蔷薇红景天总黄酮提取物对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其活性部位筛选

目的考察蔷薇红景天总黄酮提取物(TFE)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其活性部位筛选。方法采用20μmol·L^(-1)Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤,经AB-8大孔吸附树脂色谱法分离蔷薇红景天TFE,得水及20%、40%、60%、80%、95%乙醇洗脱物(即TFE-0%、TFE-20%、TFE-40%、TFE-60%、TFE-80%和TFE-95%)。计算不同体积分数乙醇洗脱物浸膏得率(赋予0.3权重),紫外分光光度法检测不同体积分数乙醇洗脱物总黄酮含量(赋予0.7权重),综合评价不同体积分数乙醇洗脱物。MTT法检测不同体积分数乙醇洗脱物对损伤后PC12细胞活力的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量;酶联免疫测定(ELISA)法分别检测细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌水平。结果TFE-40%总黄酮浓度和浸膏得率的综合得分高于其他不同体积分数乙醇洗脱物。与空白组比较,模型组细胞间隙变大,数目减少,出现细胞碎片,突触明显减少,存活率和SOD水平明显降低(P<0.05),LDH水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,TFE-40%、TFE-60%洗脱物和盐酸多奈哌齐组细胞形态均有一定程度改善,数目增多,突触增加,细胞形态较完整;TFE-40%、TFE-60%、TFE-80%及TFE-95%组的细胞上清液中IL-6、TNF-α、COX-2和IL-1β的水平均明显降低(P<0.05)。结论蔷薇红景天TFE-40%洗脱物对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤具有较好保护作用,为最佳活性部位,其机制可能与拮抗Aβ_(25-35)的神经毒性和抑制细胞炎症的发生有关。

神经酸对H_(2)O_(2)诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用

以PC12细胞作为研究对象、H_(2)O_(2)为诱导剂,用200μmol/L H_(2)O_(2)处理PC12细胞24 h,建立细胞氧化损伤模型。通过检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平确定氧化应激程度,并对细胞凋亡和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平进行评估。采用蛋白免疫印迹和实时聚合酶链式反应检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bcl-2-associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、kelch样ECH关联蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)及其基因的表达水平。结果表明,使用200μmol/L H_(2)O_(2)处理PC12细胞24 h后,其存活率为60.12%;细胞毒性实验表明,神经酸能够显著降低H_(2)O_(2)诱导损伤细胞中LDH和MDA的含量,抑制ROS的过度产生,并增强SOD和GSH-Px活性,显著上调Bcl-2、Nrf2和HO-1的表达水平,下调Caspase-3、Bax和Keap1的表达水平。综上所述,神经酸对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化损伤具有保护作用,且与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

LncRNA MIAT靶向miR-204对氧糖剥夺/复氧诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探究氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12细胞损伤的分子调控机制,以期为临床上靶向治疗缺血性卒中提供新的思路。方法该研究于2021年6—12月进行,购买PC12细胞后对其进行OGD/R诱导,在诱导后的细胞中分别转染长链非编码RNA(LncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)过表达载体及微RNA-204模拟物(miR-204 mimic),以对应的载体阴性对照(pcDNA3.1-NC)或模拟物阴性对照(mimic-NC)作为阴性对照,以未转染PC12细胞作为空白对照。使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LncRNA MIAT与miR-204的表达;CCK-8与流式细胞术分别检测细胞活力与凋亡;Elisa试剂盒检测炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β,抗炎性因子IL-10的表达。RNA下拉检测MIAT在miR-204上的富集;通过starbase预测LncRNA MIAT与miR-204的结合位点,随后采取双萤光素酶报告实验验证LncRNA MIAT与miR-204的靶向结合。结果与空白对照组[1.011±0.113,1.001±0.002,1.473±0.224,(8.16±0.84)%,(96.75±6.73)ng/L,(46.28±2.84)ng/L,(39.45±1.45)ng/L]相比,OGD/R组细胞中LncRNA MIAT表达显著降低(0.362±0.085),miR-204表达显著升高(2.234±0.306),细胞活力显著降低0.806±0.115,凋亡率显著增加[(28.25±4.13)%];炎性因子IL-6[(525.19±15.62)ng/L]、IL-1β[(292.54±19.54)ng/L]的表达显著增加,抗炎性因子IL-10的表达(14.33±2.36)ng/L显著降低(均P<0.01)。与阴性对照组相比[2.198±0.324,0.811±0.117,(8.16±0.84)%,(96.75±6.73)ng/L,(46.28±2.84)ng/L,(39.45±1.45)ng/L],MIAT过表达后OGD/R细胞中miR-204表达显著降低1.373±0.268,细胞活力显著升高1.137±0.116,凋亡率显著降低(28.25±4.13)%;炎性因子IL-6(525.19±15.62)ng/L、IL-1β(292.54±19.54)ng/L的表达显著降低,抗炎性因子IL-10(14.33±2.36)ng/L的表达显著升高(均P<0.01)。与MIAT过表达的OGD/R细胞相比,MIAT过表达载体和miR-204模型物共转染的OGD/R细胞中miR-204表达显著升高,细胞活力显著降低,凋亡率显著升高;炎性因子IL-6、IL-1β的表达显著升高,抗炎性因子IL-10的表达显著降低(均P<0.01)。结论在OGD/R诱导的PC12细胞中,低表达LncRNA MIAT促进miR-204表达上调,最终促进细胞损伤。

