50株肺炎链球菌pbp2B基因突变与苯唑西林药敏相关性分析

目的 探讨我国耐青霉素肺炎链球菌 (Streptococcuspneumoniae,SPN)pbp2B基因的突变与苯唑西林药敏表型相关性。方法 对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 5 0株肺炎链球菌 ,用K B法进行苯唑西林药物敏感试验 ,用套式聚合酶链反应 (nPCR)扩增pbp2B基因 ,对PCR产物直接进行DNA测序 ,测得序列与SPNR6株 (青霉素敏感株 )序列 [GenBank登录号 :NC 0 0 30 98]相比较。结果 2 9株无突变 ,2 1株有突变 ;突变的 2 1株中 2 0株为点突变 ,可分A、B、C、D 4个类型 ,分别占 71 4 %、14 3%、4 8%、4 8% ;另 1株为E型 ,除有点突变外 ,并有CCT碱基插入 ;无突变的 2 9株SPN菌中苯唑西林敏感率为 86 2 % ;有突变的 2 1株中苯唑西林敏感率为 9 5 % ,二者相比较差异有显著性 (P <0 0 0 1) ;5种突变类型均存在SPN菌对苯唑西林耐药。结论 SPN分离株pbp2B基因突变与其苯唑西林耐药性相关 。

肺炎链球菌PBP1a、PBP2b基因突变分析

目的了解肺炎链球菌(SP)青霉素结合蛋白编码基因(PBPs基因)的突变状况。方法对1株青霉素低耐药株(MIC 1.5μg/ml),苯唑青霉素耐药株(K-B法,D=6 mm),TEM、SHV基因为阴性的SP(SR019),经PCR检测PBP1a、PBP2b,扩增产物全自动DNA测序,并与SPR6株(青霉素敏感株)DNA序列相比较。结果SR019的PBP1a、PBP2b基因均存在突变,基因突变率分别为21%和13.6%。结论耐青霉素SP存在PBP1a、PBP2b基因突变。

新生儿肺炎链球菌苯唑西林耐药与pbp2B基因突变分析

目的了解新生儿肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae,SP)青霉素耐药基因突变及体外苯唑西林耐药状况。方法对分离自新生儿呼吸道的20株肺炎链球菌用纸片扩散法(K-B法)进行青霉素耐药性试验,用套式聚合酶链反应(nPCR)扩增PbP2B基因,对PCR产物进行DNA测序。结果20株肺炎链球菌体外苯唑西林耐药,耐青霉素PbP2B基因突变为点突变,分A、B两类各占95%和5%。结论新生儿肺炎链球菌耐青霉素株pbp2B基因突变类型与DUPLESSIS等报道的不完全相同应引起高度重视。

肺炎链球菌的耐药性和pbp2b基因扩增产物图谱的相关性

目的 了解肺炎链球菌对青霉素和其它抗生素的耐药情况 ;对 40株青霉素敏感菌株和 30株青霉素不敏感菌株进行pbp2b基因扩增产物RFLP图谱相关性研究。方法 采用肉汤稀释法、E 试验和K B纸片法进行抗生素药物敏感试验 ;通过用特异性引物pF和pR对肺炎链球菌进行PCR扩增 ,并对扩增产物进行限制性内切酶HaeⅢ消化反应。结果 肺炎链球菌对青霉素的不敏感率为9.9%～ 14.6 %;40株青霉素敏感菌株 (MICs≤ 0 .0 94μg ml)中的 39株 ( 97.5 %)为s1、s2和s3三种之一 ,1株为r1;30株青霉素不敏感菌株 (MICs≥ 0 .12 μg ml)中的 2 6株 ( 86 .7%)为r1～r6六种之一 ,其余 4株为s1。结论 青霉素和 β 内酰胺酶类抗生素对北京地区的肺炎链球菌具有活性 ;肺炎链球菌的耐药性和pbp2b基因扩增产物图谱之间有相关性。

肺炎链球菌pbp2B基因突变与β-内酰胺类抗生素耐药相关性的研究

目的:探讨肺炎链球菌临床菌株pbp2B基因突变与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性。方法:采用二倍微量稀释法检测23株肺炎链球菌临床菌株对5种β-内酰胺类抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。采用PCR扩增pbp2B基因片段,T-A克隆后测序。根据药敏试验及测序结果,分析pbp2B基因片段突变与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性。结果:43.5%(10/23)肺炎链球菌临床菌株对5种β-内酰胺类抗生素敏感,其余56.5%(13/23)菌株耐药,其中有两株高度耐药。β-内酰胺类抗生素敏感菌株pbp2B基因片段仅有2个氨基酸发生变异,且不位于162～206和215～265区域。对β-内酰胺类抗生素低、中水平耐药菌株仅在pbp2B基因片段162～206区域出现氨基酸突变,162～206和215～265区域均有氨基酸突变的菌株对β-内酰胺类抗生素高度耐药。结论:本地区肺炎链球菌临床菌株对β-内酰胺类抗生素有很高的耐药率。肺炎链球菌pbp2B基因片段162～206区域突变仅引起低、中水平β-内酰胺类抗生素耐药性,高度耐药性则与215～265区域突变密切相关。

肺炎链球菌pbp2b和pbp1a基因突变与青霉素耐药的相关性研究

目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(M IC),套式聚合酶链反应(nPCR)扩增pbp2b和pbp1 a基因,扩增产物直接DNA测序,所测序列与青霉素敏感株(SPN R6)的基因序列进行比较,并分析其氨基酸结构的改变。结果 163株肺炎链球菌中检出青霉素敏感菌75株,中度敏感17株,青霉素耐药菌71株(44%)。耐药菌中58株存在pbp2b突变(81.7%),其中,56株为点突变,2株为CCT插入突变;在27株有pbp2b基因突变的B型和C型耐药菌中,21株出现了不同程度的pbp1 a基因突变。PBP2B氨基酸结构改变以苏氨酸变为丙氨酸、精氨酸变为赖氨酸为主,PBP1A以丙氨酸变为苏氨酸、谷氨酸变为天门冬氨酸为主。结论肺炎链球菌的pbp2b和pbp1 a基因突变与对青霉素的耐药性密切相关,PBP2b突变导致低水平耐药;PBP2b和PBP1A突变导致高水平耐药。