胃癌中PCDH8基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的:本研究旨在明确胃癌中PCDH8表达水平以及PCDH8基因启动子甲基化情况,分析PCDH8的甲基化差异表达与胃癌临床病理因素的关系。方法:我们通过RT-PCR、Western blot方法检测了65例胃癌组织标本和30例正常胃黏膜标本中PCDH8 mRNA及蛋白的表达,然后分析了其在不同组织中的表达差异。并运用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测PCDH8基因启动子区在不同组织中的甲基化情况,并分析其基因启动子区甲基化情况与胃癌临床病理因素的关系。结果:PCDH8 mRNA、蛋白在正常胃组织中为阳性表达,而在胃癌组织中则表达缺失或下调,其差异有统计学意义(P<0.05)。PCDH8甲基化情况在胃癌组织(55.38%,36/65)与正常组织(0%,0/65)、癌旁组织(41.54%,27/65)与正常组织间存在显著差异(P<0.05)。65例胃癌患者中,其甲基化情况与胃癌患者性别、年龄、肿瘤大小、远处转移及TNM分期均无关(P>0.05)。多因素回归分析结果表明,淋巴结转移为PCDH8基因启动子区甲基化的独立因素(P=0.026,95%CI 1.12～86.84)。结论:PCDH8甲基化及表达情况与胃癌患者肿瘤分化程度及淋巴结转移有关。PCDH8在调节胃癌的发生和转移过程中具有重要作用,它有可能作为胃癌的抑癌基因而发挥作用,并作为标记物对胃癌的诊断、预后判定及治疗提供研究方向。

胃癌组织中PCDH8基因甲基化及Dnmt1表达的关系

目的探讨PCDH8(protocadherin 8)基因在人胃癌组织中的甲基化状态及其与甲基转移酶1(Dnmt1)表达之间的关系,分析其与胃癌发生、发展的关系。方法取60例手术切除的胃癌组织及其相应癌旁正常胃黏膜组织(距癌组织5 cm以上),以甲基化特异性聚合酶链式反应(methylationspecific PCR,MSP)检测60例胃癌组织及其癌旁正常胃黏膜组织中PCDH8基因启动子区甲基化的状态;以免疫组化SP法分别检测PCDH8基因蛋白及Dnmt1蛋白的表达水平。结果胃癌组织中PCDH8甲基化率为55.0%(33/60),癌旁正常胃黏膜组织中PCDH8的甲基化率为3.3%(2/60),两者比较差异有统计学意义(χ2=38.76,P<0.001),PCDH8甲基化的发生率与患者年龄、性别及TNM分期等差异均无统计学意义(P均>0.05),而与有无淋巴结转移的差异有统计学意义(χ2=17.47,P<0.001)。PCDH8蛋白在癌旁正常胃黏膜组织中的表达(90.0%)明显高于胃癌组织(11.7%)(χ2=73.65,P<0.001),Dnmt1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(73.3%)明显高于癌旁正常胃黏膜组织的表达率(5.0%)(χ2=58.79,P<0.001)。胃癌组织中PCDH8蛋白与Dnmt1蛋白的表达呈负相关(r=-0.544,P<0.001)。结论PCDH8基因甲基化及Dnmt1的高表达可能参与了胃癌的发生和发展。

肺癌A549细胞中PCDH8表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨原钙黏蛋白8(PCDH8)表达对肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移和AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的影响。方法体外培养A549细胞,采用脂质体介导质粒pcDNA3.1-PCDH8(PCDH8转染组)与pcDNA3.1空质粒(阴性对照组)转染A549细胞,另设不做任何处理的空白对照组,采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting验证转染效率。采用MTT法、克隆形成实验、Transwell法和划痕实验检测细胞增殖、集落形成、侵袭和迁移能力。Western blotting检测各组中AKT、p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、β-catenin、GSK3β、p-GSK-3β(Ser9)蛋白的表达。结果A549细胞中PCDH8表达水平为0.34±0.10,显著低于BEAS-2B细胞的0.98±0.08;PCDH8转染组PCDH8基因和蛋白相对表达量为2.26±0.31和1.06±0.17,明显高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。24、48、72、96 h PCDH8转染组细胞增殖率分别为(62.07±4.25)%、(106.90±5.14)%、(159.87±7.46)%、(213.79±8.28)%,明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCDH8转染组A549细胞集落形成数目为(255±38)个、24 h愈合率为(31.89±7.62)%、24 h侵袭细胞数为(217±39)个,均低于空白对照组的和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PCDH8转染组p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、β-catenin、p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达量明显低于空白对照组和阴性对照组。PCDH8与AKT具有相同的细胞定位。结论PCDH8在肺癌中低表达,上调PCDH8表达可通过抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的激活进而降低肺癌细胞增殖、成瘤、迁移、侵袭能力。

