鞣花酸的抗氧化性及其对PC-12细胞氧化损伤的保护作用研究

通过鞣花酸清除自由基、抑制亚油酸自氧化、还原铁离子(Fe^(3+))能力实验研究其抗氧化活性;以过氧化氢(H2O2)诱导PC-12细胞建立氧化损伤模型,探索鞣花酸对PC-12细胞氧化应激损伤的保护作用,建立鞣花酸抗氧化活性与对细胞氧化应激损伤之间的联系。结果表明,鞣花酸对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_(2)^(-))、ABTS^(+)·自由基清除的半抑制浓度分别为92.14、36.70、47.91μg/mL;对亚油酸自氧化的抑制率高达90%;对铁离子具有很强的还原能力。鞣花酸对H2O2诱导的PC-12细胞氧化损伤具有良好的保护作用,且与抗氧化活性之间具有良好的相关系。鞣花酸对细胞氧化损伤的保护作用可能与提高细胞的抗氧化能力有关。

瑞马唑仑诱导PC-12细胞炎症因子表达和凋亡

目的 探讨瑞马唑仑对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12炎症因子表达和凋亡的影响。方法 不同浓度的瑞马唑仑(25、50、125、250μmol/L)处理PC-12细胞,并设置对照组,细胞活力检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)的水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果 与对照组相比,瑞马唑仑处理组的细胞增殖能力、Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 瑞马唑仑可诱导PC-12细胞的炎症反应,并能通过调节凋亡相关蛋白的表达促进PC-12凋亡。

毛子草化学成分及其促PC-12细胞的分化作用研究Ⅰ

目的:研究毛子草的化学成分及其促PC-12细胞的分化作用.方法:利用反复硅胶柱色谱进行分离和纯化,通过理化方法及光谱分析鉴定其结构.采用PC-12细胞株模型对毛子草不同提取部位及各单体化合物进行了促分化作用研究.结果:从毛子草的正丁醇溶解部分分离得到5个化合物,鉴定为:车前醚苷(Ⅰ),5-羟基-4',6,7-三甲氧基黄酮(Ⅱ),4',5-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮(Ⅲ),4',5-二羟基-7-甲氧基黄酮(Ⅳ),5-羟基-4',7-二甲氧基黄酮(Ⅴ).结论:化合物Ⅰ为首次从该植物中分离得到;化合物Ⅱ～Ⅴ为首次从角蒿属植物中分离得到.生物活性表明毛子草正丁醇溶解部位和化合物Ⅰ对PC-12细胞均具有一定的营养活性.

Aβ诱导PC-12细胞凋亡建立阿尔茨海默病细胞模型

目的 用β 淀粉样蛋白 (Aβ2 5- 35)诱导PC 1 2细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型。方法 体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC 1 2细胞 ,以不同浓度Aβ2 5 - 35诱导并于不同时间收获细胞 ,应用MTT法观察细胞活力 ,Fura 2 /AM荧光分析法检测细胞内游离Ca2 +浓度 ,Hoechst332 5 8及碘化丙啶复染分析细胞凋亡。结果 Aβ2 5- 35作用于PC 1 2细胞后 ,细胞活力逐渐下降 ,并呈时间和剂量依赖性 ;同时细胞内Ca2 +浓度显著上升 ;不同浓度Aβ2 5 - 35作用后 ,PC 1 2细胞于不同时间出现凋亡的典型形态学特征 ,该时间比Ca2 +浓度上升约晚 6～ 1 2h。结论 Aβ2 5- 35诱导后PC 1 2细胞活力下降、细胞内Ca2 +浓度上升及细胞凋亡 。

