PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒载体在293T细胞中的过表达分析

构建PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体,同时分析其在293T细胞中的过表达。将结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的DNA当成分析模板,对结核分枝杆菌脂蛋白A(LprA)基因实施扩展处理。通过连接慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro的T4酶,塑造pCDH-LprA。采用PCR测序完成阳性克隆载体的检测;采用重组质粒以及协同质粒融合转染293T细胞包装病毒,获取慢病毒颗粒上清液,通过梯度稀释法完成病毒滴度的检测,采用Western blot对病毒在293T细胞基因的表达实施检测。成功塑造PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体。病毒侵染的293T细胞内PVRL-2的表达量提升了100倍,PPARa的表达量提升4. 5倍。蛋白结构预测说明Necitn-2是包含信号肽的跨膜蛋白。PPARa表达量提升导致结核分枝杆菌相关基因的活化,提升机体免疫力,信号肽和跨膜结构说明LprA蛋白会同膜中蛋白受体融合,驱动下游脂代谢的信号通路。Mtb细菌的LprA脂蛋白能够控制巨噬细胞、促进细胞增长和吞噬能力。通常情况下,慢性病毒可以进行细胞侵染的种类较多,且慢病毒可以将表达载体整合到宿主细胞的基因组上,实现在宿主细胞上连续的目的基因表达。慢性病毒具有的这种特点被广泛应用于细胞体外实验中。因此将含有毒性的Mtb因子当成治疗结核病的疫苗,为结核病的治疗提供了可靠的分析依据,将LprA当成预防以及治疗结核病的药物靶点。