CHFR基因和PARP-1基因对裸鼠Raji淋巴瘤细胞增殖和凋亡调控的研究

目的CHFR基因是一种抑癌基因,低表达或表达缺失可能促淋巴瘤细胞增殖,PARP-1基因参与其对淋巴瘤细胞增殖的调控,本研究旨在通过过表达CHFR基因及分别沉默CHFR、PARP-1基因,观察其对裸鼠移植瘤Raji细胞的影响,探讨CHFR基因和PARP-1基因调控裸鼠Raji淋巴瘤细胞的增殖和凋亡机制。方法在非霍奇金B细胞裸鼠Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞中,用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)过表达CHFR基因,及用慢病毒介导的shRNA分别沉默CHFR、PARP-1基因,测定各组裸鼠移植瘤的肿瘤的大小及重量;采用实时荧光定量PCR技术测定各组CHFR及PARP-1基因mRNA含量;应用MSP方法检测各组CHFR的甲基化状态;分别通过TUNEL试剂盒和免疫组化监测凋亡指数(AI)和微血管密度(MVD)。结果5-Aza-dC组的裸鼠在非霍奇金B细胞Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞能增强CHFR基因mRNA的表达,降低PARP-1基因mRNA的表达;在体内环境中,5-Aza-dC能够促进移植瘤Raji细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长(P<0.05),这些结果与shRNA-CHFR组结果相反,与shRNA-PARP-1组结果一致。而且实验中可见5-Aza-dC组的裸鼠移植瘤的CHFR基因发生去甲基化。结论CHFR基因低表达促进肿瘤细胞增殖,PARP-1基因低表达促进肿瘤细胞凋亡,而5-Aza-dC可以去甲基化抑制肿瘤细胞增殖。

PARP-1基因多态性与妊娠期高血压的相关性及潜在分子机制研究

目的探讨多聚ADP核糖转移酶(PARP-1)基因多态性与妊娠期高血压(HDP)的相关性,以及HDP的潜在发病机制。方法纳入2021年8月至2022年6月在该院就诊的80例HDP孕妇作为HDP组,以及同期80例健康孕妇作为对照组。对比两组临床资料,采用荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞PARP-1、TRL7、MyD88和核因子-κB(NF-κB)mRNA水平及PARP-1基因不同位点的单核苷酸多态性,采用Western blotting法检测外周血单个核细胞PARP-1、TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量;Logistic回归模型分析PARP-1单核苷酸多态性与HDP的相关性;采用Pearson相关性分析PARP-1 mRNA和蛋白表达与NF-κB通路蛋白表达的相关性。结果HDP组血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、sFlt-1/胎盘生长因子(sFlt-1/PLGF)水平,PARP-1、TRL7、MyD88和NF-κB mRNA水平,以及PARP-1、TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量高于对照组,PARP-1基因rs1805414位点CC基因型高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归模型分析显示,sFlt-1/PLGF(OR=1.236)、PARP-1 mRNA(OR=107.998)及PARP-1基因rs1805414位点CC基因型(OR=3.788)是HDP患者发生子痫前期(PE)的独立危险因素(P<0.05);Pearson相关性分析显示,PARP-1 mRNA水平与TRL7、MyD88和NF-κB mRNA水平呈正相关(r=0.782、0.688、0.903,均P<0.05);PARP-1蛋白相对表达量与TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量呈正相关(r=0.833、0.845、0.907,均P<0.05)。结论PARP-1表达水平及多态性与HDP发病密切相关,特别是rs1805414位点CC突变可作为HDP遗传易感性的敏感指标;NF-κB信号通路在PARP-1参与HDP发病中发挥了重要的作用。

干扰PARP-1基因对人胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响

目的:探讨干扰多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因对人胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。方法:采用qRT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1及人胃癌细胞MKN-45、MGC-803、SGC-7901、AGS、HGC-27中PARP-1 mRNA的表达。取HGC-27细胞分为3组,si-PARP-1组和阴性对照组采用脂质体法分别转染特异性PARP-1 siRNA和si-NC,空白对照组不转染。采用qRT-PCR和Western blot法检测上述3组HGC-27细胞中PARP-1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Annexin-Ⅴ/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中Caspase-3和Caspase-8蛋白的表达,同时用克隆形成实验检测细胞的放射敏感性。结果:胃癌细胞中PARP-1 mRNA的表达水平均高于GES-1细胞(P<0.05),且HGC-27细胞中的表达水平最高。与阴性对照组和空白对照组相比,si-PARP-1组HGC-27细胞中PARP-1的表达下调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率升高,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平升高,X射线照射后si-PARP-1组细胞克隆形成数减少(P<0.05)。结论:干扰PARP-1基因可抑制胃癌HGC-27细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞的放射敏感性,其机制可能与Caspase-8/Caspase-3途径有关。

氢醌诱导TK6细胞miR-221表达异常致PARP-1基因下调的机制

目的探讨氢醌(HQ)致TK6细胞PARP-1基因表达下调的机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0和10.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为染毒组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测miR-221的表达改变,以蛋白印迹法检测PARP-1蛋白表达量,以生物信息学方法分析miR-221的潜在甲基化相关靶基因。结果与对照组相比,2.5、5.0和10.0μmol/L HQ组细胞PARP-1蛋白量逐渐下降,5.0和10.0μmol/L HQ组miR-221表达量分别下降17%(P<0.05)、42%(P<0.05)。miR-221能与MBD2 mRNA的3’非翻译区(UTR)形成调控复合体。结论 HQ致PARP-1基因下调机制可能与miR-221表达异常有关。

