脂多糖诱导大鼠肝细胞PARP-1依赖性细胞死亡的初步研究

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠肝细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]依赖性细胞死亡的影响。方法 :大鼠肝细胞株BRL细胞常规培养,用0.1~10 mg/L LPS处理大鼠肝细胞12 h或24 h,部分实验中大鼠肝细胞LPS处理前1 h先用PARP-1抑制剂PJ-34或3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3-AB)预处理。用CCK-8试剂盒检测细胞活力。用蛋白免疫印迹技术检测蛋白表达。结果 :与溶剂对照组比较,LPS能剂量和时间依赖性引起大鼠肝细胞PARP-1蛋白表达上调和PARP-1活性产物多聚二磷酸核糖[poly-(ADP-ribose),PAR]修饰蛋白数量增多,大鼠肝细胞活力降低以及反映细胞凋亡的PARP-1裂解片段增多,3-AB或PJ-34部分翻转LPS诱导的大鼠肝细胞的活力降低。结论:LPS能诱导大鼠肝细胞PARP-1依赖性细胞死亡。

HIV-1Tat蛋白的羧基端可调节CD178介导的T细胞凋亡程度

据医学空间网9月22日报道（原载J Biol Chem2005Sep9），HIV感染细胞并发展成AIDS是通过使CD4＋T细胞发生非炎症凋亡和直接杀死感染了HIV的细胞这两条途径来实现的。这个过程的一部分由HIV-1Tat蛋白介导，这个蛋白从感染了病毒的细胞中分泌出来并被未感染细胞吸收，另一部分是由在T细胞凋亡中起关键作用的CD178基因的表达所介导。不用亚型的HIV病毒诱导细胞死亡的能力是不一样的，这种不一样引起了不同HIV亚型临床和生物学表现上的不同。美国科学家通过化学合成了只有86个氨基酸的Tat蛋白片断和它的全长蛋白，

杨桃根提取物DMDD对α-synuclein PFFs所致分化SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨不同浓度杨桃根提取物DMDD对α-突触核蛋白预制原纤维(α-Syn PFFs)所致分化SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及作用机制。方法:使用不同浓度DMDD作用于视黄酸分化的SH-SY5Y细胞,通过MTS测定细胞活力,确定DMDD作用于分化SH-SY5Y细胞的低、中、高浓度;使用不同浓度的DMDD处理5μg/mLα-Syn PFFs诱导的细胞损伤模型,采用Hoechst 33342染色和一氧化氮试剂盒分别检测细胞核损伤细胞数与细胞内一氧化氮产生量;采用蛋白质印迹法检测细胞内酪氨酸羟化酶(TH)、多聚腺苷酸二磷酸(PAR)及多聚腺苷酸二磷酸核糖酶-1(PARP-1)蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测细胞内129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白(pS129-α-Syn)、磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)阳性细胞数及凋亡诱导因子(AIF)核易位细胞数。结果:Hoechst 33342染色结果显示,与α-Syn PFFs模型组比较,各浓度DMDD处理组出现细胞核损伤的细胞数明显减少(P<0.001);一氧化氮检测结果显示,与α-Syn PFFs模型组比较,各浓度DMDD处理组细胞一氧化氮生成量显著降低(P<0.01或P<0.001);蛋白质印迹法结果显示,与α-Syn PFFs模型组比较,高浓度DMDD处理组细胞TH蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而中、高浓度DMDD处理组细胞PAR蛋白表达水平明显降低(P<0.05),高浓度DMDD处理组细胞PARP-1、Cleaved PARP-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,与α-Syn PFFs模型组比较,中、高浓度DMDD处理组pS129-α-Syn阳性细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01),各浓度DMDD处理组γH2AX阳性细胞数明显减少(P<0.01或P<0.001),AIF核易位细胞数也明显减少(P<0.01或P<0.001)。结论:DMDD可能通过抑制PARP-1/AIF通路介导的PARP-1依赖性死亡途径减轻α-Syn PFFs所致分化SH-SY5Y细胞损伤。

