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题名蝮蛇毒蛋白C激活物的纯化与活性分析
被引量:1
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作者
章俊
肖小璞
李长清
王宗奎
林方昭
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机构
中国医学科学院北京协和医学院输血研究所
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出处
《中国输血杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期299-303,共5页
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基金
四川省科技支撑项目(2008SZ0013)
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文摘
目的探索从国产蝮蛇毒中分离纯化人血浆蛋白C激活物(PCA)的方法及其用于蛋白C的鉴定。方法以国产蝮蛇毒为原料,通过溶解、离心、透析,利用Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和Superdex G75凝胶过滤法分离纯化PCA组份。通过SDS-PAGE观察PCA组份的分子量,用发色底物法和凝固法分别测定活化PC(APC)的酰胺酶活性和抗凝活性。结果经两步层析,从蝮蛇粗蛇毒中纯化出PCA组份,SDS-PAGE图谱显示在分子量51 kD左右呈现1条蛋白带;经生物学活性鉴定:该组份在体外能迅速将PC激活为APC,APC的酰胺酶活性(A405)最高约为Protac(唯一商品化的PC激活剂产品)作用的2.8倍,抗凝活性(秒值)最高约为Protac作用的1.4倍,比活性2.20 IU/mg;不同浓度组份激活PC的酰胺酶活性和抗凝活性均随组份浓度的增大而升高,有明显的量效关系。结论采用离子交换层析和凝胶过滤法,可以从国产蝮蛇粗蛇毒中分离纯化出PCA组份,该组份具有较强的激活PC的能力,其生物活性与浓度呈正相关。
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关键词
蝮蛇毒
纯化
活性
蛋白C特异性激活剂
pca组份
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Keywords
Agkistrodon halys Palls
Purification
Activity
Protein C specific ity activator
pca component
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分类号
R392.33
[医药卫生—免疫学]
R456
[医药卫生—治疗学]
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