lncRNA PCAT19靶向miR-769-5p促进口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨lncRNA PCAT19对口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 收集45例口腔鳞癌患者癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测组织中PCAT19和miR-769-5p表达。体外培养HSC3细胞,转染PCAT19小干扰RNA或miR-769-5p模拟物、或共转染PCAT19小干扰RNA与miR-769-5p抑制剂后,CCK-8法和单克隆实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PCAT19和miR-769-5p的调控关系。结果 口腔鳞癌组织中PCAT19表达高于癌旁组织,miR-769-5p表达低于癌旁组织(P <0.05)。干扰PCAT19或过表达miR-769-5p后,HSC3细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高(P <0.05)。PCAT19靶向负调控miR-769-5p。下调miR-769-5p逆转了干扰PCAT19对HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 PCAT19在口腔鳞癌组织中表达上调,干扰PCAT19可能通过靶向上调miR-769-5p抑制口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭。

土木香内酯调控lncRNA PCAT19/miR-143-3p分子轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨土木香内酯(alantolactone,AL)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响及其对lncRNA PCAT19/miR-143-3p分子轴的调控作用。方法原代分离培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,不同浓度的AL处理瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别将si-NC、si-PCAT19、miR-NC、miR-143-3p mimics转染至瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别将pcDNA、pcDNA-PCAT19转染至瘢痕疙瘩成纤维细胞后加入AL培养24 h;CCK-8实验、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;qRT-PCR法检测瘢痕疙瘩组织、正常皮肤组织与瘢痕疙瘩成纤维细胞中PCAT19与miR-143-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测PCAT19与miR-143-3p的靶向关系;Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果AL能够以剂量依赖性的方式抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭,并可抑制PCAT19、MMP-2、MMP-9的表达,而促进miR-143-3p的表达;瘢痕疙瘩组织中PCAT19的表达量高于正常皮肤组织,而miR-143-3p的表达量低于正常皮肤组织;PCAT19可靶向调控miR-143-3p;转染si-PCAT19可抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;转染pcDNA-PCAT19可拮抗AL对细胞生物学行为的作用。结论土木香内酯可通过调控PCAT19/miR-143-3p分子轴而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

lncRNA PCAT19靶向miR-143-3p通过信号通路PI3K/Akt对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨lncRNA PCAT19对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法实验分为miR-con组、miR-143-3p组、si-con组、si-PCAT19组、pcDNA组、pcDNA-PCAT19组、si-PCAT19+anti-miR-con组、si-PCAT19+anti-miR-143-3p组、miR-con+WT-PCAT19组、miR-con+MUT-PCAT19组、miR-143-3p+WT-PCAT19组、miR-143-3p+MUT-PCAT19组。qRT-PCR检测miR-143-3p和PCAT19的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测PCAT19和miR-143-3p的靶向关系。结果相较于正常甲状腺细胞HT-ori3,甲状腺癌细胞BCPAP、TPC-1、SW1736中PCAT19的表达水平显著升高,miR-143-3p的表达水平显著降低(P<0.05)。敲低PCAT19和高表达miR-143-3p抑制甲状腺癌细胞BCPAP增殖,促进细胞凋亡;促进裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3蛋白的表达,抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1的表达。PCAT19靶向负调控miR-143-3p,miR-143-3p低表达可以部分逆转PCAT19低表达对BCPAP细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。敲低PCAT19抑制p-AKT和磷脂酰肌醇3-激酶的p1102催化亚基(PI3Kp110α)的表达,miR-143-3p低表达可逆转PCAT19低表达对p-AKT和PI3Kp110α的抑制作用。结论lncRNA PCAT19可抑制甲状腺癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与miR-143-3p及PI3K/AKT信号通路有关。

常春藤皂苷元通过调控lncRNA PCAT19/miR-4319对TPC-1甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨常春藤皂苷元对甲状腺癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法 用不同剂量常春藤皂苷元处理人甲状腺癌TPC-1细胞,si-NC、si-PCAT19分别转染至TPC-1细胞,pcDNA、pcDNA-PCAT19分别转染至TPC-1细胞后加入常春藤皂苷元处理细胞。MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖和周期,Transwell检测细胞迁移及侵袭,RT-qPCR法检测PCAT19、miR-4319表达,双荧光素酶报告实验检测PCAT19、miR-4319靶向关系,Western blot法检测Twist、Snail、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达。结果 常春藤皂苷元能剂量依赖性地降低细胞存活率、S期细胞比例、PCAT19 mRNA表达及Twist、Snail、N-cadherin蛋白表达(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),升高G_(0)/G_(1)期细胞比例、E-cadherin蛋白表达、miR-4319表达(P<0.05)。PCAT19可靶向调控miR-4319的表达。转染si-PCAT19可抑制TPC-1细胞增殖、迁移及侵袭,并可诱导细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期。转染pcDNA-PCAT19可通过抑制miR-4319表达而恢复常春藤皂苷元对TPC-1细胞生物学行为的作用。结论 常春藤皂苷元可通过调节PCAT19/miR-4319表达而诱导细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期,并抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

LncRNA PCAT19调控miR-137影响前列腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移及侵袭

目的探讨LncRNA PCAT19对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭的影响及其对mi R-137的调控作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测前列腺癌组织与癌旁组织中PCAT19、mi R-137的表达水平;体外培养人前列腺癌细胞DU145,分别将PCAT19小分子干扰RNA(si-PCAT19)及其阴性对照(si-NC)、si-PCAT19与mi R-137特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-PCAT19与mi R-137特异性寡核苷酸抑制剂(anti-mi R-137)转染至DU145细胞;采用qRT-PCR法检测DU145细胞中PCAT19、mi R-137的表达水平;采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期;Transwell小室检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测PCAT19、mi R-137的靶向关系;Western blot法检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,前列腺癌组织PCAT19的表达水平显著升高(P<0.05),mi R-137的表达水平显著降低(P<0.05);转染si-PCAT19可明显降低OD值、S期细胞比例及N-cadherin蛋白水平(P<0.05),提高G_(0)-G_(1)期细胞比例及E-cadherin蛋白水平(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实PCAT19可靶向结合mi R-137;干扰mi R-137表达可明显逆转干扰PCAT19对DU145细胞增殖、细胞周期、迁移及侵袭的作用。结论干扰PCAT19表达可通过上调mi R-137的表达从而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,并可诱导细胞周期阻滞于G_(0)-G_(1)期。