石榴补血糖浆对东莨菪碱诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的:探讨石榴补血糖浆对东莨菪碱诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡保护作用,探究石榴补血糖浆体外改善认知功能障碍的保护作用机制。方法:将不同浓度的石榴补血糖浆冻干粉细胞培养液作用于PC12细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,根据细胞活性结果将后续实验分为空白对照组(NC)、模型组(SC)、石榴补血糖浆低、中、高剂量组(L、M、H:25、50、100μg/ml)、多奈哌齐对照组(D,10μmol/L);利用ELISA试剂盒检测细胞乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的水平,流式凋亡术检测活性氧自由基(ROS)及细胞凋亡情况;Westernblot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3等蛋白的表达情况。结果:石榴补血糖浆可显著增加PC12细胞的存活率,增加Ach、SOD的水平,降低ROS、MDA及AchE的水平,降低Bax/Bcl-2的比值和Cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白的表达。结论:石榴补血糖浆可通过Bax/Bcl-2信号通路抑制细胞凋亡,减轻氧化应激,影响细胞内神经递质的水平发挥神经保护作用。

去氢骆驼蓬碱诱发PC12细胞凋亡时对线粒体融合分裂的影响

目的探讨去氢骆驼蓬碱(HM)对PC12细胞线粒体功能损伤和线粒体融合分裂相关蛋白表达水平的影响。方法PC12细胞分为细胞对照组、HM组、线粒体分裂抑制剂Mdivi-1组、HM+Mdivi-1组、线粒体裂变激动剂WY14643组、HM+WY14643组,药物浓度均为1、10、25、50、100μmol·L^(-1),处理24 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,显微镜观察细胞形态;MitoTracker Red探针染色观察线粒体形态和纵横轴长度比值,JC-1染色检测线粒体膜电位,试剂盒检测ROS、ATP水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫荧光染色法和Western blotting检测胱天蛋白酶3(caspase-3)、促凋亡蛋白(Bax)、细胞色素C(cyt-c)和线粒体融合蛋白(Mfn2)、线粒体分裂蛋白(Drp-1)的表达水平;电穿孔法转染Drp1的干扰序列,筛选转染效果好的siRNA序列,协同药物干预,通过荧光法、MTT法、免疫印迹法检测相关指标。结果MTT结果显示,与细胞对照组比较,HM组、Mdivi-1组、HM+Mdivi-1组、WY14643组和HM+WY14643组存活率显著下降(P<0.01),EC 50分别为(11.48±2.32)、(12.35±1.67)、(14.88±2.07)、(39.14±3.25)、(20.09±1.97)μmol·L^(-1),依此后续实验选择20μmol·L^(-1)浓度的HM、Mdivi-1和HM+Mdivi-1作为构建PC12细胞模型的工作浓度;显微镜和MitoTracker Red探针染色观察发现,药物组细胞密度呈不同程度减少,树枝状突起减少变圆;线粒体形态趋向圆形,纵横轴长度比值分别为细胞对照组(3.33±0.72)、HM组(2.19±0.58)、Mdivi-1组(2.45±0.44)、HM+Mdivi-1组(1.43±0.62)。JC-1染色检测结果显示,与细胞对照组相比,HM组线粒体模电位显著下降(P<0.01);ROS显著升高(P<0.01)、ATP水平下降(P<0.01),LDH酶活性上升(P<0.01);免疫荧光染色法和Western blotting结果显示,与细胞对照组比较,HM组促凋亡蛋白Bax、细胞色素C、胱天蛋白酶3表达水平均显著上升(均P<0.01);与细胞对照组比较,HM组细胞线粒体分裂相关蛋白Drp1表达水平显著上升(P<0.01),而线粒体融合相关蛋白Mfn2的表达水平显著下降(P<0.01);特异性干扰Drp1并协同HM干预后,各干扰组较各单独药物干预组PC12细胞存活率下降,Drp1和Mfn2表达下调,均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论HM可通过ROS累积降低PC12细胞膜电位及ATP,进而激活caspase-3凋亡途径促使细胞凋亡,线粒体融合分裂可能参与HM造成PC12细胞的损伤,启动细胞线粒体途径凋亡。

