DNA聚合酶β靶向siRNA对PC3细胞生物学行为的影响

目的:观察DNA聚合酶(pol)β靶向siRNA表达载体转染人前列腺癌PC3细胞对细胞生物学行为的影响。方法:采用已构建的DNA polβ靶向siRNA真核表达载体(pSUPERneoGFP-PS1、pSUPERneoGFP-PS2和pSU-PERneoGFP-CS),利用脂质体包裹转染PC3细胞,并设未转染组和转染空pSUPERneoGFP组。观察各组DNA polβmRNA和蛋白的表达及相应的细胞周期和自发突变率等细胞生物学行为的变化。结果:转染pSUPERneoGFP-PS1和pSUPERneoGFP-PS2可沉默PC3细胞DNA polβ蛋白的表达。5组间DNA polβmRNA表达的比较,差异有统计学意义(F=126.264,P<0.001);转染pSUPERneoGFP-PS1和pSUPERneoGFP-PS2组细胞较未转染、转染空pSU-PERneoGFP和转染pSUPERneoGFP-CS组显著降低(P<0.05)。5组间S期细胞比例和自发突变率比较,差异有统计学意义(F=72.501和6.860,P<0.05);转染pSUPERneoGFP-PS2组细胞S期比例及自发突变率较对照组显著降低,而转染pSUPERneoGFP-PS1细胞S期比例及自发突变率显著高于对照组(P<0.05)。结论:适宜的DNA polβ低水平表达是PC3细胞遗传稳定性维持所依赖的。

小分子化合物S1诱导PC3细胞凋亡的作用

目的：研究小分子化合物8-氧-8H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈的氨基或卤素取代衍生物（S1）对人雄性激素非依赖型前列腺癌PC3细胞的作用及机制。方法：常规培养PC3细胞，分为10．00、5．00、1．00、0．50、0．10、0．05和0．01μmol·L^-1 S1化合物组，同时设培养肿瘤细胞对照组和抗癌药物环磷酰胺（5．00 μmol·L^-1）对照组，采用MTT法检测PC3细胞增殖抑制率，流式细胞术检测诱导PC3细胞凋亡作用，Caspase3、8和9试剂盒检测细胞凋亡途径。结果：0．10～10．00μmol·L^-1 S1化合物组，PC3细胞生长抑制率明显高于环磷酰胺对照组（P〈O．01）；5．00和10．00μmol·L^-1 S1化合物组PC3细胞凋亡率明显高于培养肿瘤细胞对照组（P〈0．01）；10．00μmol·L^-1 S1化合物作用于PC3细胞后不同时间（1、2、4及6h）细胞Caspase 3和Caspase 9活性均显著高于培养肿瘤细胞对照组（P〈0．01），Caspase 8活性未见明显改变。结论：S1化合物能够通过诱导PC3细胞凋亡而导致细胞死亡，其作用机制是线粒体途径，进一步证实S1化合物作为肿瘤治疗药物的可行性。

右美托咪定对人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭及成瘤能力的影响及机制研究

目的:分析右美托咪(Dex)对人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭及成瘤能力的影响与机制。方法:人前列腺癌PC3细胞分为对照组、Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组,分别采用0、1、2、5μmol/L Dex处理。CCK8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Transwell检测各组细胞侵袭能力,裸鼠移植瘤检测成瘤能力,Western印迹检测各组细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达。结果:对照组、Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组PC3细胞A值随时间延长而升高(P<0.05),与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组PC3细胞A值随Dex剂量的增加而降低,凋亡率随Dex剂量的增加而升高(P<0.05);与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组细胞凋亡率与细胞穿膜数量随Dex剂量的升高而降低(P<0.05);对照组、Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组裸鼠移植瘤体积随时间延长而增大(P<0.05),与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组移植瘤体积随Dex剂量的增加而缩小(P<0.05)。与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)/细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)随剂量增加而降低(P<0.05)。结论:Dex能抑制人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭,促进凋亡,降低其成瘤能力,其机制与MAPK信号通路中ERK、JNK磷酸化活性下降有关。

KDR siRNA表达载体的构建和鉴定

目的构建针对血管内皮生长因子受体Ⅱ(VEGFR2),又称激酶功能区受体(KDR)的pSilencerTM3.1siRNA(smallinterferingRNA)表达载体,并在前列腺癌细胞PC3中观察其干扰效果.方法设计针对KDR基因编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ,HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1-H1neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定.以脂质体法将pSilencerTM3.1-H1neo空载体和3个(pSilencer3.1-KDR1,pSilencer3.1-KDR2和pSilencer3.1-KDR3)重组质粒分别导人PC3前列腺癌细胞系.72h后用RT-PCR和Westernblotting技术检测各实验组前列腺癌细胞内KDRmRNA及蛋白水平的表达情况.结果经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒中已插入了目的基因片断.转染KDR-siRNA的前列腺癌细胞,72h后,而以pSilencer3.1-KDR3的抑制KDRmRNA及蛋白表达效果最为有效,其抑制率约为55%.结论成功构建了针对KDR的RNA干扰表达载体pSilencer3.1-KDR1,pSilencer3.1-KDR2和pSilencer3.1-KDR3,pSilencer3.1-KDR3能有效抑制KDR在前列腺癌细胞中表达,为将其进一步应用于前列腺癌的治疗研究奠定了基础.