CHFR,PARP-1基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响（英文）

目的:探讨CHFR与聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响。方法:用5-Aza-d C处理Raji细胞,后通过qRT-PCR检测CHFR的mRNA表达水平,western blot评估CHFR、PARP-1的蛋白表达。经CHFR慢病毒转染Raji细胞后,用qRT-PCR和western blot评估RAJI细胞中的CHFR、PARP-1变化。通过CCK-8法测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:与对照组相比,经5-Aza-d C处理Raji组的CHFR mRNA表达显著上调(P<0.01),PARP-1mRNA水平和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组相比,Sh RNA组CHFR的mRNA表达显着下调(均P<0.01),PARP-1mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。CCK结果显示CHFR Sh RNA组细胞活力明显低于对照组(P<0.05)。流式细胞术结果显示CHFR沉默后细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:CHFR可能通过PARP-1调控B淋巴细胞的增殖和凋亡。

RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

目的研究PARP-1基因在卵巢癌化疗耐药发生机制中的作用,探讨以该基因为靶向的小干扰RNA(siR-NA)能否有效逆转C13*细胞对顺铂(CDDP)的耐药性。方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测C13*、OV2008细胞中PARP-1 mRNA和蛋白表达差异;转染PARP1-siRNA后,通过RFQ-PCR和Western法验证干扰效果;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察转染后细胞对CDDP敏感性变化及对细胞增殖活性的影响。结果 C13*细胞中PARP-1 mRNA和蛋白的表达量分别是OV2008细胞表达量的(2.12±0.97)和(1.89±0.23)倍;特异性PARP1-siRNA能有效降低C13*细胞中PARP-1 mRNA、蛋白水平及其对顺铂的半数抑制浓度(IC50),分别下降(71.23±5.41)%、(73.84±3.78)%和(89.77±10.06)%(P<0.05),且C13*细胞的生长活力明显下降(P<0.05)。结论 PARP-1蛋白在卵巢上皮性癌细胞中的表达与顺铂敏感性相关;靶向PARP-1基因的siRNA可在转录和翻译水平抑制PARP-1基因表达,并能有效逆转C13*细胞对CDDP的耐药性。

胡黄连苷Ⅱ调控PARP-1基因对叶绿素光敏剂诱导脑梗死大鼠脑TH1/TH2细胞失衡的影响

目的旨在探讨胡黄连苷Ⅱ调控PARP-1基因对叶绿素光敏剂诱导脑梗死大鼠脑TH1/TH2细胞失衡的影响。方法选取SPF级SD大鼠100只,选择80只用叶绿素光敏剂诱导建立脑梗死模型,分为模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组各20只,20只健康大鼠为对照组。模型组和对照组给予同体积生理盐水,高剂量组给予胡黄连苷II 80μg/(kg·bw·d),中剂量组给予胡黄连苷II 40μg/(kg·bw·d),低剂量组给予胡黄连苷II 20μg/(kg·bw·d)。测定大鼠神经功能行为学症状、大鼠脑梗死体积比、脑组织INF-γ/IL-4比值、PARP-1、P53和NF-κB表达。结果高剂量组和中剂量组神经功能行为学症状评分随时间变化下降(P<0.05),且明显低于低剂量组和模型组(P<0.05)。中剂量组和高剂量组脑梗死体积比低于模型组和低剂量组(P<0.05)。模型组大鼠脑组织INF-γ表达高于对照组(P<0.05),IL-4表达低于对照组(P<0.05),INF-γ/IL-4值高于对照组(P<0.05),低剂量组大鼠脑组织INF-γ及IL-4表达和INF-γ/IL-4比值与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),高剂量组大鼠脑组织INF-γ及IL-4表达和INF-γ/IL-4比值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),大鼠脑组织INF-γ表达随剂量上升而下降(P<0.05),IL-4表达随剂量上升而上升(P<0.05),INF-γ/IL-4随剂量上升而下降(P<0.05)。模型组大鼠脑组织PARP-1、P53、NF-κB蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),各剂量组大鼠脑组织PARP-1、P53、NF-κB蛋白表达随剂量上升而下降(P<0.01),均明显低于模型组大鼠(P<0.01)。结论胡黄连苷Ⅱ下调脑梗死大鼠脑组织PARP-1基因,可修正大鼠脑TH1/TH2细胞失衡,保护其损伤脑组织。

谷胱甘肽对多巴胺诱导的GH4细胞凋亡的保护作用

目的探讨多巴胺(DA)诱导垂体瘤GH4细胞凋亡及谷胱甘肽(GSH)对DA诱导细胞凋亡的保护作用机制。方法本实验通过3部分探讨DA的凋亡作用及GSH的保护作用:①实验分空白对照组及DA用药组,体外观察不同浓度、时间DA对GH4细胞生长的影响;②实验分空白对照组、DA组、DA联合DA D2受体拮抗剂组,观察D2受体在细胞凋亡中的作用;③实验设空白对照组、DA组、GSH用药组,PI染色分别观察3组细胞的凋亡情况,Western blot检测Bcl-2及PARP-1的表达。结果 DA诱导的GH4细胞凋亡呈浓度-时间依赖性,选择性D2受体拮抗剂不能阻断细胞凋亡,经GSH处理GH4细胞后,PI染色显示凋亡细胞数明显低于DA组,Westernblot示Bcl-2表达增加,PARP-1表达下降。结论 DA通过细胞内作用诱导GH4细胞凋亡,选择性D2受体拮抗剂不能阻断细胞凋亡,GSH对DA诱导的GH4细胞凋亡有明显的保护作用,可能与Bcl-2上调、PARP-1下降有关。