外源高表达PC-1蛋白N端43个氨基酸可加速人前列腺癌细胞系C4-2的生长

研究PC-1蛋白N端43个氨基酸表达对人前列腺癌细胞C4-2生长的影响。用DNA重组技术将含PC-1蛋白N端43个氨基酸的DNA序列正向克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,采用脂质体法将重组质粒稳定转染进C4-2细胞中,RT-PCR分析外源序列的转录情况,固相ELISA法测定PC-1蛋白N端43个氨基酸的表达,MTT实验分析细胞的生长速度。结果获得了稳定转染PC-1基因N端43个氨基酸的前列腺癌细胞株,在该细胞株中外源PC-1蛋白N端43个氨基酸得到高表达,细胞生长速度较对照细胞加快了38%。结果表明外源PC-1基因N端43个氨基酸高表达可提高人前列腺癌细胞C4-2的生长速度,推论PC-1基因高表达可能在人前列腺癌的发展中起一定的促进作用。

小鼠PC-1基因在大肠杆菌中的表达和纯化

利用PCR和基因重组技术构建了小鼠PC-1基因全长cDNA及其N端45个氨基酸残基的表达质粒pGEX-4T-1-mPC-1和pGEX-4T-1-mPC-1-45。经IPTG诱导后,在大肠杆菌DH5α中,GST-mPC-1和GST-mPC-1-45两个融合蛋白都获得了可溶性高表达。经谷胱甘肽Sepharose-4B亲和柱层析纯化后,获得了纯的GST-mPC-1和GST-mPC-1-45蛋白。

乳腺癌细胞株MCF-7-PC-1-46的建立

以人前列腺癌C4-2细胞基因组DNA为模板,扩增出PC-1基因N端编码46个氨基酸残基及其上游非编码区共599bp的DNA序列,将其正向克隆到真核表达载体pIRES2中,并在脂质体介导下,转染人乳腺癌细胞MCF-7,经G418筛选获得阳性单克隆,细胞扩大培养后,进行PCR和RT-PCR分析,检测外源PC-1基因在靶细胞中的整合与转录。PCR和RT-PCR结果表明,稳定转染细胞株MCF-7-PC-1-46具有外源目的基因的整合和相应mRNA的高表达。说明成功建立了稳定表达外源PC-1基因N端46个氨基酸的人乳腺癌细胞株,为进一步研究PC-1基因的生物学功能提供了实验材料。

前列腺癌相关基因研究

前列腺癌是目前最重要的危害欧美国家男性健康的肿瘤疾病,在我国发病率也呈上升趋势。本文综述了前列腺相关基因研究的最新文献,分染色体畸变、易感基因、原癌基因、抑癌基因和其他基因等五个部分。