宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中LMX1A和PAX1基因甲基化的定量分析

背景与目的:DNA甲基化是宫颈上皮癌变过程中常见的表观遗传改变。本研究旨在检测同源盒转录因子1ɑ(LMX1A)基因和配对盒基因家族PAX1基因在浸润性宫颈鳞癌(invasive cervical cancers,ICC)组织中的甲基化水平,评估其作为分子标志物用于区分各级别宫颈病变的潜在临床价值。方法:在32例低级别宫颈上皮内瘤变(low-grade cervical intraepithelial neoplasia,LG-CIN)、34例高级别宫颈上皮内瘤变(high-grade cervical intraepithelial neoplasia,HG-CIN)、27例ICC病变宫颈组织和28例慢性宫颈炎为正常对照组(negative for intraepithelial lesion or malignancy,NLM)中,采用巢式PCR和焦硫酸测序(pyrosequencing)技术定量分析LMX1A基因的6个位点和PAX1基因的9个位点的甲基化。并通过受试者工作特征曲线下面积(receiver operating characteristic curve,ROC)的计算获得上述基因的甲基化检测用于诊断各级别宫颈病变的准确性。结果:宫颈癌中的LMX1A基因6个位点的甲基化平均水平为14.36%,明显高于HG-CIN病变的4.70%、LG-CIN病变的5.05%和NLM的4.53%(P<0.01)。宫颈癌中PAX1基因9个位点的甲基化平均水平为41.97%,明显高于HG-CIN的10.21%(P<0.01);而后者又明显高于LG-CIN的5.55%和NLM的4.92%(P<0.01)。检测LMX1A基因甲基化和PAX1基因甲基化水平鉴别宫颈癌的ROC曲线下面积分别为0.603(P=0.104)和0.883(P<0.001)。经ROC曲线下面积计算获得最佳PAX1基因甲基化水平的界定值为20.50%,其诊断浸润性宫颈癌的灵敏度为81%、特异度为93%。当PAX1基因甲基化水平界定值为9.58%时,其检测浸润性宫颈癌的灵敏度为89%、特异度为84%。结论:定量分析宫颈组织中的PAX1基因甲基化将有可能作为分子标志物用于浸润癌的鉴别诊断,而LMX1A基因的甲基化检测临床价值有限。

人宫颈癌组织CDH1和PAX1基因甲基化研究

目的:检测上皮型钙黏附素(E-cadherin,CDH1)基因和配对盒基因家族PAX1基因在宫颈癌组织及人乳头瘤病毒(human papillom avirus,HPV)感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织中的甲基化情况,评估是否可将其作为临床诊断的分子标志物。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation specific PCR,MSP)对HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织以及宫颈癌组织中的CDH1和PAX1基因进行甲基化检测。结果:HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织和CINⅠ组织中未检出CDH1基因甲基化;CINⅡ～Ⅲ组织中检出CDH1基因甲基化2例(13.3%),宫颈癌组织中检出CDH1基因甲基化9例(22.5%),与HPV感染的正常宫颈组织比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV感染的正常宫颈组织和宫颈炎组织中未检出PAX1基因甲基化,CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌组织的PAX1基因甲基化阳性率分别为13.3%、46.7%和87.5%,CINⅡ～Ⅲ组织与CINⅠ和宫颈癌组织比较差异均有统计学意义(P<0.05)。CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织的CDH1和PAX1基因甲基化总阳性率分别为13.3%、60.0%和97.5%。结论:CDH1和PAX1基因甲基化,尤其是PAX1基因甲基化对于宫颈癌临床诊断具有潜在价值。

PAX1基因启动子甲基化用于子宫颈癌临床应用价值探讨

目的探讨PAX1基因甲基化、宫颈液基细胞学(LBC)、高危型人乳头瘤病毒(hrHPV)与HPV16或HPV18型阳性在妇女宫颈脱落细胞中筛查宫颈鳞状上皮内病变的临床应用价值。方法选取2016年1月至2016年12月就诊于福州市第一医院的妇女103例,收集宫颈脱落细胞并行PAX1基因甲基化、LBC、hrHPV检测、HPV16或HPV18型检测,以阴道镜下活检病理诊断为金标准,比较子宫颈脱落细胞中不同检测方法学。结果 PAX1基因甲基化的灵敏度、特异度与准确度分别为78.6%、97.8%和95.1%。PAX1基因甲基化作为非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)与hrHPV分流生物标记时具有最佳临床应用结果。以hrHPV作为第一线筛查时,PAX1基因甲基化较LBC细胞学法减少20.6%阴道镜检率,以LBC、hrHPV、PAX1基因甲基化比较医院机会性筛查的经济分析中得到PAX1基因甲基化挽救一个寿命成本较其他两种方法学筛查成本低,为11 942元。结论 PAX1基因甲基化可用于监测宫颈癌病变,并具较低筛查的经济成本,可作为细胞学ASCUS与hrHPV筛查分流的临床应用。

