探究PARP-1信号及其介导的PAR化修饰水平在染料木素促进卵泡发育和抑制卵泡闭锁进程中的相关性,丰富染料木素等类雌激素物质作用于雌性哺乳动物卵巢卵泡发生的作用机制,以期为种畜高产日粮配方的研制提供科学指导。【方法】以21 d雌性昆明小鼠为试验动物,采用腹腔注射25,50,100 mg/kg不同剂量染料木素,每日定点注射1次,连续7 d,采集卵巢组织和血清,采用免疫组织化学法检测PARP-1蛋白在卵巢组织内的表达特征,并运用Western blot对卵巢组织内PARP-1蛋白及pADPr进行定量。结合凋亡指示蛋白Cleaved-caspase3、雌二醇(E2)水平、类固醇合成酶CYP19A1和HSD17B1,综合分析PARP-1信号及其介导的PAR化修饰信号是如何参与染料木素抑制卵泡闭锁、促进卵泡发育进程。【结果】免疫组织化学染色显示,PARP-1阳染主要发生在原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、有腔卵泡中的健康颗粒细胞核和卵母细胞,卵泡膜细胞次之,但在Cleaved-caspase3阳染的凋亡细胞中PARP-1不表达。Western blot结果显示,50 mg/kg染料木素处理组PARP-1解离片段(89 ku)的表达量较对照组显著降低(P<0.05),但PARP-1全段(116 ku)表达量在各剂量组无显著差异(P>0.05)。其次,50 mg/kg染料木素处理组的pADPr的表达量在15 ku以下、25 ku以及35~45 ku这3个区域内均显著低于对照组、25 mg/kg和100 mg/kg剂量组(P<0.05),100 mg/kg剂量组的pADPr仅在25 ku区域处表达量较对照组和25 mg/kg剂量组显著降低(P<0.05)。然而,较对照组,Cleaved-caspase3的表达量在25 mg/kg和50 mg/kg染料木素处理组呈现剂量依赖性下降,且在50 mg/kg剂量组差异显著(P<0.05);E2水平较对照组亦呈现剂量依赖性上升且差异显著(P<0.05),但雌激素合成酶CYP19A1和HSD17B1的表达无显著变化(P>0.05)。【结论】PARP-1广泛存在于哺乳动物卵巢内健康的颗粒细胞、卵泡细胞和膜细胞中,可能通过催化pADPr的合成,介导卵巢内的能量代谢、细胞凋亡以及类固醇激素合成等胞内活动,参与染料木素等类雌激素物质干扰卵巢卵泡发生进程。

SIRT3抑制PARP-1活性缓解多巴胺能神经元炎症损伤

目的研究多巴胺能神经元SIRT3表达对小胶质细胞活化所致其炎症损伤的抵抗作用及相关机制。方法建立多巴胺能神经元MN9D细胞与小胶质细胞BV-2共培养体外炎症损伤模型。将MN9D细胞分为对照组、模型组、SIRT3组、SIRT3+PJ34(PARP-1抑制剂)组。实时定量聚合酶链式反应分析mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1法检测线粒体膜电位变化,酯化钙黄绿素与氯化钴共孵育法分析线粒体通透性转运孔(mPTP)开放情况,Western blot检测蛋白表达情况。结果与模型组比较,SIRT3过表达则使SIRT3组MN9D细胞的凋亡率明显降低,SIRT3和SOD_(2)基因表达明显增多,PARP-1、TNF-α及IL-1β蛋白表达明显减少,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值明显变小,线粒体膜电位上升,mPTP开放和ROS生成减少,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);SIRT3+PJ34组MN9D细胞PARP-1活性抑制后,除SIRT3和IL-1β蛋白表达变化不明显外,其它考察指标的变化趋势在SIRT3组基础上进一步增大,两组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论SIRT3表达能够缓解小胶质细胞激活所致多巴胺能神经元的炎症损伤,机制可能与其改善线粒体功能,减少ROS生成抑制PARP-1活性及NF-κB信号通路有关。

