PAX9基因与非综合征型多数牙先天缺失的关系及研究进展

先天性缺牙是人类牙列中最常见的发育异常,包括个别牙先天缺失,多数牙先天缺失和先天无牙症。多数牙先天缺失按照其表现型不同通常可分为综合征型和非综合征型,表现为常染色体的显性或隐性遗传、X-连锁遗传特性,有的具有家族遗传史,有的则是无家族史的散发病例。本文就近年来非综合征型牙齿发育不全研究中的热点基因PAX9的研究进展作一综述。

PAX9基因大片段外显子-5与一蒙古族先天缺失牙家系患者相关性研究

目的:探讨转录调控因子成对盒基因PAX9(Paired box 9)大片段外显子-5与一蒙古族先天缺失牙家系患者发病的相关性.方法:分别使用普通PCR和降落PCR技术扩增PAX9大片段外显子-5,对比扩增结果,并将扩增得到的产物进行测序.结果:降落PCR技术能够扩增出与预期大小完全一致的目的片段,且扩增的特异性较普通PCR高.测序结果表明该外显子-5与GenBank中登录的正常人序列相同,未发现突变位点.结论:此患者先天缺失牙并非由外显子-5突变造成.降落PCR技术能有效地降低或避免非特异性扩增,快速得到目的片段.

中国先天性缺失牙患者PAX9基因的新突变

目的探讨我国先天性缺失牙患者PAX9基因突变的特点,为该病发病的分子机制研究提供依据。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法,对4个常染色体显性遗传少牙畸形家系(共45名成员,22例患者)中的13例患者和9名健康成员、16例散发性牙齿发育不全患者以及196名健康对照者的PAX9基因进行研究。结合DNA序列分析方法,对发现异常SSCP条带的患者进行突变分析。结果2个少牙畸形家系(家系A和家系B)的先证者出现异常SSCP条带,家系A和家系B内患者均出现与各自先证者相同的异常SSCP条带。经过DNA序列分析,发现PAX9基因第2外显子的2个新突变:碱基插入(109InsG)导致的移码突变,碱基置换(C139T)导致的错义突变。其余家系患者、散发性患者均未发现异常SSCP条带。结论109InsG和C139T突变扩大了先天性缺失牙患者的PAX9基因突变谱,为我国先天性缺失牙的基因诊断提供依据。

先天性多数牙齿缺失家系PAX9基因两个新突变功能的初步研究

目的对成对盒基因(pairedboxgene,PAX)PAX9两个新突变109(InsG)及139(C→T)分子生物学功能及与先天性多数牙齿缺失的发病机理进行初步探讨。方法分别以先天性多数牙齿缺失家系A[109(InsG)]、家系B[139(C→T)]中患者及健康成员基因组DNA为模板,PCR扩增PAX9基因DNA结合域序列(paireddomain,PD),构建原核表达质粒GST,进一步在大肠杆菌中诱导表达,纯化表达产物,分离制备PAX9PD蛋白。凝胶迁移试验检测PAX9PD蛋白与靶DNA(CD192和Pax6CON)结合活性。结果野生型PAX9PD蛋白与靶DNA结合,109(InsG)及139(C→T)突变的PAX9PD蛋白皆失去与靶DNA结合能力。结论109(InsG)及139(C→T)突变造成PAX9基因DNA结合域功能丧失,可能是导致多数牙齿先天性缺失的原因。

Pax9——牙齿发育中的关键调控基因

在牙齿发育过程中,Pax9基因局限且持续表达于间充质中,是间充质而非上皮组织的重要调控基因,可作为牙源性间充质的标志物,其表达受限则可导致牙胚的凋亡;它还是使牙胚蕾状期间充质细胞获得牙齿形成诱导能力的基因及缺牙区和切、磨牙区之间最早的差异性表达物。

