过表达PCDH10基因对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨过表达原钙黏蛋白10(PCDH10)基因对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法:采用qRT-PCR检测不同结直肠癌细胞(SW620、HT29、LoVo、HCT116)及正常结肠上皮细胞NCM460中PCDH10 mRNA的表达水平。以含pcDNA-PCDH10过表达载体质粒的慢病毒感染结直肠癌SW620细胞(PCDH10组),以感染含空载质粒的慢病毒为阴性对照,未感染细胞为空白对照。采用qRT-PCR和Western blot法检测上述3组细胞的转染效率,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力,采用Western blot法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平。结果:PCDH10在结直肠癌细胞中的表达水平均低于正常结肠上皮细胞NCM460(P<0.05)。与二对照组相比,感染组SW620细胞中PCDH10 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖和迁移受抑,同时细胞中PCNA和MMP-2蛋白的表达水平降低(P<0.05)。结论:PCDH10基因在结直肠癌细胞中呈低表达,过表达PCDH10能够抑制结直肠癌SW620细胞增殖和迁移能力,该过程可能与抑制PCNA和MMP-2蛋白的表达有关。

PCDH10基因慢病毒载体构建及其在MDA-MB-231细胞中的表达

目的构建原钙黏蛋白10(PCDH10)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达PCDH10的MDA-MB-231细胞系。方法 2018年6—11月,根据PCDH10基因序列设计引物,应用PCR法扩增PCDH10全长片段,连接线性化的pLV-EF1α-GFP-Puro载体,获得pLV-PCDH10慢病毒重组质粒,测序正确后进行PCDH10基因慢病毒载体的包装及滴度测定。将重组质粒pLV-PCDH10转染MDA-MB-231细胞,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测MDA-MB-231细胞中PCDH10的表达情况。结果测序结果证实成功构建慢病毒表达载体pLV-PCDH10,病毒滴度为5×10^8TU/mL;转染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR和Western blot结果显示PCDH10的m RNA和蛋白表达较对照组高表达。结论成功构建pLV-PCDH10慢病毒载体并建立稳定过表达PCDH10的MDA-MB-231细胞系,为深入研究PCDH10基因在乳腺癌发生发展中的功能提供实验基础。

PCDH 10基因启动子区高甲基化在结肠癌阶段性发生及进展中的作用

目的:本研究通过检测结肠癌组织中PCDH 10基因启动子区Cp G岛甲基化状态,探讨PCDH 10基因启动子区异常甲基化在结肠癌的阶段性发生及进展中的作用。方法:采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSPCR)检测56例结肠癌及癌旁结肠组织、15例正常结肠组织中PCDH 10基因启动子区Cp G岛甲基化的状态,同时分析其与结肠癌临床特征之间的联系。结果:结肠癌、癌旁结肠组织及正常结肠组织中PCDH 10基因启动子区Cp G岛异常甲基化率分别为57.1%(32/56)、10.7%(6/56)和0%,三组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。PCDH 10基因启动子区Cp G岛甲基化状态与结肠癌的临床分期、结肠癌的分化程度以及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:PCDH 10基因启动子区异常甲基化是结肠癌组织区别于正常结肠组织的分子机制之一,可能在结肠癌的阶段性发生、发展中起着关键的作用。PCDH 10基因启动子区Cp G岛甲基化可能成为一种新的结肠癌肿瘤标志物。

结直肠癌组织中PCDH10、RASSF1A基因启动子甲基化状态

目的 检测结直肠癌（CRC）组织中原钙黏素蛋白10 （PCDH10）基因和Ras相关区域家族1A（RASSF1A）基因启动子区的甲基化状态,探讨其与CRC发生发展的关系.方法 选取2007至2010年在贵州医科大学附属医院行手术治疗的75例CRC患者的肿瘤组织,应用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测CRC组织及相应癌旁正常组织中PCDH10和RASSF1A基因启动子区的甲基化情况.采用x2检验分析PCDH10和RASSF1A甲基化的表达率及其与临床病理特征的关系.结果 PCDH10基因在CRC组织中的甲基化率为58.7％ （44/75）,明显高于癌旁组织的22.7％（17/75）（P＜0.01）;PCDH10甲基化与CRC患者的年龄、性别、病灶部位、Dukes分期、有无淋巴结转移等均无相关性（均P＞0.05）.RASSF1A基因在CRC组织中的甲基化率为64.6％ （42/65）,明显高于癌旁组织的15.4％ （10/65） （P ＜0.01）,RASSF1A甲基化与CRC患者的年龄、性别、病灶部位均无相关性（均P ＞0.05）,CRC Dukes高分期和淋巴结转移患者RASSF1A甲基化率高[92.9％ （26/28）比43.2％（16/37）,92.9％ （26/28）比43.2％ （16/37）,均P＜0.05].结论 CRC组织中PCDH10、RASSF1A基因呈高甲基化状态,可能是CRC发生机制之一.高分期的CRC具有更高的RASSF1A基因甲基化率,提示RASSF1A基因甲基化还可能与CRC的发展有关.

前列腺癌中PCDH10基因甲基化状态及意义

目的探讨前列腺癌组织中PCDH10基因甲基化状态及意义。方法选取2014年3月~2016年5月在我院行腹腔镜前列腺癌根治术或经尿道前列腺电切术患者标本121例,其中前列腺癌59例(前列腺癌组),良性前列腺增生62例(前列腺增生组),采用甲基化特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测甲基化情况。结果 PCDH10基因在22RV1、PC3、DU145和LNCaP四株前列腺癌细胞系中的启动子CpG岛均有不同程度的甲基化;前列腺癌组有66.10%出现PCDH10基因甲基化,明显高于前列腺增生组,差异比较有统计学意义(P<0.05);前列腺癌患者PCDH10基因甲基化与年龄、PSA和Jewett分期无关(P>0.05);Gleason评分8~10分前列腺癌患者PCDH10基因甲基化比例为76.32%,明显高于Gleason评分4~7分患者(P<0.05)。PCDH10基因甲基化患者术后的生化复发生存率显著减少(χ~2=4.116,P=0.043),总体生存率明显提高(χ~2=6.731,P=0.010)。结论 PCDH10基因甲基化可能参与了前列腺癌的发生发展,值得进一步研究。