山柰酚通过下调PARP-1抑制炎症反应和心肌细胞凋亡改善心肌梗死大鼠心功能障碍的研究

目的:观察山柰酚(KMP)对心肌梗死(MI)大鼠炎症反应和心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MI组)、KMP组(给予KMP)、DPQ组[给予聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶1(PARP-1)抑制剂]和KMP+DPQ组(给予KMP联合PARP-1抑制剂),每组10只。除Sham组外,其余各组大鼠以冠状动脉左前降支结扎法建立MI模型。各组进行对应药物处理后,采用超声心动图检查大鼠心功能指标,酶联免疫吸附试验检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)活性以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,苏木精-伊红染色观察大鼠心肌组织病理形态学,原位末端转移酶标记染色检测大鼠心肌细胞凋亡,蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织中TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白以及PARP-1蛋白表达。结果:与MI组相比,KMP组、DPQ组大鼠左心室收缩末期内径、左心室舒张末期内径显著降低,左心室短轴缩短率、左心室射血分数以及血清CK-MB、cTnI水平显著升高,心肌组织病理损伤显著减轻,细胞凋亡率、炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)水平显著降低,心肌组织炎症因子相关蛋白、PARP-1蛋白表达显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。KMP+DPQ组对MI大鼠心功能的改善作用显著优于KMP组、DPQ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:KMP可能通过下调PARP-1表达抑制心肌炎症反应和心肌细胞凋亡,进而改善MI大鼠心功能障碍。

一贯煎通过调节Parp-1的翻译后修饰保护肝细胞DNA

目的观察一贯煎(Yiguanjian decoction,YGJ)影响Parp-1修复H_(2)O_(2)诱导肝细胞DNA损伤的机制。方法培养小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2,建立H_(2)O_(2)细胞损伤模型并用YGJ预处理,CCK-8检测细胞活力,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞死亡,EDU掺入检测细胞增殖,8-羟基脱氧鸟苷比色法和γ-H_(2)AX细胞荧光染色检测DNA损伤。免疫印迹法检测Parp-1、Parp-1的Par化和乙酰化。结果H_(2)O_(2)作用后,肝细胞凋亡率增加;细胞增殖被明显抑制;DNA损伤持续存在于整个实验过程。Parp-1在6 h升高后维持高表达,Parp-1的Par化和乙酰化均先升高随后降低。Sirt-1的抑制剂EX527可明显提高Parp-1的Par化,而其激动剂SRT1720可明显降低Parp-1的Par化。YGJ作用后细胞凋亡率和DNA损伤明显减少,增殖细胞数明显增加,Parp-1高表达时间点提前,Parp-1的Par化明显提高,乙酰化时间点推迟,且持续时间更长。结论YGJ可降低H_(2)O_(2)诱导的肝细胞DNA损伤,其作用机制与Sirt-1对Parp-1去乙酰化维持其含量、负调控Parp-1的Par化维持一定的活性有关。

PARP-1抑制剂通过激活SIRT1-PGC-1α轴减轻慢性阻塞性肺疾病大鼠的炎症和氧化应激反应

目的:通过构建慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠实验模型,探讨聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂是否通过调控沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)减轻COPD大鼠的炎症和氧化应激反应,探究SIRT1-PGC-1α轴作为PARP-1抑制剂作用新靶点的可能性。方法:将48只SD大鼠随机选取12只作为健康组,剩余大鼠构建COPD实验模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、PARP-1抑制剂处理组、PARP-1抑制剂+PGC-1α抑制剂组,HE染色观察肺组织病理形态变化,ELISA检测大鼠肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,荧光定量PCR法检测各组大鼠SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、PGC-1α蛋白表达。结果:健康组大鼠肺组织结构完整,与健康组相比,模型组大鼠肺组织产生结构损伤,有大量炎症细胞浸润,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高,血清中MDA含量显著升高,SOD含量显著降低,SIRT1、PGC-1αmRNA及蛋白表达量显著降低;与模型组相比,PARP-1抑制剂处理组大鼠肺组织结构恢复,炎症细胞减少,TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著降低,血清中MDA含量显著降低,SOD含量显著升高,SIRT1、PGC-1αmRNA及蛋白表达量显著升高;与PARP-1抑制剂处理组相比,PARP-1抑制剂+PGC-1α抑制剂组炎症细胞数量增加,TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高,血清中MDA含量显著升高,SOD含量显著降低,SIRT1、PGC-1αmRNA及蛋白表达显著降低。结论:PARP-1抑制剂可通过激活SIRT1-PGC-1α轴,缓解炎症和氧化应激反应,从而有效缓解COPD。