miR-181b-5p通过靶向结合PAX9促进人急性髓细胞性白血病细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探究miR-181b-5p通过靶向结合配对盒基因9(PAX9)对急性髓细胞性白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 分别用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库和肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析AML患者中PAX9的表达水平和预后的关系。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染空载体(Vector组)或PAX9(PAX9组),CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白B1(CCNB1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。生物信息学分析预测PAX9靶作用的微小RNA(miRNA)、荧光素酶报告系统验证其靶向作用,实时定量PCR检测PAX9 mRNA水平,Western blot法检测PAX9蛋白表达。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染miR-NC(miR-NC组)或miR-181b-5p(miR-181b-5p组),在miR-181b-5p组细胞中进一步转染PAX9(miR-181b-5p联合PAX9组),采用前述方法分别检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。结果 GEPIA和TCGA数据库显示AML患者PAX9呈低表达趋势并与患者不良预后相关。在Kasumi-1、 AML5细胞中,与Vector组相比,PAX9组细胞增殖活力、 S期细胞百分比、 CDK2、 CCNB1和Bcl2蛋白表达降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、 BAX蛋白表达升高。双荧光素酶报告基因验证PAX9是miR-181b-5p的靶基因。与miR-NC组相比,miR-181b-5p组细胞增殖活力、 S期细胞百分比、 CDK2、 CCNB1和Bcl2蛋白表达升高,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、 BAX蛋白表达降低。与miR-181b-5p组相比,miR-181b-5p联合PAX9组细胞增殖活力、 S期细胞百分比、 CDK2、 CCNB1和Bcl2蛋白表达降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡、 BAX蛋白表达升高。结论 miR-181b-5p靶向抑制PAX9表达促进AML细胞增殖、延缓细胞凋亡。

先天性牙发育不全WNT6基因突变的新位点

目的探讨先天性牙发育不全病例与相关基因突变可能存在的联系,为疾病的早期诊断提供参考。方法通过收集1例罕见先天性牙发育不全病例的临床和影像学资料,评估牙齿的形态、数量以及全身健康状况;采集患者静脉外周血,对与牙齿发育紧密关联的PAX9和MSX1基因双向测序;进行全外显子测序,筛查与牙发育异常相关的其他突变位点,对先证者儿子进行新发现突变位点的Sanger测序;通过模拟测算工具和体外细胞转染实验评估突变对基因表达的影响。结果患者的临床特征是先天性右下颌单侧第一磨牙缺失,第二磨牙为单根,且伴有右下第二前磨牙多生。在PAX9和MSX1基因测序中发现,PAX9基因中c.717C>C/T为同义突变,MSX1基因中c.119C>G为错义突变,Polyphen预测为“良性”。全外显子测序发现WNT6基因的1个全新突变位点,内含子3中的c.637-7 C>A突变,经MAXENT预测,可能影响mRNA的剪切,且先证者及其儿子均携带该突变;细胞转染实验发现,该突变对WNT6基因的mRNA剪切没有影响。结论单核苷酸多态性之间的相互作用可能与先天性牙发育异常相关。

涎腺疾病

涎腺肿瘤survivin的免疫组织化学表达及其意义;VEGF-C和CD34在涎腺腺样囊性癌中的表达;腮腺良性肿瘤区域切除与传统手术的比较研究;单一剂量单侧腮腺放射损伤对双侧腮腺结构和功能的影响;涎腺肿瘤中Pax9基因的表达及其意义……

1例非综合征型先天缺牙家系的基因筛查

目的:探讨非综合征型先天缺牙患者的基因突变位点,为此类疾病的诊断提供基因学参考。方法:通过临床先证者寻找非综合征型先天缺牙家系,根据各成员的临床表型和发病特点,绘制系谱图。在患者及其家属知情同意的情况下,抽取家系成员外周血、提取基因组DNA,运用候选基因筛查法检测与缺牙密切相关的PAX 9、AXIN 2、MSX 1基因片段。结果:此家系的单纯性先天缺牙临床表型符合常染色体显性遗传规律,患病者出现不同数量的缺牙并伴发锥形牙。对PAX 9基因测序后,在Paired Domain的上游109位碱基(1号内含子内)发现一个碱基差异位点G/T。对MSX 1基因片段测序后未发现突变。在AXIN 2的7号外显子内有同义突变的多态位点C/T。结论:PAX 9和AXIN 2基因片段中某些编码基因的改变与该家系缺牙存在相关性。