复方海蛇胶囊抗PC-12细胞凋亡研究

目的：研究复方海蛇胶囊对β-淀粉样蛋白（Aβ1～42）诱导的PC-12细胞凋亡的影响，探讨复方海蛇胶囊应用于痴呆的治疗机制。方法：采用四氮唑蓝比色法（MTr法）确定复方海蛇胶囊对神经生长因子（NGF）诱导培养PC-12细胞的安全剂量后，加或不加Aβ，分别用MTr法、流式细胞术（FCM术）检测不同质量浓度的复方海蛇胶囊（0．01，0．1，1，5mg·mL^-1）对PC-12细胞凋亡的影响；用蛋白免疫印迹（Western-blot）法分别检测凋亡执行酶caspase-9与caspase-3的活性。结果：复方海蛇胶囊对NGF诱导培养的PC-12细胞的安全剂量为小于10mg·mL^-1。复方海蛇胶囊各剂量组对A卢诱导的PC-12细胞的凋亡具有明显的抑制作用。各组数据（A）分别为：1．75±0．12，0．73±O．35，0．79±O．11，0．83±O．07，1．31±O．07和1．80±0．38，与空白组比较P〈0．01，流式细胞检测中凋亡细胞的百分率降低（1．93±0．41）％，（46．17±4．08）％，（35．35±4．63）％，（28．62±3．81）％，（15．13±3．15）％，（7．84±1．76）％，与空白组比较P〈0．01。另外，复方海蛇胶囊抑制了A口诱导PC-12细胞的caspase-9和caspase-3活性的增高。结论：复方海蛇胶囊可显著抑制A口诱导PC-12细胞的凋亡，其机制可能通过抑制凋亡执行酶caspase-9，caspase-3的活性实现。

兖州卷柏的肽类化学成分及对低氧/复氧诱导的PC-12细胞损伤的保护作用

采用聚酰胺、硅胶柱层析、Sephadex LH-20和制备液相等分离方法对卷柏属植物兖州卷柏的化学成分进行分离纯化,根据理化性质和现代波谱技术鉴定了11个化合物：aurantiamide（1）、aurantiamide acetate（2）、Nbenzoyl-L-phenylalaninol（3）、neoechinulin A（4）、5,7-二羟基色原酮（5）、3-（3-羟基-苯基）-丙酸（6）、3-（3-羟基-苯基）-丙酸甲酯（7）、肉桂酸（8）、（1H-indol-3-yl）oxoacetamide（9）、3-甲醛-1H-吲哚（10）、3-甲酸-1H-吲哚（11）,以上11个化合物首次从该植物中分离得到,且为首次从卷柏属植物中得到。采用Hoechst Staining法评价化合物1~4四个肽在低氧/复氧诱导的PC-12细胞损伤中的保护作用,结果表明4个肽类化合物在低氧复氧诱导的PC-12中表现出较强的抗氧化作用,并具有剂量依赖性,对低氧/复氧诱导的PC-12细胞损伤呈现出一定的保护作用。

含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响

目的通过建立Aβ损伤的PC12细胞模型,分析含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响。方法将PC12细胞离体培养,待细胞进入对数生长期后吸弃培养液,分别加入空白培养液10%、正常脑脊液10%、含安理申脑脊液10%、含地黄饮子脑脊液5%、含地黄饮子脑脊液10%、含地黄饮子脑脊液20%,并加培养液补至等量,即成为:空白组、模型组、安理申组、地黄饮子低剂量组、地黄饮子中剂量组、地黄饮子高剂量组,37℃孵育2 h。除空白组外各组均加入4μl经老化处理终浓度为10μmol/L的Aβ25-35,建立AD细胞模型,空白组则加入4μl空白培养液,继续37℃孵育24h。然后收集培养液,离心细胞。检测各组PC12细胞培养液中MDA、SOD、CAT、GSH-Px的含量。结果地黄饮子能降低Aβ25-35损伤PC-12细胞培养液中的MDA含量,提高PC-12细胞培养液中SOD的活性、提高CAT、GSH-Px的含量即抗氧化酶活性,提高自由基清除能力,减少自由基对PC-12细胞的损伤。结论含地黄饮子脑脊液可能通过改善Aβ25-35损伤的PC-12细胞状态,减轻脂质过氧化反应,提高降低的抗氧化酶活性,清除自由基,从而起到保护细胞的作用。

皂角刺提取物对皮质酮诱导PC-12细胞损伤的保护作用研究

目的:研究皂角刺提取物对皮质酮(CORT)诱导PC-12细胞损伤的影响及其作用机制。方法:不同剂量的皂角刺水提取物作用于经皮质酮诱导的PC-12细胞后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和氧化应激(ROS)水平,用In cell Western技术检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、P62、LC3B及环磷酸腺苷(cAMP)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白。结果:与模型组比较,皂角刺提取物能显著提高细胞的存活率及自噬蛋白LC3B、P62和CREB、p-CREB、cAMP、BDNF蛋白表达,显著降低PC-12细胞氧化应激水平和凋亡蛋白Bax/Bcl-2的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:皂角刺水煎液提取物能通过影响氧化应激水平、凋亡水平、自噬水平和cAMP-CREB-BDNF通路来保护皮质酮诱导的PC-12细胞损伤。