CHFR基因和PARP-1基因对裸鼠Raji淋巴瘤细胞增殖和凋亡调控的研究

目的CHFR基因是一种抑癌基因,低表达或表达缺失可能促淋巴瘤细胞增殖,PARP-1基因参与其对淋巴瘤细胞增殖的调控,本研究旨在通过过表达CHFR基因及分别沉默CHFR、PARP-1基因,观察其对裸鼠移植瘤Raji细胞的影响,探讨CHFR基因和PARP-1基因调控裸鼠Raji淋巴瘤细胞的增殖和凋亡机制。方法在非霍奇金B细胞裸鼠Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞中,用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)过表达CHFR基因,及用慢病毒介导的shRNA分别沉默CHFR、PARP-1基因,测定各组裸鼠移植瘤的肿瘤的大小及重量;采用实时荧光定量PCR技术测定各组CHFR及PARP-1基因mRNA含量;应用MSP方法检测各组CHFR的甲基化状态;分别通过TUNEL试剂盒和免疫组化监测凋亡指数(AI)和微血管密度(MVD)。结果5-Aza-dC组的裸鼠在非霍奇金B细胞Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞能增强CHFR基因mRNA的表达,降低PARP-1基因mRNA的表达;在体内环境中,5-Aza-dC能够促进移植瘤Raji细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长(P<0.05),这些结果与shRNA-CHFR组结果相反,与shRNA-PARP-1组结果一致。而且实验中可见5-Aza-dC组的裸鼠移植瘤的CHFR基因发生去甲基化。结论CHFR基因低表达促进肿瘤细胞增殖,PARP-1基因低表达促进肿瘤细胞凋亡,而5-Aza-dC可以去甲基化抑制肿瘤细胞增殖。

PARP-1/PI3K双靶点抑制剂的设计、合成与生物活性

磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)抑制剂可以增加肿瘤细胞对聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP-ribose polymerase-1,PARP-1)抑制剂的敏感性,因此,同时抑制PARP-1和PI3K活性有望克服PARP-1抑制剂的耐药性。本课题组前期获得了两个对PARP-1和PI3K均具有优良抑制活性的化合物XW-1和WZ-1,但是由于水溶性差限制其进一步研究。本研究以XW-1和WZ-1为先导化合物,通过连接脲基团引入成盐位点以提高化合物的水溶性,设计合成了11个目标化合物。所有目标化合物的结构经1 H NMR、13C NMR和HRMS确认。测定了化合物对PARP-1和PI3K的酶抑制活性,结果显示,大部分化合物对PARP-1和PI3K的抑制活性均较好。在此基础上,采用MTT法测定了化合物8b、8e和8f对MDA-MB231、MDA-MB-468、HCC1937、HCT116以及对奥拉帕尼耐药的HCT116R等5种肿瘤细胞的增殖抑制活性,并进行了构效关系讨论。结果显示,3个化合物都具有优异的抗肿瘤细胞增殖活性。其中,化合物8f对5种肿瘤细胞的抗增殖活性都显著强于阳性药奥拉帕尼,并与BKM120相当。选择化合物8b和8f制成相应的盐酸盐,并测定其水溶性,结果显示两个化合物的水溶性都得到了显著性提升。本研究为进一步研发成药性好且抑制活性强的PARP-1/PI3K双靶点抑制剂提供了实验依据。

