拟南芥叶绿体分裂蛋白PARC6影响子叶与真叶的生长

在DNA、RNA及细胞水平上鉴定了叶绿体异常分裂纯合突变株parc6,子叶白化纯合突变株sco2,同时以真叶异常分裂及子叶白化双重突变株sl2作为参照,通过向培养基中施加不同浓度的蔗糖含量来探究叶绿体异常分裂对子叶和真叶生长的影响。结果显示,sco2突变株子叶白化,而真叶生长正常;parc6突变株子叶生长势及生活力显著低于野生型对照,相当于sco2突变株,而子叶白化与真叶异常分裂双重突变株sl2生长严重受阻。parc6突变株真叶的生长势与生活力也显著低于野生型,但相较于子叶则有所恢复。parc6突变株子叶生长受阻表型可以通过在培养基上补充碳源而得到恢复,sco2突变株子叶生长受阻表型可以通过补充碳源得到恢复,但叶绿体荧光参数相较于野生型仍有差异。蓝色温和凝胶电泳结合二向聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明parc6突变株的子叶及真叶光系统高级结构组装正常,说明parc6异常分裂的叶绿体无法生成足够的能量进而影响子叶及真叶的生长。进化分析表明,PARC6与SCO2存在共同进化的趋势,说明子叶发育与叶绿体分裂存在一定的联系。结果指示,叶绿体大小与植物生长尤其是子叶的发育存在密切的联系,这为深入揭示叶绿体的功能提供一个新的视角。

肺炎克雷伯菌gyrA基因与parC基因的突变研究

目的探讨肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性,及对喹诺酮敏感和耐药菌株中gyrA与parC基因的突变情况。方法收集肺炎克雷伯菌临床分离株231株,采用K-B纸片法测定肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的敏感性,随机选取对环丙沙星和左氧氟沙星均耐药菌株4株和均敏感的菌株3株,分别PCR扩增gyrA基因和parC基因的耐药决定区,扩增片段长度分别为625、319bp,PCR扩增产物经纯化后测序并做序列分析。结果肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为51.1%(118/231)和45.9%(106/231);gyrA和parC基因经序列分析显示,耐药株均有gyrA基因的突变,其中1株出现第83、87和27位氨基酸的改变,2株出现第83位氨基酸的改变,1株出现第47位点的改变;环丙沙星敏感株中未出现gyrA基因的突变。4株耐药株均有parC基因的突变,引起相应氨基酸Ser80→Arg的改变,2株环丙沙星敏感株也发生了同样的改变。结论哈尔滨地区肺炎克雷伯菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药性显著,在喹诺酮耐药株中有gyrA和parC基因的同时突变,在敏感株中也发现了parC基因的突变。

健脾补肾法对慢性阻塞性肺疾病稳定期患者疗效观察及对IL-6、PARC/CCL-18的影响

目的:评价健脾补肾法治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期(脾肾气虚型)患者的临床疗效及对血清中细胞因子IL-6、PARC/CCL-18的影响。方法:收集符合纳入标准的68例慢性阻塞性肺疾病稳定期患者,两组均给予西医基础治疗。随机将68例患者分为治疗组(35例)和对照组(33例)。治疗组在西医基础治疗同时给予中药四君子汤和金匮肾气丸合方汤剂治疗,疗程4周;观察两组治疗前后中医症状积分、临床疗效,CAT评分及IL-6、PARC/CCL-18的变化。结果:治疗组患者中医症状积分、CAT评分改善优于对照组(P<0.05);治疗组患者血浆IL-6、PARC/CCL-18水平低于对照组(P<0.05)。结论:健脾补肾法治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期(脾肾气虚型),能明显减轻患者中医临床症状,改善患者的生活质量。其治疗的机制之一可能是通过促进IL-6、PARC/CCL-18的下降进而改善气道炎症。

用PARCS／TRACE／ROBIN程序系统研究秦山二期弹棒事故

利用美国核管制委员会(US NRC)堆芯三维中子动力学软件PARCS、热工水力软件TRACE、辅助建模软件SNAP以及具有国内自主知识产权的压水堆燃料组件计算软件RONBIN,建立了秦山二期两环路压水堆物理模型和热工水力系统模型,进行弹棒事故模拟计算,得出合理的计算结果。AFA 3G燃料组件的两维中子输运计算由ROBIN程序完成,生成的宏观中子截面参数被传递给PARCS程序作为输入。然后由PARCS程序进行堆芯三维弹棒模拟计算,得到事故过程中的核功率变化趋势。最后将反应堆功率瞬态数据输入TRACE热工水力系统模型计算系统压力响应以及燃料包壳和芯块温度。本文通过使用与设计单位完全不同的软件体系,独立地验证了该堆型在弹棒事故下的安全性。