大蒜素对MPP+所致的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的通过大蒜素(allicin)对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用,探究体外大蒜素对帕金森病(parkinson’s disease,PD)的保护效应与机制。方法以MPP+损伤PC12细胞建立体外的PD细胞模型,给予不同剂量大蒜素(0.01、0.1、1μg/mL)处理,MTT法测定其细胞增殖活性,用流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,用试剂盒检测抗氧化酶活性,包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的活性,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,蛋白质印迹法检测各组细胞的Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3及Cyt C的蛋白表达水平。结果与对照组相比,MPP+显著降低PC12细胞的增殖率,且呈剂量依赖性(P<0.05)。0.01、0.1和1μg/mL浓度的大蒜素对PC12细胞无毒性作用,而10μg/mL大蒜素显著降低细胞活性(P<0.05)。MPP+显著降低PC12细胞SOD的产生(P<0.05),显著增加细胞凋亡率(P<0.05)、MDA(P<0.05)和ROS的产生(P<0.05),并显著降低了Bcl-2和Cyt C的蛋白水平,同时增加了Bax和Cleaved-caspase 3的蛋白水平(P<0.05)。与MPP+诱导组比较,大蒜素剂量依赖性提高PC12细胞的增殖率(P<0.05),缓解MPP+诱导的细胞凋亡(P<0.05),降低ROS的产生以及MDA的表达(P<0.05),增加SOD的表达,并显著增加了Bcl-2和Cyt C的蛋白水平,同时降低了Bax和Cleaved-caspase 3的表达(P<0.05)。结论大蒜素能够减轻MPP+诱导的PC12细胞的氧化应激损伤,使细胞凋亡减少、存活率升高,从而说明大蒜素在帕金森病的预防和治疗中具有重要的神经保护作用。

活血荣络方含药血清对氧糖剥夺/复氧糖损伤PC12细胞线粒体自噬的影响及机制研究

目的基于氧糖剥夺/复氧糖(OGD/R)损伤的PC12细胞模型观察活血荣络方含药血清对线粒体自噬的影响及作用机制。方法采用OGD/R损伤PC12细胞模拟体外脑缺血再灌注损伤模型,将细胞分为正常对照组、模型组、空白血清组、活血荣络方含药血清组和雷帕霉素组,采用相应血清进行干预,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),免疫荧光染色检测线粒体-LC3B共定位、线粒体-PINK1-Parkin共定位,Western blot检测微管蛋白1轻链3B(LC3B)、p62、线粒体外膜转位酶20(TOMM20)、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、Parkin蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组细胞MMP明显降低(P<0.01),线粒体-LC3B共定位无明显变化,线粒体-PINK1-Parkin共定位增强,LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达明显升高,p62、TOMM20蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,活血荣络方含药血清组细胞MMP明显升高(P<0.01),线粒体-LC3B共定位和线粒体-PINK1-Parkin共定位增强,LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),p62、TOMM20蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论活血荣络方含药血清可减轻OGD/R诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与调控PINK1/Parkin通路,增加Parkin蛋白的线粒体转位,上调LC3B,下调p62、TOMM20蛋白表达,激活线粒体自噬相关。

