流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基片段的克隆及表达

目的 将流感病毒RNA聚合酶PB1 1亚基进行亚克隆、表达 ,获得重组的亚克隆多肽 ,为进一步研究PB1亚基功能奠定基础。方法 以PB1亚基cDNA为模板 ,用PCR方法扩增出PB1 1片段 ,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pQE30重组 ,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定 ,IPTG诱导各亚克隆系高效表达 ;优化表达条件。结果 PCR法扩增出 4 87bp的片段 ,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒 ,在E .coliM1 5中表达得到相对分子量约为 2 0KD的重组蛋白 ,获得重组多肽。结论 成功地亚克隆及表达了流感病毒RNA聚合酶PB1