PCDH8基因甲基化在食管癌诊断中的价值及其与患者临床特征的关系

目的探讨食管癌(EC)组织中PCDH8基因启动子的甲基化状态与蛋白表达情况及其与患者临床特征的关系。方法选取74例EC患者的EC组织标本及其相应的癌旁正常组织标本。采用免疫组织化学染色法检测PCDH8蛋白的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测PCDH8基因启动子的甲基化水平,并分析其与患者临床特征的关系。结果癌旁组织中可见大量细胞的细胞膜被染成黄色。EC组织中的PCDH8蛋白的高表达率为28.4%(21/74),明显低于癌旁正常组织的64.9%(48/74),差异有统计学意义(P﹤0.01)。EC组织中PCDH8基因启动子甲基化率为87.8%(65/74),明显高于癌旁正常组织的16.2%(12/74),差异有统计学意义(P﹤0.01)。PCDH8蛋白的高表达情况与EC患者的年龄、性别、肿瘤直径、TNM分期、WHO组织学分级和淋巴结转移情况均无关(P﹥0.05)。PCDH8基因启动子甲基化率与EC患者的年龄、性别、肿瘤直径、WHO组织学分级、淋巴结转移均无关(P﹥0.05),但是与EC患者的TNM分期有关(P﹤0.05)。结论 PCDH8基因启动子甲基化与食管癌的发生、发展密切相关,可作为诊断和治疗食管癌的潜在靶点。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胰腺癌细胞株Capan-2增殖及其PCDH8基因表达的影响

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)对胰腺癌细胞株增殖的影响以及对其原钙黏附素(protocadherin 8,PCDH8)基因表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理胰腺癌Capan-2细胞。阴性对照组不加药,根据5-Aza-CdR处理的剂量分为:0.08μmol/L组、0.40μmol/L组、2.00μmol/L组、10μmol/L组、50μmol/L组,检测细胞的生长情况;采用RT-PCR和Western Blot检测各组胰腺癌细胞PCDH8基因和蛋白的表达。结果5-Aza-CdR对胰腺癌细胞具有明显的抑制作用,且随着浓度的增加,抑制率逐渐增强(P<0.01);但是随着时间的增加,抑制率逐渐下降(P<0.01)。5-Aza-CdR和吉西他滨联用对胰腺癌细胞的抑制作用和诱导凋亡作用最强(P<0.05,P<0.01)。5-Aza-CdR能显著增加胰腺癌细胞PCDH8基因和PCDH8蛋白的表达水平,且随着浓度的升高,增加作用越明显(P<0.01)。结论5-Aza-CdR能够抑制胰腺癌细胞的增殖,增加PCDH8基因的表达,与吉西他滨联合后抑制作用更强。