雷公藤内酯醇抑制脂多糖诱导的PC-12细胞COX-2的表达

目的 了解雷公藤内酯醇 (TP)对PC 12细胞增殖和表达环氧化酶 2 (COX 2 )及合成前列腺素E2 (PGE2 )的影响 ,探讨TP应用于痴呆治疗的可能机制。方法 采用神经生长因子 (NGF)诱导培养PC 12细胞 ,用不同浓度的TP(0 ,0 2 8× 10 -6,2 8×10 -6,2 8× 10 -6mol·L-1)预处理后 ,加或不加脂多糖 (LPS) ,分别用氚 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)掺入法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)、半定量逆转录 聚合酶联反应 (RT PCR)法、细胞酶联免疫法及蛋白免疫印迹 (Western blot)法检测PC 12细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE2 的水平、细胞COX 2mRNA及蛋白表达水平。同时提取各组细胞蛋白 ,测定其核转录因子 (NF κB)活性。结果 TP对LPS诱导的PC 12细胞的COX 2mRNA ,蛋白表达 [空白对照与不同浓度下分别为 [(0 34± 0 12 )× 10 -6,(1 92± 0 2 6 )× 10 -6,(1 78± 0 32 )× 10 -6,(1 14± 0 2 2 )× 10 -6,(0 4 8± 0 14 )× 10 -6mol·L-1,P <0 0 1]及PGE2 的合成 [分别为 (2 2 8± 0 32 )× 10 -6,(32 86± 6 2 3)× 10 -6,(31 2 8± 5 4 4 )× 10 -6,(18 4 3± 3 92 )× 10 -6,(4 18± 1 79)× 10 -6mol·L-1,P <0 0 1]具有不同程度的抑制作用 ,与TP浓度 (0～ 2 8× 10 -6mol·L-1)呈明显正相关?

博尔纳病病毒磷蛋白在PC-12细胞内的稳定表达及对其增殖的影响

【目的】建立博尔纳病病毒磷蛋白在神经源性PC-12细胞内的稳定表达体系,初步探讨博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长是否有影响。【方法】培养PC-12细胞,用阳离子脂质体的方法将带有博尔纳病病毒磷蛋白基因的表达质粒转染到细胞内进行稳定表达,用荧光显微镜和RT-PCR的方法检测细胞内磷蛋白的表达,用MTT方法检测磷蛋白对细胞生长的影响。【结果】转染细胞经培养10代后仍然表达目的蛋白,成功建立稳定表达体系。MTT检测显示博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,其生长明显滞后,但粘附能力增加。【结论】通过本文建立的体系能在PC-12细胞内稳定表达博尔纳病病毒磷蛋白,该体系可用于进一步深入研究博尔纳病病毒磷蛋白的作用机制,进而为研究博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的机制提供基础。此外本文通过检测细胞的增殖活性发现博尔纳病病毒磷蛋白对PC-12细胞的生长具有明显的抑制作用,可能是博尔纳病病毒持续感染中枢神经系统的重要机制之一。

六味地黄丸抑制H_2O_2诱导的PC-12细胞凋亡的作用机制

目的探讨经典名方六味地黄丸对H2O2所致PC12细胞凋亡时bax、caspase-8和bcl-2基因和蛋白表达的调控作用。方法把大鼠肾上腺嗜铬瘤(PC-12)细胞分为4组:对照组、模型组、六味地黄丸组、维生素(Vit)E组。待细胞培养24 h贴壁后吸去培养液,对照组和模型组都加入含10%大鼠血清培养液,六味地黄丸组和Vit E组分别加入含10%六味地黄丸大鼠血清培养液和含Vit E的培养液,预保护24 h后,除对照组之外的各组加入H2O2终浓度为200μmol/L,对照组加入等量的培养液,继续孵育24 h后离心收集细胞,提取总RNA和蛋白。应用RT-PCR和Western印迹方法分别测定bax、caspase-8、bcl-2基因和蛋白质表达的变化。结果六味地黄丸能下调bax、caspase-3基因和蛋白的表达,对bcl-2基因和蛋白表达有上调作用。结论六味地黄丸能通过有效降低bax、caspase-8基因和蛋白表达,提高bcl-2的表达,抑制、阻止PC-12细胞凋亡,促进细胞存活。

醋酸铅对PC-12细胞Bax、Bcl-2和p53蛋白表达的影响

用蛋白免疫印迹法研究醋酸铅对PC-12细胞Bax、Bcl-2和p53蛋白表达的影响.结果显示,当醋酸铅浓度达到0.1μmol·L-1时,Bax和p53的表达水平显著上升,决定凋亡是否发生的重要因素Bax/Bcl-2比率也明显上升,并存在浓度依赖关系.当醋酸铅浓度达到1μmo·lL-1时,Bcl-2的表达显著降低.结合相关文献报道,Bax、Bcl-2和p53可能在铅诱导的细胞凋亡中起了重要的调控作用.