耐环丙沙星鲍氏不动杆菌的gyrA基因及parC基因突变分析

目的研究本地区临床分离鲍氏不动杆菌环丙沙星耐药表型与DNA旋转酶A亚单位gyrA基因及拓扑异构酶ⅣparC基因突变的关系。方法收集28株耐药株及2株敏感株,通过PCR扩增其gyrA基因及parC基因,并对扩增产物进行限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)及DNA序列分析。结果敏感株的gyrA基因产物经HinfⅠ酶切后可产生两个片段,耐药株则产生1个片段;而parC基因产物经HinfⅠ酶切后,敏感株及耐药株均产生两个片段;DNA测序显示,5株耐药株gyrA基因存在Ser83→Leu及Ala88→Thr突变,其中Ser83→Leu的突变是导致HinfI酶切位点消失的原因,而1株敏感株无突变;1株敏感株与1株耐药株的pcrC基因存在Ser108→Ile突变,另外14株耐药株存在多位点同义突变。结论与parC基因相比,gyrA基因突变是鲍氏不动杆菌对环丙沙星耐药的主要分子基础,环丙沙星的高水平耐药可能需要多种不同的突变。

耐环丙沙星鲍曼不动杆菌gyrA和parC突变模式分析

目的对临床耐环丙沙星的鲍曼不动杆菌进行gyrA和parC基因突变模式的分子流行病学调查。方法采用E-test法测定环丙沙星对94株临床分离鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC);对鲍曼不动杆菌的gyrA和parC基因进行聚合酶链反应(PCR)-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析及DNA测序。结果在94株鲍曼不动杆菌中,只有38株(40.43%)对环丙沙星敏感(MIC≤1mg/L),而对环丙沙星的耐药率接近60%;PCR-RFLP分析结果表明,对环丙沙星耐药的56株菌都发生了gyrA和parC基因突变,且parC基因的突变率(87.50%)略高于gyrA基因(82.14%)。结论鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药与gyrA和parC基因突变相关,其中parC基因突变的明显增长值得重视。

淋病奈瑟氏菌中国流行株gyrA和parC基因与喹诺酮类耐药性的相关性

目的 调查中国地区淋病奈瑟氏菌 (NG)对喹诺酮类的耐药性状况 ,探讨高水平耐药的基因突变株对喹诺酮类耐药机制的作用 .方法 对 9a来临床分离保存淋球菌流行株进行了体外环丙沙星 (CIP)药敏实验 .筛选出 76株高水平CIP耐药株 ,通过 PCR扩增了其中的 1 8株 NG的 gyr A和par C喹诺酮耐药决定区基因 ,并对扩增子直接测序 .通过N he I酶切、脉冲电场凝胶电泳 (PFEG)分析了这些菌株的遗传关系 .结果 环丙沙星的耐药检出率有逐年增高的趋势 ,MIC≥ 1 .0 mg· L- 1的菌株由 1 993年的 5 .1 %上升到 2 0 0 1年的 2 1 .4% .对照组中的 1 8株敏感菌只有两株发生了 gyr A的单一突变 ,未发现 par C变异 ;而耐药组中 89% (1 6 )菌株的gyr A发生了 Ser- 91向 Phe的单一突变株或 (和 ) par C的双突变 .88.9% (1 5 )的菌株的 gyr A发生了 Ser- 91向 Phe和 Asp-95向 Gly的突变 .在发生 par C突变中 72 %属于 Asp- 86向Asn突变 .PFEG分析发现 1 0株具有完全一致的 gyr A和par C突变模式 .同时也发现来自不同地区的菌株的 PFEG指纹图是不同的 .结论 研究表明 ,在中国 NG流行株对喹诺酮类耐药率呈增长趋势 ;NG流行株对喹诺酮产生耐药性与gyr A和 par

