干扰miR-21调控人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的实验研究

目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因表达情况。取对数期生长PC-3细胞株,采用脂质体转染法将miR-21抑制剂(inhibitor)及NC inhibitor质粒转染至PC-3细胞,分别设为干扰组和空载组,另取不做处理PC-3细胞为空白组。采用倒置荧光显微镜检测转染效率;采用MTT法检测并对比各组不同时刻吸光度(OD值);采用划痕试验及Transwell试验检测并对比三组穿膜细胞数及迁移率;采用RT-PCR法检测并对比三组miR-21、基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测并对比三组TIMP3、MMP-9蛋白表达水平。结果 PC-3细胞miR-21相对表达量显著低于RWPE-1细胞( P <0.05);倒置显微镜下检测转染24 h后干扰组和空载组转染效率分别为(82.16±8.20)%、(80.23±8.69)%;干扰组MTT实验不同时刻OD值均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势( P <0.05);干扰组12 h、24 h迁移率均显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05),三组24 h迁移率显著高于12 h( P <0.05);干扰组穿膜细胞数显著少于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组miR-21相对表达量、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量显著低于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05);干扰组TIMP3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白组和空载组( P <0.05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义( P >0.05)。结论前列腺癌细胞miR-21异常高表达,干扰miR-21可抑制人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭能力,可能与上调TIMP3 mRNA和蛋白、下调MMP-9 mRNA和蛋白有关。

miRNA-21减轻氧糖剥夺对PC12细胞的损伤

目的:探讨微小RNA(miRNA)-21对低氧缺血损伤PC12细胞的影响。方法:体外培养PC12细胞,建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型。细胞随机分为对照组、OGD组、阴性对照序列+OGD组、miRNA-21 inhibitor+OGD组和miRNA-21 mimic+OGD组。通过采用CCK-8、real-time PCR、Western blot等技术探讨miRNA-21对OGD损伤PC12细胞的影响和机制。结果:降低miRNA-21的表达,受OGD损伤的PC12细胞活力明显下降;增加miRNA-21的表达,受OGD损伤的PC12细胞活力明显增加。进一步发现miRNA-21促进OGD损伤PC12细胞的AKT磷酸化。结论:miRNA-21明显增加OGD损伤PC12细胞的活力,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

微小RNA-21对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及对程序性细胞凋亡因子4表达的调控作用

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-21对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及对程序性细胞凋亡因子4（PDCD4）表达的调控作用。方法反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测前列腺癌细胞LNCap、PC-3、DU145及人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中miR-21表达，脂质体Lipofectamine^TM2000将miR-21inhibitor和miR-21Nc转入Pc．3细胞中，48h后，RT—PCR检测miR．21表达，MTT法检测细胞活力，流式细胞术分别检测细胞凋亡及细胞周期，RT—PCR及Westernblot检测PDCD4蛋白及mRNA的表达。结果前列腺癌细胞LNCap、DU145及PC-3（0．36±0．03、0．85±0．08、1．09±0．10）中miR-21的表达量高于人正常前列腺上皮细胞RWPE．1中的表达量（0．17±0．02，P=0．013，P=0．007，P=0．001）。与miR-21NC组比较，miR-21inhibitor组miR-21表达量（0．204-0．02比1．07±0．10）显著降低（P=0．006），PC-3细胞活力（0．374-0．04比0．75±0．07）下降（P=0．006），细胞早期凋亡率[（20．40±1．97）％比（2．53±0．24）％]及晚期凋亡[（16．56±1．65）％比（2．53±0．24）％]均提高（P=0．002，P=0．003），细胞周期G．期延长[（59．584-3．26）％比（47．33±4．35）％]（P=0．000），同时PDCD4蛋白（1．674-0．16比0．25±0．02）及mRNA（1．02±0．10比0．244-0．02）表达量显著提高（P=0．005，P=0．007）。结论降低miR-21表达能通过上调PDCD4表达抑制PC．3细胞增殖及细胞周期进展。