PC-1基因在肿瘤组织中的表达及其启动子区的克隆和活性分析

背景与目的:PC-1是在骨转移和雄激素非依赖的前列腺癌细胞株C4-2中高表达的新基因。本文拟研究PC-1基因在多种人肿瘤组织和正常组织中的表达水平,并对该基因的启动子区进行克隆及活性分析。方法:以PC-1基因特异性DNA序列为探针与10对肿瘤和正常组织的总RNA进行杂交;以C4-2细胞基因组DNA为模板,PCR扩增PC-1基因翻译起始位点上游DNA序列。PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic上,将重组质粒瞬时转染C4-2细胞,荧光素酶定量分析检测启动子活性。结果:多种肿瘤组织中PC-1基因的表达水平明显高于相应的正常组织中的表达;翻译起始位点上游340bp的片段没有启动子活性,而ATG前1099bp、1337bp、1579bp、1831bp和4939bp长度的片段都表现出启动子的功能活性。结论:PC-1基因在人前列腺癌以及多种肿瘤组织中被特异激活,表明该基因的功能可能和肿瘤的发生有关;研究的初步结果表明4939bp长度的启动子活性最强,在1831bp和4939bp之间可能含有转录增强子元件。

PC-1基因表达对前列腺癌细胞迁移能力的影响

背景与目的:PC-1基因在雄激素非依赖和高转移能力的前列腺癌C4-2细胞中高表达,在雄激素依赖及不转移的前列腺癌LNCaP细胞中低表达。本实验旨在研究PC-1对前列腺癌细胞迁移能力的影响。方法:构建PC-1稳定高表达的LNCaP细胞株和反义核酸调低内源性PC-1表达的C4-2细胞株。利用体外迁移系统检测PC-1表达对LNCaP和C4-2细胞迁移运动能力的影响。结果:体外迁移实验表明稳定转染提高PC-1的表达水平并未使LNCaP迁移细胞数增多(P>0.05),而反义核酸降低PC-1表达则使C4-2迁移细胞数降低(P<0.05)。PC-1蛋白水平升高不能提高LNCaP细胞迁移能力,但降低内源性PC-1表达则使C4-2细胞迁移能力明显降低。结论:PC-1可能在前列腺癌细胞侵袭过程中起一定作用。

PC-1基因与肥胖关系的群体水平研究

目的 :研究肥胖、胰岛素抵抗与候选基因 PC- 1之间的关系及其在中国人群分布的规律。方法 :运用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (polymeras chain reaction- restriction fragment length polymorphism,PCR- RFL P) ,分析了 5 3例正常对照者 ,2 7例单纯肥胖者 (OB) ,33例肥胖伴高血压、高血脂症者 (OB+HL) ,35例肥胖伴高血压、高胰岛素血症者 (OB+HI)的浆细胞膜糖蛋白 (PC- 1)基因第 4外显子 12 1位谷氨酰胺 /赖氨酸多态性 (K、Q等位基因 )。结果 :Q等位基因频率在正常对照、肥胖人群、非肥胖糖尿病人群、糖尿病伴肥胖人群分别为 3%、18%、4%和 30 %。与正常对照组比较 ,OB、OB+HL、OB+HI人群的相对危险性 (RR)分别为 4.2 6 ,6 .35 ,8.6 2。与 OB组比较 ,OB+HL、OB+HI人群的 RR分别为 1.33和 1.81。结论 :PC- 1Q等位基因与肥胖、胰岛素抵抗的发生呈显著性正相关。 OB+HL、OB+HI者比 OB者具有更高的 PC- 1Q等位基因频率。它参与了部分中国人肥胖的发生。

PC-1基因K121Q多态性对妊娠期糖尿病患者胰岛素抵抗的影响

目的:探讨PC-1基因K121Q多态性与妊娠期糖尿病(GDM)胰岛素抵抗(IR)的关系。方法:运用PCR-RFLP技术分析PC-1基因多态性,应用放射免疫法测量孕妇空腹胰岛素,分析GDM妇女和正常妊娠妇女两组Q、K等位基因和KQ、KK基因型与胰岛素抵抗指数(IR)之间的关系。结果:GDM组KQ基因型频率和Q等位基因频率高于正常妊娠组(分别为P<0.01和P<0.05),GDM组KQ基因型孕妇的IR高于KK基因型孕妇(P<0.05)。结论:PC-1基因与妊娠期糖尿病IR密切相关,可能参与GDM的发病机制。