PARP-1基因多态性与妊娠期高血压的相关性及潜在分子机制研究

目的探讨多聚ADP核糖转移酶(PARP-1)基因多态性与妊娠期高血压(HDP)的相关性,以及HDP的潜在发病机制。方法纳入2021年8月至2022年6月在该院就诊的80例HDP孕妇作为HDP组,以及同期80例健康孕妇作为对照组。对比两组临床资料,采用荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞PARP-1、TRL7、MyD88和核因子-κB(NF-κB)mRNA水平及PARP-1基因不同位点的单核苷酸多态性,采用Western blotting法检测外周血单个核细胞PARP-1、TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量;Logistic回归模型分析PARP-1单核苷酸多态性与HDP的相关性;采用Pearson相关性分析PARP-1 mRNA和蛋白表达与NF-κB通路蛋白表达的相关性。结果HDP组血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、sFlt-1/胎盘生长因子(sFlt-1/PLGF)水平,PARP-1、TRL7、MyD88和NF-κB mRNA水平,以及PARP-1、TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量高于对照组,PARP-1基因rs1805414位点CC基因型高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归模型分析显示,sFlt-1/PLGF(OR=1.236)、PARP-1 mRNA(OR=107.998)及PARP-1基因rs1805414位点CC基因型(OR=3.788)是HDP患者发生子痫前期(PE)的独立危险因素(P<0.05);Pearson相关性分析显示,PARP-1 mRNA水平与TRL7、MyD88和NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.782、0.688、0.903,均P<0.05);PARP-1蛋白相对表达量与TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量呈正相关(r=0.833、0.845、0.907,均P<0.05)。结论PARP-1表达水平及多态性与HDP发病密切相关,特别是rs1805414位点CC突变可作为HDP遗传易感性的敏感指标;NF-κB信号通路在PARP-1参与HDP发病中发挥了重要的作用。

DNA损伤修复蛋白PARP1聚ADP-核糖基化有丝分裂蛋白BUB3调控HeLa细胞的有丝分裂

目的探讨DNA损伤修复蛋白聚ADP-核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1]对HeLa细胞有丝分裂的影响及其分子机制。方法使用流式细胞术、细胞免疫荧光、活细胞成像检测PARP1对HeLa细胞有丝分裂进程的影响。采用染色体核型分析、细胞免疫荧光检测PARP1对HeLa细胞染色体稳定性的影响。使用蛋白免疫印迹和免疫共沉淀检测HeLa细胞有丝分裂期PARP1的蛋白表达及酶活性变化。使用蛋白质组质谱分析方法鉴定与PARP1在有丝分裂期具有特异性相互作用的蛋白并进行免疫共沉淀及聚ADP-核糖基化实验验证。结果流式细胞术和细胞免疫荧光结果显示,敲低PARP1或使用奥拉帕尼抑制PARP1的酶活性后,HeLa细胞对诺考达唑诱导的有丝分裂阻滞反应显著下降(P<0.05)。活细胞成像结果显示,敲低PARP1后HeLa细胞的平均有丝分裂时间缩短(P<0.01)。染色体核型分析和免疫荧光结果显示,敲低PARP1后非整倍体细胞和多极纺锤体细胞的比例明显增加(P<0.05)。蛋白免疫印迹结果显示有丝分裂期PARP1的蛋白表达量无明显变化,免疫共沉淀实验结果显示其酶活性显著增加。蛋白质组质谱鉴定和免疫共沉淀结果显示,PARP1与有丝分裂检查点复合体(mitotic checkpoint complex,MCC)的主要组成蛋白BUB3在有丝分裂期具有特异性相互作用,并且BUB3可以发生聚ADP-核糖基化修饰。结论DNA损伤修复蛋白PARP1可能通过上调其酶活性并聚ADP-核糖基化MCC蛋白BUB3以调控HeLa细胞有丝分裂的正常进行并维持其染色体稳定性。