葛根素对缺氧诱导PC12细胞神经损伤及JNK/MAPK信号通路的影响

目的探讨葛根素对缺氧诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞PC12细胞神经损伤及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法体外培养PC12细胞,50 ng/ml神经生长因子(NGF)诱导分化,对高分化的PC12细胞进行缺氧处理,再对缺氧诱导的PC12细胞进行不同浓度(0.1、1.0、10.0μmol/L)葛根素处理,将细胞分为对照组,缺氧组,0.1、1.0、10.0μmol/L葛根素组,葛根素+JNK通路激活剂茴香霉素(AC)组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测各组PC12细胞活性氧(ROS)水平;试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;Western印迹检测各组凋亡蛋白JNK/MAPK信号通路相关蛋白表达情况。结果低分化PC12细胞多呈椭圆形,聚集成小团簇状;高分化PC12细胞长出类似神经元样突起,培养一段时间后,细胞体积增大突起增多增长,形成网络。与对照组比较,缺氧组PC12细胞活力、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、MDA水平及蛋白p-JNK、caspase-3表达显著升高(P<0.05);与缺氧组比较,0.1、1.0、10.0μmol/L葛根素组PC12细胞活力、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、MDA水平及蛋白p-JNK、caspase-3表达显著降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);与10.0μmol/L葛根素处理组比较,葛根素+AC组细胞活力、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、MDA水平及蛋白p-JNK、caspase-3表达显著升高(P<0.05)。结论葛根素能够保护缺氧诱导的PC12细胞神经损伤,可能与抑制JNK/MAPK通路的激活有关。

加味孔圣枕中丹含药血清调控SIRT1/PGC-1α通路改善氧糖剥夺再灌注PC12细胞的线粒体功能

目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨加味孔圣枕中丹含药血清对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤PC12细胞的线粒体功能的改善作用及机制。方法采用大鼠PC12细胞构建体外OGD/R细胞模型。细胞分组:正常组(10%FBS)、模型组(10%FBS)、10%含药血清组、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清)、10%空白血清组(对照组)。采用CCK-8法检测细胞存活率,筛选合适的氧糖剥夺时间(2、4、6、8 h);MTT法检测细胞活性;线粒体压力测试(MST)法检测细胞氧气消耗速率(OCR);流式细胞术(Annexin V-PE/7-AAD双染法)检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测PC12细胞SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果与正常组比较,氧糖剥夺2、4、6、8 h后的PC12细胞活性均明显下降(P<0.05),选择氧糖剥夺6 h作为后续实验造模时间。与正常组比较,模型组的细胞活性明显下降(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显降低(P<0.05);细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,加味孔圣枕中丹10%、5%含药血清组的细胞活性明显提高(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显升高(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论加味孔圣枕中丹含药血清能改善OGD/R损伤PC12细胞的线粒体功能障碍,抑制神经元凋亡,促进神经元存活,其作用机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关。

丹参酮对培养PC12细胞损伤模型的保护作用

目的 :探讨丹参酮对PC12细胞缺血样损伤模型的保护作用。方法 :采用组织培养法 ,以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料 ,制备缺糖损伤、缺氧损伤、自由基损伤、咖啡因损伤、一氧化氮损伤及谷氨酸毒性损伤模型。结果 :形态学检查发现丹参酮对六种脑缺血样损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用 ,MTT染色和LDH活性测定提示丹参酮可显著提高损伤模型中PC12细胞的存活数 ,降低细胞损伤程度。其中以对缺氧损伤、咖啡因损伤的保护作用尤为显著。结论 :丹参酮对上述六种PC12细胞缺血损伤均有显著的保护作用 ,但其保护作用可能主要与抑制细胞损伤初期病变进程及咖啡因所致细胞钙超载有关。