青岛地区糖尿病肾病患者PC-1基因K121Q和ACE基因DI多态性的研究

目的探讨浆细胞膜糖蛋白（PC-1）基因4号外显子K121Q多态性及血管紧张素转换酶（ACE）基因与2型糖尿病肾病的相关性分析，寻找与糖尿病发病相关的致病基因。方法用多聚酶链反应（PCR）结合限制性酶切技术检测青岛地区50例2型糖尿病患者和48例正常人的PC-1基因扣ACE基因的多态性分布情况。结果正常对照组中PC-1基因KK基因型38例（79．2％），KQ基因型10例（20．8％），QQ基因型0例（0．00％），K，Q等住基因频率分别为89．6％和10．4％；糖尿病患者中KK基因型41例（82％），KQ基因型9例（18％），QQ基因型0例（0．00％），K，Q等位基因频率分别为91％和9％，2组人群的基因型和等位基因频率差异无统计学显著性意义（P〉0．05）。正常对照组、糖尿病组、糖尿病肾病组之间ACE基因型构成、等位基因频率以及DD型与非DD型构成均无显著性差异。但ACE基因和PC-1基因对糖尿病肾病的发展进程存在协同作用。结论PC-1基因4号外显子K121Q多态性与2型糖尿病及2型糖尿病肾病无明显相关性，QQ基因型不是2型糖尿病及2型糖尿病肾病发病的危险因子；ACE基因DI多态性与2型糖尿病及糖尿病肾病无明显相关性，DD基因型不是2型糖尿病及糖尿病肾病发病的危险因子。

小鼠PC-1基因在大肠杆菌中的表达和纯化

利用PCR和基因重组技术构建了小鼠PC-1基因全长cDNA及其N端45个氨基酸残基的表达质粒pGEX-4T-1-mPC-1和pGEX-4T-1-mPC-1-45。经IPTG诱导后,在大肠杆菌DH5α中,GST-mPC-1和GST-mPC-1-45两个融合蛋白都获得了可溶性高表达。经谷胱甘肽Sepharose-4B亲和柱层析纯化后,获得了纯的GST-mPC-1和GST-mPC-1-45蛋白。

PC-1基因多态性对2型糖尿病患者胰岛素抵抗的影响

目的 探讨PC 1基因 (K12 1Q)多态性对 2型糖尿病患者胰岛素抵抗的影响。方法 采用PCR RFLP技术分析PC 1基因多态性 ,采用放射免疫法检测 2型糖尿病患者空腹血浆胰岛素。结果 2型糖尿病患者中Q等位基因携带者胰岛素抵抗指数 (IR)明显高于KK基因型 (P <0 .0 1)。结论 PC 1基因是一个影响 2型糖尿病胰岛素抵抗的重要因素。

PC-1基因在前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2不同细胞周期的表达

目的:检测PC-1基因在前列腺癌细胞周期中各时间点的表达变化。方法:用200 ng/mL诺可唑(nocoda-zole)处理前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2,16 h后使细胞处于G2/M期,在不同时间点收获细胞,分别进行流式分析和Western印迹,检测PC-1基因的表达。结果:流式分析和Western印迹结果显示,在G2/M期,LNCaP和C4-2前列腺癌细胞系中PC-1基因高表达。结论:PC-1基因的表达与前列腺癌细胞的细胞周期有关,提示PC-1可能在细胞周期调控中发挥作用。

PC-1基因K121Q多态性与OSAHS相关性研究

目的:探讨浆细胞膜糖蛋白1(plasma cell membrane glycoprotein-1,PC-1)基因K121Q多态性与中国汉族人的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)发病关系。方法:应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法,对入选上海地区420例汉族OSAHS患者和190例对照组进行PC-1基因K121Q多态性分型及研究;分析OSAHS患者K121Q多态性与其临床指标(血压、生化指标、人体测量学等)的关系和与高脂血症的危险因素之间的关系。结果:OSAHS患者和对照组PC-1基因K121Q多态性基因型及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);不同性别和严重程度的OSAHS患者与对照组的基因型频率分布、等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05);OSAHS患者不同基因型间ApoA-1的协方差分析显示差异有统计学意义(P=0.006)。不同基因型的OSAHS患者中伴高脂血症的患者差异无统计学意义(OR=0.935,P=0.786,95%CI为0.575～1.520)。结论:PC-1基因K121Q多态性与OSAHS发病无关,与不同性别OSAHS发病及OSAHS严重程度无关。121Q等位基因不是OSAHS患者发生高脂血症的风险因素,但121Q等位基因的OSAHS患者的ApoA-1水平显著增高。