PD1抑制剂致免疫介导性肺炎一例

人体免疫系统对变异细胞具有监视和清除能力,肿瘤早期癌细胞通过改变其表型逃脱免疫监视,在进展和转移时又需通过更多机制来保证自己不被机体清除。程序性死亡蛋白-1（PD-1）在肿瘤细胞的表达不但使肿瘤细胞逃避宿主免疫反应,而且使肿瘤逃避免疫治疗。PD-1抑制剂可以阻断PD-1与程序性死亡配体-1（PDL1）的结合,阻断负向调控信号,使T细胞恢复活性,从而增强免疫应答。

大鼠双侧肾切除后肝细胞的损伤方式

目的:观察大鼠双侧肾切除[非缺血性急性肾损伤(non ischemic acute kidney injury,NIAKI)]引起肝细胞损伤方式。方法:应用Western blot、免疫组织化学染色方法和光学、电子显微镜技术对双侧肾切除24 h后的大鼠肝脏进行了观察。结果:双侧肾切除24 h后的大鼠发生了急性肝功能受损,肝脏出现了大小不等坏死灶以及大面积区域性肝细胞的空泡样改变。光、电镜观察结果证明前者以细胞坏死为主,后者以细胞内出现大量空泡为主要表现。此外尚可见少许肝细胞凋亡的表现。Western blot的结果说明双侧肾切除后肝脏内多聚ADP核糖聚合酶(polyADP-ribose polymerase,PARP)-1过度激活,肿瘤坏死因子受体1和caspase-3蛋白表达均增强。免疫组化染色结果可见双侧肾切除后肝脏内出现了PARP-1阳性和caspase-3阳性的肝细胞。结论:形态学上NIAKI可引起肝细胞坏死,肝细胞空泡化与细胞凋亡,以前2种损伤为明显。从生物化学角度可以看出PARP-1介导的细胞死亡与caspase依赖的细胞死亡参与了NIAKI引起的急性肝损伤。

阻断PD-1免疫检测点减轻阿尔茨海默病小鼠的病变并提高其认知能力

全身性免疫抑制会减弱机体的防护功能,而神经系统的修复需要细胞介导的免疫应答参与。Baruch等使用阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）5个家族性基因突变（five familial AD mutations,5XFAD）的小鼠模型进行研究,

多聚ADP核糖聚合酶-1及其依赖性细胞死亡在神经系统疾病中的研究进展

背景多聚ADP核糖聚合酶-1（poly ADP-ribose polymerase-1，PARP-1）作为-种DNA修复酶，具有维持基因组稳定的生理作用，应激条件下介导细胞程序性死亡，即PARP．1依赖性细胞死亡（PARP-1-dependent cell death，PARthanatos）。目的研究PARP-1及其介导的细胞死亡在脑卒中和神经退行性疾病等神经系统疾病中作用，探讨PARP-1阻断对神经细胞的保护作用。内容持续氧化应激可使PARP-1过度活化，促进凋亡诱导因子（apoptosis induced factor，AIF）转位至细胞核，介导PARthanatos。缺血，再灌注以及谷氨酸兴奋性毒性作用均可产生大量氧自由基，是神经系统疾病主要致病物质。脑卒中和神经退行性疾病中存在持续氧化应激和PARP-1活化，其介导的PARthanatos是神经元死亡的主要方式之一。抑制PARP-1活化具有神经保护作用。趋向PARP-1活化介导脑卒中和神经退行性疾病的发生，阻断PARP-1有望成为治疗该类疾病的新靶点。

免疫组库测序在实体器官移植中的应用

免疫组库一般指T细胞和B细胞的总称,它有着巨大的多样性,使免疫系统能够对多种抗原刺激做出反应。随着测序技术的发展,免疫组库测序可以从基因水平深入了解排斥反应发生时淋巴细胞克隆的变化,也为基于免疫组库测序的新型无创诊断技术的产生提供了可能。近年来,免疫组库测序在实体器官移植中的尝试不断增多,特别是在肾移植、肝移植、心脏移植以及移植后感染等领域。本文对以上领域中应用免疫组库测序的研究进行了综述,总结器官移植中免疫组库测序使用的现状和作为早期无创诊断排斥反应的新技术的潜力,以期为这项技术进一步发展并应用于临床提供借鉴。