沉香挥发油对H_2O_2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究沉香挥发油对H2O2所致鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆细胞系(PC12细胞)氧化损伤的保护作用。方法体外培养PC12细胞,采用H2O2制备细胞损伤模型,运用乳酸脱氢酶(LDH)和四唑盐(MTT)法检测细胞活力;应用荧光分光光度法测定细胞膜电位(MMP)和细胞内活性氧含量;应用试剂盒-酶标仪法测定细胞内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)的活力。结果不同浓度H2O2对PC12细胞生长均有明显的抑制作用,当浓度达到200μmol·L-1后,对细胞的抑制作用明显减缓;与正常对照组对比较,模型组的细胞存活率较低,ROS、MDA含量较高(P<0.01),但SOD和GSH-Px含量明显降低(P<0.01);与模型组比较,沉香挥发油各剂量组的ROS、MDA含量明显降低(P<0.01),而细胞存活率、SOD和GSH-Px酶活力则显著增强(P<0.01)。结论沉香挥发油在一定剂量范围内,对H2O2致PC12细胞氧化损伤具有保护作用。

当归芍药散对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察当归芍药散(Danggui Shaoyao San,DSS)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:制备含DSS脑脊液(CSF-DSS)与含DSS人工脑脊液(ACSF-DSS),应用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤,MTT法测定细胞活力和比色法测定细胞内过氧化氢酶(CAT)活性。结果:10μmol/L Aβ25-35可显著降低PC12细胞活力及CAT活性;5 mg/L ACSF-DSS和0.93 g/kg-0.5%、1.86 g/kg-1.0%CSF-DSS均可显著提高细胞活力与CAT活性。结论:DSS可能通过提高CAT活性而对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤起到保护作用。

热休克蛋白90在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中的作用

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)在硫化氢(H2S)保护PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)引起的化学性缺氧损伤中的作用。方法在PC12细胞建立H2S预处理对抗CoCl2诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡PC12细胞的形态学改变;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测Hsp90的表达。结果H2S的供体400μmol·L-1硫氢化钠(NaHS)可上调PC12细胞Hsp90的表达,NaHS作用3h,Hsp90表达达最高峰,作用24h时表达恢复到基础水平;NaHS也能明显地增加CoCl2引起的Hsp90的表达上调。NaHS预处理能对抗CoCl2引起的PC12细胞损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率。Hsp90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)可拮抗NaHS预处理对Hsp90表达的上调作用,并明显地减弱H2S诱导的适应性细胞保护作用。结论H2S能保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的低氧损伤作用,诱导Hsp90表达上调可能是其细胞保护机制之一。

肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞 ,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞进行分组 :正常对照组 ;损伤组 ;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠 ;肌肽保护组 ,同损伤组的制备 ,但予先加入肌肽。用MTT法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH活性 ,观察了细胞形态和蛋白电泳等。结果表明 :在保护组 ,MTT的测定结果高于损伤组 ,LDH低于损伤组 ,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异 ,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用。

银杏叶提取物对鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba leaves,EGB)对PC12 细胞损伤的保护作用。方法:采用细胞培养的方法,建立PC12细胞的鱼藤酮和1 甲基4 苯基吡啶离子(MPP+)损伤的模型。用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测胞外多巴胺(DA)水平。结果:同毒物组比较,EGB在0.35、0.70、1.40 mg/ml浓度下能减轻MPP+引起的PC12细胞损伤,在1.40 mg/ml浓度下能减轻鱼藤酮引起的损伤,明显提高细胞的存活率, 增高胞外DA水平:2 mmol/L MPP+和10μmol/L鱼藤酮作用下胞外DA分别为(6.875±0.201)和(5.321±0.167) ng/ml,而1.40 mg/ml EGB分别与2 mmol/L MPP+ 或10 μmol/L 鱼藤酮共同作用, DA 升高至( 7. 595±0. 139 ) ng/ml (P< 0. 05 )和(6.917±0.201) ng/ml(P<0.01)。结论:EGB对鱼藤酮和MPP+体外诱导PC12 细胞的损伤具有明显的保护作用。