PC-1基因K121Q多态性与2型糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病的关系

目的观察PC-1基因K121Q多态性与2型糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称2型糖尿病合并冠心病)的关系。方法选自2018年1月-2020年1月于我院医院收治的2型糖尿病合并冠心病患者120例作为观察组,健康体检者103例作为对照组。观察两组间生化学指标、基因型及等位型基因频率,并对比观察组PC-1不同基因型的血脂及血糖水平。结果对照组总胆固醇、三酰甘油、LDL-C、HbAlc、空腹血糖、cTnⅠ、apoCⅢ、BMI均低于观察组,而HDL-L则高于观察组(P<0.05);对照组KQ+QQ基因及Q等位基因低于观察组,KK、K等位基因高于观察组(P<0.05);观察组PC-1基因K121Q位点KK与KQ+QQ基因型间比较,KK基因型BMI低于KQ+QQ基因型,差异显著(P<0.05);而两基因型患者空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、LDL-C、HDL-L水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论PC-1基因K121Q多态性可能通过影响血脂、血糖代谢,进而导致2型糖尿病合并冠心病的发生。

PC-1基因表达诱导NIH3T3细胞恶性转化

目的 通过建立稳定表达外源PC -1基因的小鼠成纤维细胞株,初步探讨PC- 1基因表达对肿瘤发生、发展的影响。方法 通过脂质体介导的方法,将真核表达载体pcDNA3 1( ) /myc his pc 1稳定转染NIH3T3细胞,之后利用PCR、逆转录PCR(RT PCR)技术,确定外源PC -1基因在靶细胞染色体上的整合及在转录水平的表达。通过细胞形态学分析、MTT实验、细胞周期分析、软琼脂集落形成和裸鼠成瘤实验,观察PC -1基因表达对NIH3T3生物学特性的影响。结果 建立了稳定转染PC- 1基因的NIH3T3细胞株。PC -1基因表达的小鼠成纤维细胞NIH3T3生长速度加快,在软琼脂上生长并形成集落,接种裸鼠后可成瘤 (6 /6)。结论 PC- 1基因在NIH3T3细胞中稳定表达具有诱导正常NIH3T3细胞发生恶性转化的重要生物功能。

膜糖蛋白PC-1基因K121Q多态性与2型糖尿病相关性

运用PCR RFLP方法分析膜糖蛋白PC 1基因K 12 1Q多态性 ,观察Q、K等位基因和KQ、KK基因型在正常对照组和 2型糖尿病组中的分布 ,同时测定多种生化及临床指标。结果显示 ,Q等位基因与 2型糖尿病有相关性 ,且与 2型糖尿病伴肥胖、高血压。

癌基因D52家族新基因PC-1在前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2B的G_2/M期高表达

目的:检测癌基因D52家族新基因PC-1在细胞周期各时相的表达变化。方法:用1mmol/L羟基脲处理前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2B40h,使细胞同步化于G1/S期,在药物撤除后0～16h不同时间点收获细胞,分别进行流式分析和Western blot检测。结果:流式分析和Western blot检测在LNCaP和C4-2B细胞系中得到了趋势一致的结果,即PC-1基因在G2/M期高表达。结论:PC-1基因的表达与前列腺癌细胞的细胞周期有关,表明PC-1蛋白可能在G2/M期发挥作用。

PC-1在前列腺癌细胞中促进c-myc基因的表达

前列腺癌相关基因PC-1(Prostate and colon gene1)是属于癌基因D52家族成员,具有促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的功能。为了研究PC-1发挥这种生物功能的分子机制,文章在PC-1高表达的LNCaP-pc-1及对照LNCaP-zero细胞中,利用RT-PCR和Western blotting等方法检测c-myc基因表达;提取两细胞胞质和胞核蛋白,利用Western blotting分析c-myc上游调节蛋白β-catenin变化;利用c-Myc蛋白抑制剂10058-F4作用前列腺癌细胞C4-2,Western blotting检测PC-1蛋白表达变化。发现PC-1促进c-myc基因表达,并促进β-catenin入核;c-Myc蛋白抑制剂10058-F4可抑制PC-1的表达。结果表明:PC-1在前列腺癌中促进c-myc基因的表达,并且这种促进作用可能是通过Wnt/β-catenin信号通路实现的。同时,PC-1与c-Myc蛋白间可相互促进,进一步促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长。

敲低前列腺癌相关基因PC-1的表达抑制前列腺癌细胞C4-2雄激素非依赖性生长

目的:研究敲低癌基因D52家族成员PC-1的表达对前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的影响。方法:利用RNA干扰技术构建PC-1稳定低表达的C4-2细胞株;利用四唑盐(MTT)比色实验检测敲低PC-1基因表达对C4-2细胞雄激素非依赖生长的影响。结果:敲低PC-1表达抑制前列腺癌C4-2细胞的生长,并降低了C4-2细胞雄激素非依赖性生长的能力。结论:PC-1基因参与了前列腺癌向雄激素非依赖阶段发展和维持的过程,为进一步研究PC-1在促进前列腺癌细胞发生发展过程中的作用奠定了基础。

