黄颡鱼源铜绿假单胞菌PA-5的分离及其对寄主抗菌肽基因的影响

【目的】本文分离和鉴定了湖北省汉川市同旺养殖场患病黄颡鱼的病原菌种类并分析其影响寄主抗菌肽基因表达的特点,能够为该病症预防和治疗提供研究基础。【方法】以患病黄颡鱼肝脏作为样本,使用划线培养的技术,分离得到病原菌PA-5。对病原菌进行革兰氏染色和显微镜观察,其形态为长棒状,革兰氏染色为阴性。再进行VITEK-32全自动微生物分析鉴定仪操作,该病原菌对D-葡糖酸、丙二酸和葡萄糖等反应灵敏,对黏菌素、七叶苷和阿拉伯糖等反应迟钝。采用多重PCR技术对该菌16SrRNA和gyrB基因序列分析后发现。【结果】该菌与铜绿假单胞菌的特征序列相似,亲缘关系较为接近,综合后鉴定该病原菌为铜绿假单胞菌。同时以该病原菌为样本,分析其感染黄颡鱼后,对寄主抗菌肽基因PC1/PC2/PC3的表达影响。在黄颡鱼的腹腔中注射3.0×10^(6 )cfu/mL铜绿假单胞菌PA-5,侵染完成后0~96 h分别解剖获取黄颡鱼的肝脏,肾脏以及表皮组织。然后利用Trizol试剂盒操作获取黄颡鱼总RNA,反转录合成cDNA后应用实时荧光定量PCR技术分析黄颡鱼抗菌肽基因PC1/PC2/PC3基因表达变化特点。铜绿假单胞菌PA-5侵染黄颡鱼后,寄主肝脏组织中的抗菌肽基因PC1/PC2/PC3相对表达量24,36 h较高,与对照组比较显著(P<0.05);寄主肾脏组织中的抗菌肽基因PC1/PC2/PC3相对表达量24,36 h较高,与对照组比较显著(P<0.05);寄主表皮组织中的抗菌肽基因PC1/PC2/PC3相对表达量36,48 h较高,与对照组比较显著(P<0.05)。寄主肝脏组织,肾脏组织,表皮组织抗菌肽基因的表达均快速增加,但是肝脏组织和肾脏组织反应时间早于表皮组织。【结论】因此铜绿假单胞菌PA-5是湖北省汉川市同旺养殖场黄颡鱼的主要病原体,其感染黄颡鱼后,寄主抗菌肽基因PC1/PC2/PC3会积极响应,这些基因的大量表达有助于鱼体天然免疫应答,有助于抵抗病原微生物的感染。