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新基因PCIA1真核表达载体的构建及HeLa细胞稳定转染株的建立与鉴定* 被引量:1
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作者 王瑞 邓洪新 +2 位作者 王国庆 严飞 彭枫 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期335-338,共4页
目的构建人的新基因(PCIA1)的真核表达载体,并将其载体稳定转染到HeLa细胞株中。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增PCIA1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-PCI... 目的构建人的新基因(PCIA1)的真核表达载体,并将其载体稳定转染到HeLa细胞株中。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增PCIA1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-PCIA1,重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将该表达载体导入到HeLa细胞中,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,用RT-PCR和Westernblot检测PCIA1基因在HeLa细胞中的表达。结果经RT-PCR及Westernblot检测,证实真核表达重组质粒pcDNA-PCIA1构建成功,PCIA1基因已经稳定转染到了HeLa细胞中并表达PCIA1蛋白。结论成功建立了人新基因PCIA1的稳定转染细胞株,为进一步研究PCIA1的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 pcia1 载体构建 转染 鉴定 HELA细胞
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抗人PCIA1单克隆抗体的制备及其生物特征的研究
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作者 阚兵 严飞 +3 位作者 杨金亮 邓洪新 王瑞 魏于全 《华西医学》 CAS 2006年第1期84-85,共2页
目的:筛选制备抗人PCIA1的单克隆抗体,鉴定其生物学特征。方法:采用原核表达并纯化的PCIA1蛋白作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人PCIA1单克隆抗体的杂交瘤,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其反应性。结果:获得... 目的:筛选制备抗人PCIA1的单克隆抗体,鉴定其生物学特征。方法:采用原核表达并纯化的PCIA1蛋白作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人PCIA1单克隆抗体的杂交瘤,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其反应性。结果:获得了32株分泌抗人PCIA1的McAb杂交瘤细胞,McAb-1A4的染色体呈双亲特点,该McAb与多种人肿瘤细胞株和正常肝细胞株有反应。结论:McAb-1A4可用于PCIA1的细胞内定位研究。 展开更多
关键词 PEIA1 单克隆抗体 杂交瘤 生物特征 免疫化学方法
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应用细菌双杂交系统技术寻找与人PCIA1基因相互作用的基因 被引量:1
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作者 李祖茂 文艳君 +9 位作者 来松涛 倪睿 邓洪新 阚兵 李炯 刘钧 敬小梅 程平 石薇 贾永喜 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期279-283,共5页
目的探寻与新近发现的人类交叉免疫反应抗原(homo sapiens cross-immune reaction antigen)基因PCIA1相互作用的基因,为其功能研究提供线索。方法应用Stratagene公司的细菌双杂交系统和人胚肾cDNA文库,构建诱饵质粒pBT-PCIA1,与靶质粒... 目的探寻与新近发现的人类交叉免疫反应抗原(homo sapiens cross-immune reaction antigen)基因PCIA1相互作用的基因,为其功能研究提供线索。方法应用Stratagene公司的细菌双杂交系统和人胚肾cDNA文库,构建诱饵质粒pBT-PCIA1,与靶质粒pTRG-cDNA文库大规模地共转化报告菌株,筛选并分离具有相互作用的pTRG-cDNA阳性克隆,经DNA序列分析和生物信息学确定靶基因。结果发现7种靶蛋白基因,其中3种基因功能尚不清楚,其余4种具有重要生理功能,突变或表达异常都会导致严重疾病;α-辅肌动蛋白-4(actinin,alpha4,ACTN4)、鞘脂激活蛋白原(prosaposin,PSAP)或真核翻译起始因子(eukary-otic translation initiation factor 3,subunit 10 theta,EIF3S10)过表达都会促进肿瘤发生和演进。结论细菌双杂交系统技术探测蛋白质之间的相互作用,是一种提供新基因功能研究信息的有效方法;PCIA1基因表达与肿瘤形成、侵袭和转移密切相关。 展开更多
关键词 双杂交系统技术 α-辅肌动蛋白-4基因 EIF3S10基因 鞘脂激活蛋白原基因 pcia1基因
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