福氏志贺菌gyrA和parC基因QRDR序列的测定与同源性分析

测定了我国痢疾流行病原志贺菌福氏2 a 3 0 1株与喹喏酮类药物耐药性相关的 gyr A( DNA旋转酶 A亚单位 )和 par C(拓扑异构酶IVA亚单位 )基因 ,并将 gyr A和 par C基因QRDR(喹喏酮类药物耐药性决定区 )核苷酸序列与几种动物和人的病原菌进行了同源性和遗传进化比较分析。结果显示 ,志贺菌福氏 2 agyr A和 par C基因 QRDR序列分别与宋内氏志贺菌、大肠杆菌 O1 57、大肠杆菌 K1 2、阴沟肠杆菌、坂口肠道杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、肺炎克氏杆菌、产道克氏杆菌、空肠弯曲杆菌、弗氏柠檬酸杆菌具有显著同源性(均大于 88% ) ,表明 gyr A和 par C是这些细菌中的看家基因 ,推测在各种细菌中具有类似的起源 ,因此对在不同细菌之间进行喹喏酮类药物耐药性的研究非常有利。 QRDR的遗传进化分析表明 ,同属或相近属细菌 gyr A或 par CQRDR的遗传距离明显接近 ,其中与大肠杆菌属的距离最近 ,认为可列到同一个属 ,结果有力支持了近年提出的大肠杆菌与志贺菌属于同族细菌的理论。

吸入剂联合定喘止咳汤治疗对咳嗽变异性哮喘患者气道重塑、炎症及PARC/CCL-18通路的影响

目的:探讨吸入剂联合定喘止咳汤治疗对咳嗽变异性哮喘患者气道重塑、炎症及PARC/CCL-18通路的影响。方法:收集在本院接受治疗的咳嗽变异性哮喘患者60例,按照单盲随机对照法将其分为接受常规吸入剂治疗的对照组30例、接受吸入剂联合定喘止咳汤治疗的观察组30例,持续治疗6月。治疗前、治疗6月后,采用高分辨率CT测定两组气道重塑指标水平,采用放射免疫法测定外周血气道重塑指标含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定诱导痰中炎症介质及血清中PARC/CCL-18含量。结果:治疗前,两组气道重塑程度、炎症介质及PARC/CCL-18含量差异无统计学意义(P>0.05)。治疗6月后,观察组CT气道重塑指标LA、TA水平高于对照组,WA水平低于对照组,外周血气道重塑指标CTGF、YKL-39、MMP-9、TIMP-1含量低于对照组(P<0.05);观察组诱导痰中炎症介质IL-5、IL-6、IL-8含量低于对照组,血清PARC/CCL-18含量低于对照组(P<0.05)。结论:吸入剂联合定喘止咳汤可抑制咳嗽变异性哮喘患者的气道重塑,减轻气道炎症反应。

耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌gyrA及parC基因突变研究

目的 研究临床分离的耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌gyrA及parC基因突变情况。方法 测定临床分离的 5 5株铜绿假单胞菌MIC值 ,从中筛选出 1株敏感菌和 8株耐药菌 ,以标准敏感菌株ATCC2 785 3作为质控菌株。用聚合酶链反应 (PCR)扩增gyrA及parC基因的喹诺酮耐药决定区 (QR DR) ,扩增产物片段长度分别为 35 1bp、397bp。用限制性内切酶SacⅡ消化gyrAPCR产物 ,同时对上述 10株菌的gyrA及parC基因的喹诺酮决定区 (QRDR)进行PCR DNA直接测序分析。结果 有 8株耐菌株的gyrA基因在 83位 (ACC→ATC)有突变 ,导致氨基酸Thr→Ile的改变 ;有 3株高度耐药菌gyrA基因同时在 87位 (GAC→GGC)有突变 ,导致氨基酸Asp→Gly的改变 ;有 4株耐药菌株的parC基因在 87位有TCG→TTG突变 ,导致氨基酸由Ser→Leu的改变。同时具gy rA和parC突变MIC值是仅具gyrA突变菌株MIC值的 2～ 16倍。未发现parC突变单独存在。另外 ,有 6株耐药菌gyrA的 132位有CAC→CAT的突变 ;所有耐药菌株parC基因 115位有GCT→GCG的突变 ,该突变未引起氨基酸的改变。结论 gyrA83、87位突变及parC基因 87位突变都可引起铜绿假单胞菌对氟喹诺酮类药物产生耐药 ,但以gyrA基因 83位突变为主 ,合并gyrA基因 87位及parC基因 87位突变可增加耐药程度。