和厚朴酚通过抑制脑MPTP开放和调节PARP-1活性保护全脑缺血的作用研究

目的研究和厚朴酚微乳剂对全脑缺血的影响,探讨其可能的作用机制。方法用断头法制备小鼠急性全脑缺血模型;用分光光度法观察脑线粒体通透性转换孔(MPTP)开放程度;用荧光法测定聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)活性;用MTT法侧细胞活力。结果和厚朴酚(7～70μg.kg-1)单次静注可剂量依赖地增加小鼠断头后喘息次数、降低小鼠脑匀浆液中乳酸的含量,升高脑匀浆液中ATP的含量。和厚朴酚(2.5μmol.L-1～10μmol.L-1)可浓度依赖地降低脑组织MPTP的开放,它可浓度依赖地抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)活性,其IC50=76.82μmol.L-1,和厚朴酚可明显提高缺氧损伤的PC12细胞存活率。结论和厚朴酚对全脑缺血有保护作用,该作用与其可能减轻缺血状态、抑制能量耗竭和乳酸堆积有关,可能与抑制神经细胞MPTP开放、抑制PARP-1的活性、从而保护神经细胞有关。这些结果为其治疗全脑缺血提供了实验依据。

促红细胞生成素对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠认知功能的影响及对相关PARP-1/AIF信号通路的调控机制研究

目的:研究促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBI)模型新生大鼠认知功能的影响以及对相关聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)/凋亡诱导因子(AIF)信号通路的调控机制。方法:将SD新生大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(HIBI组)和EPO干预组(EPO组),每组22只。HIBI组和EPO组大鼠采用Rice法建立HIBI模型,Sham组大鼠切口后即缝合而不作缺氧缺血处理。造模完毕后,EPO组大鼠每天腹腔注射重组人促红素注射液5 000 IU/kg,连续给药14 d;Sham组和HIBI组大鼠则腹腔注射等容生理盐水。取大鼠脑组织,采用TTC染色法检测梗死情况;采用TUNEL法检测海马组织CA1区神经细胞凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法检测海马组织CA1区中PARP-1、AIF、Bax蛋白表达水平;采用Morris水迷宫实验考察大鼠空间学习记忆能力。结果:与Sham组比较,HIBI组大鼠脑组织梗死面积比显著升高,海马组织CA1区中TUNEL阳性凋亡细胞数显著增多,PARP-1、AIF、Bax蛋白表达水平均显著升高;Morris水迷宫实验中大鼠的逃避潜伏期显著延长,穿台指数显著减少;上述差异均有统计学意义(P<0.05)。与HIBI组比较,EPO组大鼠脑组织梗死面积比显著降低,海马组织CA1区中TUNEL阳性凋亡细胞数显著减少,PARP-1、AIF、Bax蛋白表达水平均显著降低;Morris水迷宫实验中大鼠的逃避潜伏期显著缩短,穿台指数显著增加;上述差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:EPO能够明显抑制HIBI引起的大鼠神经细胞凋亡而发挥脑组织保护作用,并能促进大鼠认知功能的恢复,这一作用很可能是通过抑制细胞凋亡PARP-1/AIF信号通路来实现的。

电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡PARP-1裂解片段表达的影响

目的:观察电针对脊髓损伤后神经细胞凋亡基因PARP-1裂解片段表达的影响。方法:采用Allen's法制备急性脊髓损伤模型。动物分为电针组、药物组(Caspase-3抑制剂组)、模型组、假手术组。应用TUNEL法对细胞凋亡进行标记。结果:脊髓损伤后6h即发现神经细胞凋亡,1d达到高峰,3d、7d、14d随后下降。凋亡的细胞主要位于脊髓灰质前角。且电针对PARP-1裂解片段在1d、14d有明显抑制作用。结论:PARP-1裂解片段可能促进神经元的凋亡而参与了脊髓继发性损伤。电针通过抑制PARP-1裂解片段在大鼠脊髓损伤神经元中表达,抑制神经细胞凋亡而减轻脊髓继发性损伤。