葛根素对Aβ_(25-35)诱导的PC-12细胞损伤的保护作用

目的研究葛根素对阿尔茨海默病(AD)的保护作用。方法实验分正常组、模型组、葛根素保护组。体外培养大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC-12),以不同浓度诱导PC-12细胞建立AD的细胞模型,观察葛根素对细胞活力、凋亡、异常磷酸化的tau蛋白的影响。结果不同浓度的β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)作用于PC-12细胞后,选用10μmol/L的Aβ25-35作用于PC-12细胞24h建立AD细胞模型,MTT法检测细胞存活率发现葛根素保护组较模型组明显升高,TUNEL法检测凋亡发现阳性细胞葛根素保护组明显少于模型组,P-tau抗体检测异常磷酸化的tau蛋白发现阳性细胞葛根素保护组明显少于模型组,均具有统计学意义。结论葛根素对AD具有保护作用。

氯丙嗪对缺氧缺糖PC-12细胞的保护作用及其机制的探讨

目的研究氯丙嗪(CPZ)对PC-12缺氧缺糖细胞保护作用的机制。方法实验分组为正常对照组(con)、缺氧缺糖模型组(M)、氯丙嗪低浓度组(1μmol.L-1、L)、氯丙嗪高浓度组(2.5μmol.L-1、H),MTT法检测各组PC-12细胞增殖率,RT-PCR方法检测各组PC-12细胞中IκBα和caspase-3的mRNA的表达水平,用Western blotting方法检测各组PC-12细胞中NF-κB P65和NF-κB P50的表达水平。结果与模型组相比,缺氧缺糖氯丙嗪低浓度组和缺氧缺糖氯丙嗪高浓度组细胞增值率明显升高,差异有统计学意义,同时IκBα和caspase-3的mRNA表达水平明显下降(P<0.01)、NF-κB P65和NF-κB P50蛋白的水平明显升高(P<0.01),差异有统计学意义。结论氯丙嗪能够减轻缺氧缺糖引起的细胞损伤;其机制可能与调控IκB/NF-κB途径,减少凋亡相关基因的表达有关。

广州城区大气细颗粒物对PC-12细胞IL-8表达的影响

目的研究广州城区大气细颗粒物（PM2．5）对PC—12细胞IL-8表达的影响，并从p38MAPK途径探索其作用机制，促进对PM2．5毒性的认识。方法采集广州城区大气中的PM2．5，对PC—12细胞染毒，设对照组、不同浓度PM2．5组和SB203580＋PM2．5组（用20μmol／L的SB230580预处理1h后再给予100μg／ml的PM2．5），Trizol法提取RNA用定量PCR法检测细胞IL-8表达情况，RIRP法提取细胞总蛋白，用Western blot法检测p38MAPK的磷酸化改变。结果定量PCR检测显示用25、50和100μg／ml的PM2．5染毒后PC-12细胞IL-8表达明显增高；Western blot结果显示PM2．5可磷酸化激活p38MAPK信号分子，加入p38MAPK抑制剂SB230580可以抑制PM2．5诱导的IL-8表达。结论PM2．5可通过p38MAPK途径诱导PC-12细胞表达细胞因子IL-8，这可能是其导致神经细胞毒性的机制之一。