淋病奈瑟菌GyrA基因及ParC基因突变与耐喹诺酮类药物的关系

目的 :探讨淋病奈瑟菌DNA回旋酶A亚单位GyrA基因及拓扑异构酶ⅣC亚单位ParC基因突变与耐喹诺酮类药物之间的关系。 方法 :采用DNA序列测定法对 2 0株无锡地区淋病奈瑟菌临床分离株的GyrA及ParC基因的喹诺酮耐药决定区 (QRDR)相关序列进行测序分析 ,并利用琼脂扩散法检测了该 2 0株淋病奈瑟菌临床分离株对诺氟沙星药物的敏感性。 结果 :2 0株被检淋病奈瑟菌菌株在GyrA基因的两个常见突变位点之一的Ser91处均未发生突变 ,却在另一位点Asp95处则均有突变 ;而 19株被检淋病奈瑟菌菌株中有 16株发生了ParC基因的 86、87、88、91位点突变。 结论 :GyrA基因的Asp95位点突变与ParC基因的Asp86、Ser87、Ser88和Glu91位点突变共同参与了淋病奈瑟菌对喹诺酮类药物产生的耐药。

淋球菌43株对环丙沙星的耐药性及gyrA和parC基因突变的检测

目的 :确定延安地区 2 0 0 2年分离的淋球菌对环丙沙星的耐药率和耐药菌株gyrA及parC基因突变情况 .方法 :从临床分离 4 3株淋球菌 ,进行药敏试验 .PCR扩增gyrA和parC基因 ,产物直接测序 .结果 :4 3株淋球菌菌株中 ,耐药株为 37株 ,耐药率为 86 % .耐药菌株gyrA基因的突变形式是Ser 91→Phe和Asp 95→Gly.parC基因最多见的突变是Asp 86→Asn和Ser 87→Arg,另外还检测到了Glu 91→Gly和Arg 1 1 6→Leu .gyrA突变见于所有的敏感性下降株和耐药株 ,parC突变见于耐药株 ,但有一株MIC为 0 .5 μg/mL的菌株也存在parC突变 .结论

乳腺癌中SPARC基因表达及临床意义

目的探讨乳腺癌组织和血浆中富含半胱氨酸的酸性蛋白(SPARC)的表达在乳腺癌的增殖、侵润和转移中的作用及指导意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)分析SPARC在乳腺癌组织和其相邻的正常乳腺组织的差异表达量。采用ELISA法检测正常对照组和乳腺癌患者术前术后血浆中的SPARC水平,探讨SPARC变化的趋势。结果RTPCR分析SPARC在24对配对(48例)乳腺癌组织中的表达,其中17例的表达明显高于其相应的正常乳腺组织,在7例中差异表达不明显,R=70.8%(有差异的例数/总例数)。SPARC基因在不同分化程度的乳腺癌组织中的表达阳性率基本相同(P>0.05)。而在有淋巴结转移的乳腺癌与无淋巴结转移的乳腺癌组织的表达之间的差异有显著意义(P<0.05)。采用ELISA法检测40例正常人和32例乳腺癌患者术前术后血浆SPARC水平。正常人血浆SPARC水平为(644±124)ng/ml。乳腺癌患者术前血浆中的SPARC水平(625±117)ng/ml。正常人和乳腺癌患者术前血浆中的SPARC水平无显著性差异(P>0.05),乳腺癌患者术前比术后血浆中的SPARC水平(611±142)ng/ml略高,但两者无显著性差异(P>0.05)。结论SPARC和乳腺癌的发生与发展密切相关。乳腺癌淋巴结转移时SPARC表达升高。

乳酸菌拓扑异构酶parC基因突变与其耐氟喹诺酮类药的相关性

目的探讨parC基因的改变与乳酸菌耐氟喹诺酮类抗生素的相关性。方法采用纸片法和打孔法测定15株菌对诺氟沙星和氧氟沙星的敏感性。PCR扩增检测parC基因氟喹诺酮类耐药决定区相关片段并测序,比对敏感菌株和耐药菌株的测序结果,分析突变位点。结果 NN、NN2、NN3等7株为耐药菌株,4对引物PCR扩增检测parC基因,耐药菌株和对照菌株比较,没有发现parC基因的变化。结论乳酸菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与其拓扑异构酶ⅣparC基因的突变无关。

痢疾杆菌福氏2a及其环丙沙星耐药株gyrA和parC基因耐药性决定区的序列分析

测定了痢疾杆菌福氏 2a 30 1株与喹喏酮类药物耐药性相关的 gyrA基因和 parC基因的序列 ,并对其环丙沙星耐药诱变株的 gyrA和 parC基因喹喏酮类药物耐药性决定区 (QRDR)序列进行了测定分析。结果表明 ,痢疾杆菌福氏 2a 30 1株 gyrA和 parC基因分别为 2 6 2 5bp和2 2 5 6bp ,环丙沙星诱导的耐药菌 gyrA基因QRDR(2 4 5bp)发生氨基酸残基 6 9 Ala→Val和 87 Tyr→Asp改变 ,parC基因QRDR(2 37b)发生氨基酸残基 79 Ala→Asp、84 Ala→Glu和 85 Pro→Ala改变。