多奈哌齐对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究多奈哌齐对Aβ25-35蛋白诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:采用细胞培养、MTT法和流式细胞仪技术,以β淀粉样蛋白(amyloidbetaprotein,Aβ)诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,观察不同剂量Aβ25-35蛋白对PC12细胞的影响以及多奈哌齐对PC12损伤的保护作用。结果:PC12细胞对于Aβ25-35造成的损伤和凋亡呈剂量依赖型,凋亡百分率增加(71.3%,90.1%),细胞增殖活性降低(t=13.89,P<0.001);提前给予多奈哌齐保护的PC12细胞凋亡百分率明显降低(52.0%),细胞增殖活性较前提高(t=12.77,P<0.001)。结论:多奈哌齐明显减少Aβ诱导的PC12细胞的损伤,提高细胞的存活率,减少细胞凋亡。

香椿子多酚提取物对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究香椿子多酚提取物(polyphenols from toona sinensis seeds,PTSS)对神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,实验分为对照组、PTSS组、6-OHDA组及PTSS+6-OHDA组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫组织化学染色法检测各组细胞Caspase-3、COX-2和TNF-α的表达变化。结果:PTSS可有效地降低6-OHDA引起的PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少细胞早期凋亡;降低Caspase-3、COX-2及TNF-α的表达。结论:PTSS对6-OHDA引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。

PI3K/Akt信号通路在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤的作用

目的探讨硫化氢(H2S)对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该通路在H2S神经保护中的作用。方法Western blot法检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞诱导Akt磷酸化的水平;CCK-8比色法检测细胞存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果应用不同浓度NaHS处理PC12细胞30 min,在50～400μmol.L-1浓度范围内,呈浓度依赖性地上调Akt磷酸化的水平,但随着NaHS浓度的增加,磷酸化Akt表达量逐渐下降;Ly294002明显抑制了NaHS对Akt磷酸化水平的上调作用。NaHS预处理可以保护PC12细胞对抗600μmol.L-1CoCl2诱导的损伤,使细胞存活率提高及细胞凋亡率降低。而在预处理前使用PI3K/Akt信号通路抑制剂Ly294002,则明显地减弱了H2S的神经细胞保护作用。结论 H2S可通过激活PI3K/Akt信号通路保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤。

金耳子实体不同提取物的抗氧化性和对PC12细胞氧化损伤的保护作用

采用不同极性的溶剂对金耳子实体进行连续提取分离,利用化学发光法和H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤保护模型,对提取得到的氯仿相、乙酸乙酯相、乙醇相等部位进行体外抗氧化活性和氧化损伤保护作用的测定。结果表明:氯仿相具有较强的抗氧化活性,三种提取部位对H_2O_2自由基的清除作用均高于对超氧自由基的清除作用;乙醇相对由H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用最强,且呈现明显的浓度依赖性。金耳子实体的氯仿相是其抗氧化活性的主要有效部位,乙醇相是保护PC12细胞氧化损伤的主要有效部位。

绿茶多酚主要成分对百草枯诱导PC12细胞损伤的保护作用

探讨绿茶多酚的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对百草枯(paraquat,PQ)诱导的PC12细胞损伤的影响及可能机制。建立PQ损伤的PC12细胞体外模型,经不同浓度EGCG预处理后,分别用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性,Hochest33258染色观察凋亡时细胞核形态的变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡比例,免疫细胞化学染色观察细胞色素c蛋白表达水平。1、5、10μmol/LEGCG对PQ诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用。与PQ组(54.6±3.5%)相比,1、5、10μmol/LEGCG预处理组细胞活力分别上升为66.5±2.7%、74.4±2.6%、83.7±3.2%。Ho-chest33258染色发现PQ组较多胞核出现固缩凝集(43.5±8.4%),而EGCG预处理组则较少(分别为30.7±7.9%、17.9±6.8%、11.2±4.4%)。FCM检测也提示EGCG预处理可降低细胞的凋亡百分率,正常组、PQ组、EGCG预处理组(1、5、10μmol/L)分别为4%、39.9%、32.6%、20.1%和10.4%。另外,免疫细胞化学染色发现EGCG预处理可下调PQ诱导的细胞色素c在胞浆中的过表达。以上结果提示EGCG可减轻PQ诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与下调细胞色素c在胞浆内的过表达有关。