川芎嗪通过干预Bax/Bcl2平衡调控Caspase9途径抑制谷氨酸诱导的PC-12细胞凋亡

目的:通过制作谷氨酸诱导的PC-12细胞损伤模型,进一步探讨川芎嗪影响凋亡的作用机制。方法:应用细胞毒性试验,确定细胞模型中谷氨酸浓度;进而,应用不同浓度的川芎嗪同时处理PC-12细胞,采用荧光燃料Hoechst-33258染色直接观察细胞核的改变,采用流式细胞术检测细胞凋亡和Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9活性,最后应用实时荧光定量RT-PCR检测Bax和Bcl2转录水平。结果:谷氨酸具有细胞毒性,其半数抑制浓度(ID50)是21.72mmol/L;川芎嗪呈剂量依赖性的提高细胞存活率。谷氨酸诱导的PC-12细胞以中晚期凋亡为主,但川芎嗪处理后,PC-12细胞凋亡率显著降低(P<0.05),且以早期凋亡为主。川芎嗪处理谷氨酸细胞模型后,Caspase-8活性未见显著改变(P>0.05),但在1mmol/L和10mmol/L川芎嗪干预组,Caspase-3和Caspase-9活性显著降低,同时伴随Bax/Bcl2比值显著降低(P<0.05)。结论:谷氨酸通过Caspase9而不是Caspase8途经活化Caspase3诱导凋亡;川芎嗪通过干预Bax/Bcl2平衡调控Caspase9途径抑制谷氨酸诱导的PC-12细胞凋亡。

促红细胞生成素对β-淀粉样肽诱导的PC-12细胞凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的PC-12细胞凋亡的保护作用。方法PC-12细胞分为空白对照组、模型组、EPO组。细胞培养24h后,EPO组加入终浓度为25U/ml的EPO预处理8h,再与模型组同时加入终浓度为10μmol/LAβ25-35,继续培养48h,采用MTT比色法分析细胞存活率,利用电镜观察线粒体超微结构的变化,运用Westernblot检测细胞色素C(Cyt-C)和Bcl-2蛋白表达。结果MTT显示EPO组细胞存活率明显高于模型组(P<0.05),并且中剂量存活率最高;电镜结果显示模型组线粒体数量和形态发生了明显的改变,而EPO组线粒体数量多,结构比较完整;Westernblot显示EPO组Bcl-2蛋白表达较模型组明显增加(P<0.05);模型组胞浆Cyt-C表达较EPO组明显增加(P<0.05)。结论EPO可以提高细胞的存活率,其机制为稳定线粒体结构和功能,提高抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制Cyt-C释放,从而抑制细胞凋亡。

Aβ_(25-35)诱导PC-12细胞凋亡及AD细胞模型建立

目的:探讨Aβ_(25-35)对PC-12细胞凋亡的影响及建立阿尔茨海默病细胞模型的适宜条件。方法:以不同浓度Aβ_(25-35)诱导PC-12细胞,并于多时间点观察细胞形态改变、应用MTT测定细胞活力以及检测细胞凋亡情况。结果:PC-12细胞在不同浓度Aβ_(25-35)诱导下细胞活力均有不同程度下降(P<0.05)。结论:Aβ_(25-35)可诱导PC-12细胞活力呈时间和剂量依赖性下降及细胞凋亡,可认为20μmol/L Aβ_(25-35)干预24小时可作为较理想的AD细胞型。

脑内移植NGF诱导的PC-12细胞治疗大鼠帕金森病的研究

实验利用SD大鼠复制6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)完全损伤型帕金森动物模型,将神经生长因子(nerve growth factor,NGF)处理后的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC-12)移植入模型大鼠纹状体内,观察模型动物行为改善和移植PC-12细胞的存活情况.经行为学检测,6-OHDA动物模型复制成功率达55.1%.免疫组织化学、蛋白印迹检测结果显示模型动物黑质多巴胺能神经元数目减少,黑质酪氨酸羟化酶含量降低证明模型动物稳定、可靠.PC-12细胞经NGF(50μg/L)连续诱导7 d,细胞逐渐平展、细胞膜变皱褶等神经元形态学特征出现后,于纹状体内行细胞移植术,经阿普吗啡(apomorphine,APO)诱导旋转行为有明显改善,蛋白印迹检测也发现移植侧具有显著的酪氨酸羟化酶免疫阳性信号.因此,NGF诱导后的PC-12细胞可以作为治疗帕金森的一种细胞供体.

灯盏花素对1-甲基-4-苯基吡啶诱导的PC-12细胞周期阻滞的影响

目的考察灯盏花素对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞株PC-12细胞周期阻滞的影响并探讨其机制。方法 MTT法检测PC-12细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期,Western blot技术检测ERK1/2磷酸化水平。结果灯盏花素预处理明显抑制MPP+诱导的PC-12细胞周期G2/M期阻滞,升高细胞存活率,增加ERK1/2磷酸化水平。ERK1/2抑制剂U0126预处理后,灯盏花素对细胞存活率和ERK1/2磷酸化水平无明显作用。结论灯盏花素的作用机制与增加ERK1/2磷酸化水平有关。