小鼠PC-1蛋白兔多克隆抗体的制备及初步应用

目的 :获得小鼠PC 1蛋白的兔多克隆抗体 ,检测其在小鼠器官中的表达谱。方法 :以纯化后的小鼠PC 1蛋白及其N端 45个氨基酸与GST的融合蛋白 (GST MPC 1、GST MPC 1 45 )为抗原 ,制备了它们的兔多克隆抗体。进一步应用饱和硫酸铵沉淀法、DEAE5 2和ProteinA亲和层析法对这两个抗体进行了纯化 ,Westernblot检测了PC 1蛋白在昆明白小鼠七个组织中的表达情况。结果 :两个兔多克隆血清的效价分别为 1∶2 0 0 0 0和 1∶2 0 0 0 0 0 ,并能与人工合成的人PC 1蛋白N端的 46个氨基酸发生良好的交叉反应。PC 1蛋白在结肠中有表达 ,在肾中有微弱表达 ,而在心、肺、肝、胃、脾中没有表达。结论 :获得小鼠PC 1蛋白的兔多克隆抗体 ,PC 1蛋白在结肠中有表达 ,在肾中有微弱表达 ,而在心、肺、肝、胃。

PC-1蛋白鼠单克隆抗体制备的改进及意义

目的为PC-1蛋白功能的研究奠定基础。方法以纯化后的PC-1蛋白及其N端46个氨基酸与GST的融合蛋白(GST-PC-1和GST-PC-1-46)为抗原,通过常规和脾内免疫相结合的方法免疫BALB/c小鼠,经鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,用直接ELISA法进行克隆化筛选,单克隆抗体的染色体分析及亚类鉴定,检测PC-1基因表达及分布。结果成功获得2株抗鼠PC-1基因单克隆抗体,抗体亚型为IgG1,PC-1在高恶性前列腺癌细胞C4-2中高表达,在低恶性前列腺癌细胞LNCaP中少量表达,与前期研究结果相符。免疫组化染色示PC-1蛋白定位于细胞质。结论PC-1蛋白鼠单克隆抗体成功制备,针对PC-1基因蛋白的单抗在前列腺癌的放射免疫显像诊断及导向治疗上有潜在应用价值;可用于PC-1蛋白功能的研究。

乳腺癌细胞株MCF-7-PC-1-46的建立

以人前列腺癌C4-2细胞基因组DNA为模板,扩增出PC-1基因N端编码46个氨基酸残基及其上游非编码区共599bp的DNA序列,将其正向克隆到真核表达载体pIRES2中,并在脂质体介导下,转染人乳腺癌细胞MCF-7,经G418筛选获得阳性单克隆,细胞扩大培养后,进行PCR和RT-PCR分析,检测外源PC-1基因在靶细胞中的整合与转录。PCR和RT-PCR结果表明,稳定转染细胞株MCF-7-PC-1-46具有外源目的基因的整合和相应mRNA的高表达。说明成功建立了稳定表达外源PC-1基因N端46个氨基酸的人乳腺癌细胞株,为进一步研究PC-1基因的生物学功能提供了实验材料。

PC-1增强受体酪氨酸激酶家族成员EphA3在前列腺癌细胞中的转录

为了研究前列腺癌相关基因(prostate and colon gene 1,PC-1)对受体酪氨酸激酶家族分子EphA3表达的影响,用RT-PCR、实时PCR和Western印迹检测表达不同水平PC-1的前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2中EphA3的表达情况.发现PC-1可诱导EphA3基因表达上调.采用荧光素酶实验检测PC-1对于EphA3启动子转录活性的影响,结果显示,PC-1对转录起始位点上游916 bp的启动子活性没有影响,而可增强转录起始位点上游2011 bp启动子的活性.对EphA3启动子-916 bp～-2 011 bp区域进行生物信息学分析,结果显示,此区域包含HSF、NF-1、Nkx-2、SP1和GATA-1等多种转录因子结合位点.实验结果表明,PC-1可通过影响EphA3启动子诱导EphA3基因高表达,其调控区域位于转录起始位点上游-2 011 bp至-916 bp之间,提示PC-1可能通过影响一些结合于此区域的转录因子来影响EphA3启动子的转录活性.

前列腺癌相关基因研究

前列腺癌是目前最重要的危害欧美国家男性健康的肿瘤疾病,在我国发病率也呈上升趋势。本文综述了前列腺相关基因研究的最新文献,分染色体畸变、易感基因、原癌基因、抑癌基因和其他基因等五个部分。