前列腺癌患者血清PCDH8基因甲基化率的实验研究

目的:通过测定前列腺癌及前列腺增生患者血清中PCDH8基因启动子甲基化水平,分析两类病人的临床病理资料,探讨前列腺癌病人血清中PCDH8基因启动子甲基化水平是否具有肿瘤标记物的价值。方法:收集30例前列腺癌患者和30例前列腺增生患者的血清样本作为研究对象,提取60例血清样本中的基因组DNA,并使用PCR法扩增出PCDH8基因并进行修饰,测定血清样本中PCDH8基因甲基化状态,对所有前列腺癌患者的临床资料进行统计学分析。结果:30例前列腺癌患者血清样本中有12例检出PCDH8基因启动子甲基化,30例前列腺增生患者均未检出PCDH8基因启动子甲基化。将检测结果阳性和阴性两类前列腺癌患者的临床资料进行统计学分析。分析结果显示,PCDH8基因启动子甲基化水平与Gleason评分有统计学意义,而与患者年龄、病理分期、PSA值、以及淋巴转移等指标,并无明显统计学差异。结论:30例前列腺癌患者血清中有12例出现PCDH8基因甲基化,而30例前列腺增生患者血清中均未出现PCDH8基因甲基化,并且PCDH8基因出现甲基化的比率与前列腺癌患者的Gleason评分呈正相关性,而与其他临床系数如患者年龄、前列腺大小、PSA值、临床分期等无明显相关性。血液中PCDH8基因启动子甲基化水平的检测具有很高的特异性和较低的敏感性,现阶段不适合作为肿瘤标记物,但是对于前列腺癌的早期发现和前列腺癌病人预后的评估有一定帮助作用。

甲状腺肿瘤患者PCDH8基因启动子的甲基化状态及其临床意义

目的探讨甲状腺肿瘤患者PCDH8基因启动子的甲基化状态及其临床意义。方法选取48例甲状腺乳头状癌(PTC)、43例甲状腺滤泡状腺瘤、44例结节性甲状腺肿和45例正常甲状腺组织标本。采用焦磷酸测序法检测各组标本PCDH8基因的启动子甲基化状态,采用免疫组化检测各组标本的PCDH8蛋白表达情况,应用McNemar检验焦磷酸测序和免疫组化检测结果的一致性,并分析PCDH8基因启动子甲基化与PTC临床病理特征的关系。结果PTC的PCDH8基因启动子甲基化率高于正常甲状腺组织,PCDH8基因蛋白表达阳性率低于正常甲状腺组织(均P<0.05),而甲状腺滤泡状腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织的上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。PCDH8基因发生甲基化与基因蛋白表达缺失在PTC的重合率为89.18%,两者的一致性检验结果差异无统计学意义(P>0.05)。PTC患者的PCDH8基因启动子甲基化与淋巴结转移有相关性(P<0.05),而与其年龄、性别、促甲状腺激素水平、抗甲状腺球蛋白抗体水平及肿瘤部位无明显关系(均P>0.05)。结论PTC中PCDH8基因启动子甲基化率高,PCDH8蛋白表达水平低,PCDH8基因甲基化与蛋白表达调控具有一定的关联性,且PTC患者的PCDH8基因启动子甲基化与淋巴结转移有相关性。

PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞生物学效应的影响

目的探讨PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞株CNE-1生物学行为的影响。方法采用脂质体介导质粒pcDNA3.1-PCDH8(实验组)与质粒pcDNA3.1(对照组)转染至鼻咽癌细胞株CNE-1,RT-PCR、Western blot检测转染后CNE-1细胞的PCDH8 mRNA及蛋白表达;通过CCK-8细胞生长曲线、流式细胞技术、Transwell侵袭实验及CCK-8细胞药物敏感实验,进一步对转染PCDH8基因质粒的细胞株CNE-1的增殖能力、生长周期、细胞侵袭能力及对化疗药物的敏感性进行了分析,并与转染对照质粒的细胞株进行比较。结果 RT-PCR、Western blot检测结果表明转染质粒pcDNA3.1-PCDH8的实验组细胞株中PCDH8 mRNA及蛋白成功表达并明显高于转染质粒pcDNA3.1的对照组细胞株。CCK-8细胞生长曲线结果表明实验组细胞株的生长速度明显低于对照组。流式细胞仪检测结果表明实验组细胞株G0/G1期较对照组增加,S期细胞较对照组减少;Transwell侵袭实验结果表明实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组;CCK-8细胞药物敏感性实验结果表明PCDH8基因的高表达能显著提高鼻咽癌细胞株CNE-1对顺铂化疗药物的敏感性。结论 PCDH8基因的表达能降低鼻咽癌细胞的增殖、侵袭能力,延缓细胞分裂周期,提高对顺铂化疗药物的敏感性。