筋脉通含药血清降低高糖培养大鼠雪旺细胞活性氧水平及PARP-1蛋白表达

目的研究筋脉通含药血清对体外高糖培养雪旺细胞活性氧(ROS)水平及多聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)蛋白表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组,分别灌胃筋脉通(JMT)、维生素C(VC)或蒸馏水制备含药血清和对照血清。取新出生大鼠的双侧坐骨神经用于制备雪旺细胞,分为高糖组、JMT组(加入筋脉通含药血清)、VC组(加入维生素C含药血清)及正常对照组。培养48 h后,采用激光扫描共聚焦显微技术检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平;采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞PARP-1(89 ku)的蛋白表达。结果 1)高糖组雪旺细胞ROS-DCF荧光值(86.59±8.14)显著高于正常值(P<0.01);筋脉通含药血清组(44.58±8.67)与维生素C含药血清组(46.12±8.80)均显著低于高糖组(P<0.01)。2)与正常组比较,高糖组雪旺细胞内PARP-1(89 ku)含量(0.712±0.012)明显增加(P<0.01);与高糖组比较,筋脉通含药血清组含量(0.307±0.025)明显降低(P<0.01),且明显优于维生素C组(0.594±0.017)(P<0.01)。结论筋脉通含药血清能显著减少ROS生成,降低PARP-1的活性和酶解,减轻细胞DNA氧化损伤。

联合应用PARP-1与Caspase-3抑制剂对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：探讨联合应用多聚腺嘌呤二核苷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）抑制剂3-氨基苯甲酰胺（3-aminobenzamide,3-AB）和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响。方法：120只成年健康SD大鼠随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、PARP-1抑制剂组（C组）和联合用药组（D组）,每组30只。以Allen′s打击法制备大鼠脊髓损伤模型,每组分别于造模后1d、3d、7d取5只大鼠行BBB评分,处死后利用免疫组化方法检测损伤部位脊髓内PARP-1、凋亡诱导因子（AIF）、Caspase-3及Bcl-2的表达;各时间点各组剩余大鼠处死后利用Western blotting检测PARP-1、Caspase-3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测PARP-1、AIF、Caspase-3及Bcl-2的m RNA水平,采用原位末端标记（TUNEL）法检测神经细胞凋亡情况。结果：造模后1d时B、C、D组大鼠BBB评分均为0分;3d时三组间的评分无统计学差异;7d时D组及C组明显高于B组,且D组最高（P〈0.05）。免疫组化及Western blotting结果显示,脊髓损伤后1-7d,B组脊髓组织中PARP-1、AIF及Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2表达逐渐减弱（P〈0.05）;与B组比较,D组及C组的PARP-1、AIF、Caspase-3表达均显著降低,且D组最低（P〈0.05）;而D组及C组的Bcl-2表达显著高于B组,且D组最高（P〈0.05）。实时荧光定量PCR检测各目的基因表达水平与其蛋白水平一致。TUNEL结果显示,B组脊髓损伤后3d凋亡细胞最多,7d时数量减少,但仍保持在较高水平（P〈0.05）;D组及C组凋亡细胞指数均显著低于B组,且D组最低（P〈0.05）。结论：联合应用PARP-1抑制剂3-AB和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK可有效抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,其机制可能与PARP-1、AIF、Caspase-3的表达抑制及Bcl-2的表达上调有关。

PARP-1及其相关因子在适应性反应中的表达改变

目的探讨PARP-1在适应性反应中的作用。方法低剂量甲醛预处理人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,观察细胞对高剂量甲醛攻击的适应性反应。在MTT法检测细胞存活率的基础上,荧光定量PCR技术测定不同组细胞中PARP-1及其相关因子表达的变化。结果用低剂量甲醛预刺激可提高细胞对继后大剂量甲醛攻击的抵抗力;低剂量甲醛能引起PARP-1及其相关因子表达增加,产生适应性反应时这种增加尤为突出,其中PARP-1的表达量是对照组的147倍。结论低剂量的甲醛可使PARP-1活化,进而调节其相关因子DNA-PK、P53、NF-κB的表达,促使细胞免疫功能增强,启动适应性反应的产生。