AIF在细胞程序性死亡中的研究进展

凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)是参与细胞程序性死亡的重要因子,最早在线粒体凋亡途径中被发现。AIF通过非半胱天冬酶(caspase)依赖的凋亡途径参与细胞凋亡过程,在凋亡信号刺激下,AIF从线粒体释放,引起染色质凝聚和DNA断裂。有研究发现,AIF参与了多聚ADP核糖聚合酶-1(poly ADP-ribose polymerase-1,PARP-1)依赖性细胞死亡(parthanatos)过程。Parthanatos是由PARP-1过度活化后诱导PAR聚合物合成和积累并与AIF结合,随后诱导AIF从线粒体释放来引起大规模的DNA断裂的过程。AIF参与的细胞凋亡和parthanatos在细胞程序性死亡的研究中具有同等重要的意义。本文以AIF为线索,对细胞凋亡和parthanatos两种细胞死亡的机制和相关疾病的研究进展进行总结。

炎症小体在炎症调节中的研究现况

炎症小体（inflammasomes）是一类由胞浆内模式识别受体（PatternRecognitionReceptors，PRRs）参与组装的蛋白复合物，是人体天然免疫系统的重要组成部分，在炎症介导中起重要作用[1]。参与组装的PRRs主要为核苷酸结合寡聚化结构域样受体（nucleotide binding oligomerization domainlikereceptors，NLRs）。炎症小体可通过识别病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）或宿主来源的危险信号分子模式（danger-associa tedmolecu-lar patterns，DAMPs）招募和激活半胱天冬酶Caspase-1.活化的Caspase-1可水解蛋白底物，调控IL-1G和IL-18等炎症因子前体的合成、分泌并诱导细胞程序性死亡（pyro-prosis）[2]。

国外研究信息

Caspase-1缺失时caspase-ll增加对沙门茵感染的易感性 炎症小体是由细胞内核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）样受体介导组装的胞质复合物，它们启动天然免疫识别病原菌和危险信号后，激活caspase-1，进而导致白细胞介素（IL-1β和IL-18）等炎症因子成熟及分泌一种称为“pyrotosis”的特殊细胞死亡。

慢病毒介导RNA干涉Cbl-b抑制A549细胞增殖机制研究

目的探讨敲减Cbl-b对程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1, PD-L1)蛋白表达及肺腺癌A549细胞增殖能力的影响。方法对数生长期A549细胞分为对照组和敲减组,2组采用慢病毒感染法转染目的基因,对照组转染空载体,敲减组转染慢病毒介导的干涉Cbl-b基因,转染后72 h采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白情况,判断转染效率。采用MTT法检测2组细胞转染成功后第1～5天细胞增殖率,采用Western blot检测2组细胞转染后Cbl-b蛋白相对表达量及转染成功后第3、4天PD-L1、Ki-67蛋白相对表达量。结果转染后,敲减组细胞Cbl-b蛋白相对表达量(0.18±0.03)低于对照组(0.75±0.01)(P<0.05);转染后第4、5天,敲减组细胞增殖率[(59.6±0.4)%、(87.2±1.4)%]低于对照组[(65.5±1.7)%、(98.2±2.8)%](P<0.05);转染后第3、4天,敲减组细胞PD-L1(0.51±0.00、0.55±0.02)和Ki-67蛋白相对表达量(0.35±0.01、0.25±0.00)低于对照组(0.55±0.01、0.67±0.02,0.47±0.01、0.33±0.02)(P<0.05),敲减组转染后第4天PD-L1相对表达量高于第3天,Ki-67蛋白相对表达量低于第3天,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论转染慢病毒介导RNA干涉Cbl-b基因能抑制A549细胞Cbl-b蛋白表达及细胞增殖;该过程伴随PD-L1表达上调和Ki-67表达下调。