膀胱癌组织中PCDH8基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的研究膀胱癌组织中抑癌基因PCDH8(原钙黏蛋白8,protocadherin 8)启动子区CPG岛甲基化状态及临床意义。方法收集79例原发性膀胱移行细胞癌组织和20例正常膀胱黏膜组织,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测PCDH8基因启动子区CPG岛的甲基化状态,并结合临床病理资料进行分析。结果 20例正常膀胱黏膜组织中均未检测到PCDH8基因甲基化,79例膀胱癌组织中44例检测到PCDH8基因启动子区甲基化,甲基化率为55.7%,两组相比差异有统计学意义(P<0.01);膀胱癌组织中PCDH8基因CPG岛启动子区甲基化与患者的年龄、性别、肿瘤数目无关(P>0.05);直径小于或等于3cm的肿瘤组织中PCDH8基因甲基化率为43.5%,>3cm的肿瘤组织中PCDH8基因甲基化率为72.7%,差异有统计学意义(P<0.05);乳头状肿瘤中PCDH8基因的甲基化率为48.2%,非乳头状肿瘤中PCDH8基因的甲基化率为73.9%,差异有统计学意义(P<0.05);复发性肿瘤中PCDH8基因甲基化率为71.1%,原发性肿瘤中PCDH8基因的甲基化率为35.3%,差异有统计学意义;G1~G2膀胱癌PCDH8基因的甲基化率为43.4%,G3膀胱癌的甲基化率为80.8%,差异有统计学意义(P<0.05);PCDH8基因在Ta^T1期肿瘤的PCDH8基因甲基化率为43.7%,T2~T4期肿瘤中的甲基化率为74.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑癌基因PCDH8启动子区CPG岛甲基化与膀胱移行细胞癌的发生、发展相关,PCDH8基因启动子区CPG岛的甲基化有可能成为膀胱癌早期诊断、监测复发和判断预后的分子标志物。

PCDH8基因启动子在前列腺癌组织及细胞中的甲基化测定及其临床意义

目的:检测PCDH8基因启动子在前列腺癌细胞PC3、DU145、LNCap及组织中的甲基化状态,并探讨其临床意义。方法:应用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测42例前列腺癌组织,35例前列腺增生组织,前列腺癌细胞PC3、DU145、LNCap,人正常前列腺细胞RWPE-1、WPMY-1中PCDH8基因启动子甲基化情况,并分析临床资料。结果:甲基化存在于19例(19/42)前列腺癌患者组织以及全部3株前列腺癌细胞(3/3)中,而不存在于35例前列腺增生组织及2株正常前列腺细胞中(0/2);并且甲基化与较高的Gleason评分,较高的术前PSA以及较高的病理分期相关。结论:前列腺癌中常出现PCDH8基因启动子甲基化,且与预后不良及更强的转移能力相关,有可能成为潜在的生物标记物。测定肿瘤组织中的PCDH8基因启动子甲基化状态可以有助于确定需要积极临床干预的患者来改善预后。

甲状腺癌PCDH8基因的转录调控及临床意义

目的研究甲状腺乳头状癌、甲状腺滤泡状腺瘤、结节性甲状腺肿和正常甲状腺组织中原钙黏蛋白8(PCDH8)基因转录调控表达水平,分析PCDH8基因表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关联性。方法选择该院2013~2015年的甲状腺组织标本118例,根据病理结果分为甲状腺乳头状癌组36例、甲状腺滤泡状腺瘤组30例、结节性甲状腺肿组31例和正常甲状腺组织组21例。采用荧光定量PCR法检测各组标本PCDH8基因的表达情况,分析PCDH8基因的表达情况与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关联性。结果荧光定量PCR的结果显示,正常甲状腺组织组的PCDH8阴性表达率为28.57%,低于甲状腺乳头状癌组(63.89%)和甲状腺滤泡状腺瘤组(60.00%),差异有统计学意义(P<0.05);但与结节性甲状腺肿组(54.84%)比较差异无统计学意义(P>0.05)。PCDH8基因mRNA转录表达情况与肿瘤大小有显著关联(P<0.05)。结论甲状腺乳头状癌中PCDH8基因表达下调,并与肿瘤大小存在关联,在甲状腺乳头状癌的诊断与治疗中有可能成为一种有潜在价值的生物学肿瘤标志物。