阴道镜与PAX1基因甲基化对宫颈上皮内瘤病变的临床应用价值研究

目的:探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)患者使用阴道镜检查与PAX1基因甲基化检验的临床价值。方法:选取200例行宫颈疾病检查的女性患者展开研究,所有患者均实施单独阴道镜检查、单独PAX1基因甲基化检测和阴道镜检查+PAX1基因甲基化检测,观察其临床学应用价值,使用阴道镜检查和PAX1基因甲基化检验患者的宫颈病变,联合两种检查方式同时检验,以病理学检验结果作为金标准,比较3种检查方式的检验灵敏度、特异度、诊断符合率以及漏诊率。结果:阴道镜检查阳性结果为24例(占12%),PAX1基因甲基化检验阳性结果为20例(占10%),阴道镜+PAX1基因甲基化检验阳性结果为36例(占18%)。其中,阴道镜+PAX1基因甲基化检验的灵敏度为100%,明显高于其他两种检测方式,无漏诊率。应用PAX1基因甲基化检测方式诊断宫颈癌与CIN的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.88,P<0.001。结论:PAX1基因甲基化检验诊断CIN疾病的效果较为显著,具有良好的临床应用价值,若在临床中联合阴道镜同时进行检查,可进一步提高诊断准确性。

宫颈脱落细胞中PAX1和SOX1基因甲基化对宫颈癌实验诊断的临床研究

目的检测宫颈脱落细胞中配对盒家族基因1(paired box 1,PAX1)和性别决定区域Y盒蛋白1(sex determining region Y box 1,SOX1)甲基化的状态及表达水平,并分析其对宫颈病变及宫颈癌(cervical cancer,CC)的诊断价值。方法前瞻性选取2019年1月~2021年12月在阜阳市临泉县人民医院经病理检查确诊的58例宫颈癌患者为宫颈癌(CC)组,35例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,H-SIL)患者为H-SIL组,33例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,L-SIL)患者为L-SIL组,50例同期行健康体检的正常人群为Control组。分别取其宫颈脱落细胞,采用甲基化特异性实时定量PCR检测所有研究对象宫颈细胞中PAX1和SOX1甲基化状态和甲基化水平,并分析其甲基化状态与宫颈癌患者临床病理参数之间的关系。根据甲基化水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(area under curve,AUC)分析PAX1和SOX1甲基化水平对宫颈病变及宫颈癌的诊断价值。结果L-SIL组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为27.3%和21.2%,H-SIL组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为34.3%和25.7%,CC组患者PAX1和SOX1基因甲基化发生率分别为82.8%和77.6%,显著高于Control组(0.0%,4.0%),差异均有统计学意义(F=53.805,46.228,均P<0.001)。Control组、L-SIL组、H-SIL组和CC组患者PAX1基因甲基化水平分别为1.86±0.64,1.55±0.28,1.46±0.30和0.98±0.21,SOX1基因甲基化水平分别为1.57±0.35,1.22±0.39,1.13±0.22和0.82±0.17,各组间差异均有统计学意义(F=5.230,4.764,均P<0.05)。PAX1和SOX1基因甲基化状态均与淋巴结转移有明显相关性,差异有统计学意义(χ^(2)=4.125,5.428,均P<0.05),与年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型、分化程度及WHO病理分级等无相关性,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.168~2.968,均P>0.05)。PAX1甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL和CC时对应AUC分别为0.645,0.703和0.917,SOX1甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL和CC时对应AUC分别为0.604,0.689和0.850。结论宫颈脱落细胞中PAX1和SOX1基因甲基化状态与宫颈癌患者淋巴结转移有关,且其甲基化水平对宫颈癌具有较高的诊断价值。

PAX1基因甲基化用于子宫颈癌临床应用价值探讨

目的探讨PAX1基因甲基化、液基薄层细胞学、高危型人乳头瘤病毒(hrHPV),与HPV16或HPV18型阳性在女性患者宫颈脱落细胞中筛查宫颈鳞状上皮内病变的临床应用价值。方法选取2016年1月至2019年8月就诊于本院的女性患者465例,收集宫颈脱落细胞并行PAX1基因甲基化、液基薄层细胞学、高危型HPV检测(hrHPV)、(HPV16/18)检测,以阳性患者进行阴道镜下活检病理诊断为金标准,比较宫颈脱落细胞中不同检测方法学。结果 PAX1基因甲基化灵敏度、特异度分别为81.3%(95%CI:70.3%, 89.1%)和96.6%(95%CI:92.5%, 98.6%),四种检测比较中,PAX1具有最高特异度96.63%,细胞学与hrHPV检测特异度在17%~70%。细胞学(ASCUS+)的灵敏度为94.7%(95%CI:86.2%, 98.3%)显著高于PAX1基因甲基化检测(P=0.013),但ASCUS+的特异度为18.0%(95%CI:12.8%, 24.6%)显著低于PAX1基因甲基化检测(P<0.001)。以PAX1、HPV16/18与hrHPV作为ASCUS分流时,PAX1具最高特异性(100%at cut off CIN2与98.9%at cut off CIN3),其次为HPV16/18。结论本院结合细胞学与PAX1基因甲基化检测,可以降低HPV感染需长期随访人群的恐慌,此结果尤其对于育龄妇女或欲保留生育人群,可提供一种有效的检测与随访方法。