血清PARP-1蛋白高表达在胃癌中的临床意义

背景与目的:PARP-1与恶性肿瘤密切相关。该研究旨在考察血清PARP-1蛋白水平在胃癌发生、发展中的临床意义。方法:收集145例胃癌患者血样以及112例健康体检者血清样本,应用酶联免疫吸附试验法检测血清中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)特异性Ig A和PARP-1蛋白水平,并分析血清PARP-1蛋白水平与胃癌临床特征的相关性。结果:与健康人相比,胃癌患者血清PARP-1蛋白显著增高[(407±139)pg/mL vs(258±120)pg/mL,P=0.014];Hp阳性胃癌患者PARP-1的表达水平显著高于Hp阴性患者(P<0.001);血清PARP-1蛋白水平与胃癌患者的胃癌家族史(P=0.033)和饮酒史(P=0.015)有着显著正相关性;与血清PARP-1蛋白阴性的患者相比,PARP-1蛋白阳性的胃癌患者的总体生存期显著缩短(P=0.011);多变量COX回归分析未发现血清PARP-1蛋白水平为影响胃癌患者总体生存期的独立风险因素。结论:血清PARP-1蛋白高表达可能参与胃癌的发生、发展,抑制PARP-1有可能成为治疗胃癌的潜在新靶点。

心理护理对老年乳腺癌化疗患者血清PARP-1和Caspase-3蛋白表达水平的影响

目的观察心理护理对老年乳腺癌化疗患者血清中PARP-1和Caspase-3蛋白表达水平的影响。方法 80例老年乳腺癌化疗患者,随机分为常规护理组和心理护理组;两组乳腺癌患者均于化疗第1天及化疗21 d后采血,采用ELISA方法检测血清中PARP-1和Caspase-3蛋白含量;采用实时荧光定量法检测PARP-1和Caspase-3 mRNA的表达水平。结果与化疗前比较,化疗后两组PARP-1蛋白含量及mRNA的表达水平均降低(P<0.05)(P<0.01),且Caspase-3蛋白含量及mRNA的表达水平均升高(P<0.05,P<0.01)化疗后常规护理组PARP-1蛋白含量及mRNA的表达水平高于心理护理组(P<0.05),Caspase-3蛋白含量及mRNA的表达水平低于心理护理组(P<0.05)。结论心理护理能减轻老年乳腺癌患者化疗的负反应,提高术后生活质量。

PARP-1和p53在三阴性乳腺癌中表达的相关性及临床意义

目的:探讨PARP-1和p53在三阴性乳腺癌中表达的相关性及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测85例三阴性乳腺癌中PARP-1和p53的表达,并进一步分析PARP-1和p53表达的相关性及PARP-1的表达与患者临床病理参数之间的关系。结果:PARP-1在三阴性乳腺癌中的过表达率为61.18%(52/85),p53的阳性表达率为65.88%(56/85),PARP-1的表达与p53的表达具有显著相关性(P<0.05)。PARP-1与p53共表达的患者生存时间显著短于非共表达的患者(P<0.05)。在三阴性乳腺癌中,PARP-1的表达与患者的TNM分期(P<0.05)、淋巴结转移状态(P<0.05)密切相关,但与患者年龄、肿瘤组织学分化程度无显著关系(P>0.05)。术后生存时间也显示PARP-1阳性表达的患者明显短于阴性表达的患者(P<0.05)。结论:PARP-1和p53在三阴性乳腺癌中的表达具有相关性,且PARP-1和p53共表达与乳腺癌患者的不良预后密切相关。