LASS2/TMSG-1基因沉默对人前列腺癌细胞生物学功能的影响及其机制

目的探讨LASS2/TMSG-1基因沉默对PC-3M-2B4细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法将实验分为3组:空白对照组(仅转染PBS的PC-3M-2B4细胞)、无关阴性对照siRNA组及LASS2/TMSG-1 siRNA转染组。首先针对LASS2/TMSG-1基因,设计并合成siRNA;在脂质体介导下瞬时转染人前列腺癌PC-3M-2B4细胞24 h后分别采用Western blot和RT-PCR技术检测细胞内LASS2/TMSG-1蛋白及ATP6L mRNA表达水平;使用BCECF AM H+敏感荧光探针检测转染24、36、48、96 h后3组细胞的细胞内H+浓度;用MTT法检测细胞增殖;划痕修复实验和Transwell体外侵袭实验分别检测PC-3M-2B4细胞的迁移和侵袭能力。结果转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,LASS2/TMSG-1 siRNA组LASS2/TMSG-1蛋白表达与对照组相比下降65%,ATP6L mRNA表达水平与对照组比较提高75%。通过BCECF AM荧光探针检测LASS2/TMSG-1 siRNA转染组细胞内H+浓度明显下降,且与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测显示,PC-3M-2B4细胞在转染24、48 h后,3组细胞生长速度无明显差异(P>0.05);转染72 h后LASS2/TMSG-1 siRNA转染组细胞生长速度明显升高,与空白对照组、无关阴性对照siRNA组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。划痕修复试验和Transwell体外侵袭实验显示,转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,能显著促进细胞迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论体外合成的siRNA能有效沉默LASS2/TMSG-1基因表达,同时上调V-ATPase质子泵中关键性亚基—ATP6L mRNA的表达水平,且基因沉默后其细胞内H+浓度下降,提示LASS2/TMSG-1基因可能与ATP6L相互作用、共同参与对细胞内pH值的影响,导致肿瘤细胞内外微环境的改变并影响肿瘤细胞的生物学行为,如增殖、迁移及侵袭能力。

新型溶瘤病毒M1激活内质网应激致前列腺癌细胞凋亡的机制

目的探讨新型溶瘤病毒M1对前列腺癌细胞的杀伤作用及其所引起凋亡的机理。方法通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同滴度(0、0.001、0.01、0.1、1、10 PFU/cell)M1病毒对前列腺癌细胞进行48 h处理后细胞的存活率,通过流式细胞术检测前列腺癌细胞凋亡的情况,通过蛋白标记(Western Blot)检测细胞内质网应激通路和凋亡通路的关键分子。结果与对照组(0 PFU/cell)相比,不同滴度(0.001、0.01、0.1、1、10 PFU/cell)溶瘤病毒M1能显著降低前列腺癌细胞存活率(P<0.05),且随着M1病毒剂量增加,前列腺癌细胞凋亡率显著上升(P<0.05)。蛋白标记(Western Blot)结果显示前列腺癌感染M1病毒后,内质网应激通路CHOP、Caspase 12、凋亡通路Cleaved-caspase 3蛋白显著上调(P<0.05)。结论新型溶瘤病毒M1可能通过引起前列腺癌细胞发生内质网应激而产生凋亡,最终杀伤前列腺癌细胞。