不同品种猪PBD-119基因的克隆与差异表达研究

为获得猪β防御素-119(PBD-119)基因mRNA序列以及在不同品种猪体内组织表达量模式,该试验以民猪、大白猪和野杂猪为试验动物,采用RT-PCR方法扩增PBD-119基因mRNA并进行生物信息学分析,利用qRT-PCR的方法检测该基因在不同品种猪组织中的差异表达情况。RT-PCR扩增结果表明:在3个群体猪3种类型组织(肝脏,脾脏和血液)中均能扩增出特异性片段,测序结果显示片段长度为408bp,通过对PBD-119基因序列的比对分析,该基因在第263位碱基上存在多肽位点的改变(C263T),并在第53氨基酸位点发生改变,由脯氨酸变为丝氨酸(P-S),但并不影响二硫键结构;进化树分析表明,猪与人、倭黑猩猩和马的亲缘关系较近,与羊驼和双峰驼亲缘关系较远。qRT-PCR结果显示,PBD-119基因在3个品种猪的各组织中均有表达,且表达存在差异,以品种为研究对象比较相同组织的差异表达,PBD-119基因在肝脏中的表达为野杂猪>民猪>大白猪,在脾脏中表达为大白猪>民猪>野杂猪,而在血液中的表达为民猪>野杂猪>大白猪;以相同品种为目标,考察不同组织间PBD-119基因差异表达,结果发现大白猪不同于民猪和野杂猪在肝脏、脾脏和血液中的表达,表现为脾脏最高,其次为肝脏、血液,而民猪和野杂猪的表达为肝脏和血液中较高,脾脏最低。该试验结果为进一步探究PBD-119基因的生物学功能及免疫防御相关的候选基因提供基础依据。

1例罕见α-地中海贫血产前诊断与家系分子遗传学分析

目的 对1例疑似携带罕见地中海贫血(简称地贫)的产前诊断胎儿进一步测序分析,对先证者进行家系分子遗传学分析。方法 运用血常规和血红蛋白电泳进行地贫筛查,采用gap-PCR法和PCR-RDB法检测24种地贫突变,对疑似罕见地贫进行基因测序分析。结果 先证者为--~(SEA)地贫与α2基因IVS-Ⅱ-119地贫双重杂合子,其IVS-Ⅱ-119地贫基因遗传自母方,--~(SEA)地贫基因遗传自父方。结论 --~(SEA)/α~(IVS-Ⅱ-119)α HbH地贫患儿的诊断,为罕见地贫的遗传咨询和产前诊断提供科学理论依据。

转hrpZPsta大豆株系的分子检测和抗性分析

为考察转基因大豆株系JN27-119-21后代中hrpZPsta外源基因的遗传稳定性、检测JN27-119-21后代的抗病能力,从而为培育抗疫霉根腐病的大豆新品种提供理论参考,以转hrpZPsta基因大豆株系JN27-119-21的T7、T8代为供试材料,通过PCR和Southern Blot分子生物学检测方法和下胚轴侵染法鉴定转基因株系后代抗疫霉菌能力。研究结果表明:外源hrpZPsta基因在高世代转基因株系中能够稳定遗传,hrpZPsta基因已被成功整合到大豆受体吉农27的基因组中,且整合方式为单拷贝,整合位点不同。hrpZPsta基因在转化株系的根、茎、叶中均有表达,T7代平均相对表达量分别为2.877,1.336和7.734,T8代平均相对表达量分别为3.612、1.746和8.627,2个世代相对表达量水平均为叶>根>茎。转基因株系后代对疫霉根腐病的抗病级别为抗性,而受体株系为中抗,抗病能力明显提高。