TaqMan实时荧光定量PCR快速检测淋病奈瑟菌ParC基因Ser87/Arg点突变

目的建立TaqMan实时荧光定量PCR快速检测淋病奈瑟菌ParC基因Ser87/Arg点突变的方法。方法设计引物与探针,优化PCR反应体系及条件,配制阳性标准品,建立TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果建立的TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线相关系数r为-0.9996(r_2=0.9993),特异度和敏感度分别为100%,94.6%。结论本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,简便快捷,定量准确,可用于临床标本中淋病奈瑟菌ParC基因点突变检测,从而快速筛出氟喹诺酮高水平耐药株。

铜绿假单胞菌parC基因突变与耐氟喹诺酮的关系

研究了成都地区临床分离的铜绿假单胞菌拓扑异构酶ⅣparC基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系。测定临床分离的55株铜绿假单胞菌的MIC值,从中筛选出1株敏感菌和8株耐药菌,以标准敏感菌株ATCC27853作为质控菌株。用PCR反应扩增parC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),扩增产物片段长度为396bp,同时对上述10株菌的PCR产物进行测序分析。临床分离敏感菌和标准菌株ATCC27853的parC基因序列与国外报道的序列相同,而R25,R42,R43,R44等4株耐药菌株在87位(TCGCG→TTG)均有突变,该单位点突变引起氨基酸由Ser→Leu的改变,此外,新发现在所有耐药菌株115位有一静止突变(GCT→GCG),该突变未引起氨基酸的改变。拓扑异构酶ⅣparC基因突变是铜绿假单胞菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性的机制之一,以87位的突变最为常见。

鸡和人志贺菌gyrA、parC基因突变与喹诺酮类耐药的关系

通过药敏实验检测了鸡鲍氏、人鲍氏和人福氏三株志贺菌对12种常用抗生素的耐药情况,发现三者均未产生对喹诺酮类药物的耐药性。用聚合酶链反应(PCR)分别扩增三株志贺菌的DNA旋转酶A亚单位(gyrA)和拓扑异构酶ⅣC亚单位(parC)基因,并对其中的耐喹诺酮类决定区(QRDR)进行了分析。发现鸡和人鲍氏志贺菌QRDR区的序列没有发生任何碱基突变,这与药敏试验结果相吻合。人福氏志贺菌虽然也对喹诺酮类无耐药性,但其gyrA基因存在83位Ser83(TCG)→Leu(TTG)的突变,由于只有83位点一处突变,所以尚未表现出耐药性表征,parC基因中存在58位Ser58(AGC)→Ile(ATC)的突变,该突变点与常见的80、84位氯基酸的改变有所不同,却仍在QRDR区域之中,虽然暂时还无法根据这一结果判断该突变与喹诺酮类耐药性之间的关系,但至少表明该菌株正处在耐药性演变进程之中,其在志贺菌耐药性中的确切作用还有待进一步研究。

PARCS稳态两相热工水力程序PATHS的开发与耦合

本工作开发了PARCS的先进热工水力求解器PATHS,可对沸水堆进行热工水力稳态模拟。与RELAP5的计算结果进行验证,结果表明,PATHS的计算结果与RELAP5的基本一致。将PATHS与PARCS进行耦合,对SMART反应堆及Peach Bottom 2OECD Turbine Trip基准题进行计算,结果表明,PARCS/PATHS耦合程序计算结果准确有效,能用于沸水堆的稳态物理热工耦合计算。

gyrA和parC介导的淋病奈瑟菌对环丙沙星耐药机制研究

目的探讨淋病奈瑟菌对环丙沙星的耐药机制。方法采用K-B纸片法检测27株淋病奈瑟菌的耐药率,PCR扩增gyrA和parC基因,测序分析DNA序列。结果27株淋病奈瑟菌对青霉素、四环素以及环丙沙星的耐药率均为100%,而大观霉素和头孢曲松100%敏感;DNA序列分析表明:环丙沙星耐药株均存在gyrA和parC基因的突变,其中gyrA基因的突变位点发生在第91位、95位氨基酸,parC基因的突变发生在第86位、87位、88位和91位氨基酸。结论淋病奈瑟菌的耐药与gyrA和parC基因突变有关。