高良姜素促进胰腺癌PCNA-1细胞凋亡和自噬并抑制移植瘤生长

【目的】探讨高良姜素对胰腺癌PCNA-1细胞的抑制作用及机制。【方法】(1)体外研究:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞相对存活率,确定高良姜素浓度与处理时间。先设置空白对照组,阳性药物对照组(40μmol·L^(-1)顺铂),高良姜素低、中、高剂量组(20、40、80μmol·L^(-1))。再设置空白对照组、高良姜素高剂量组、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)siRNA组(转染MAPK siRNA)、高良姜素+MAPK siRNA组(转染MAPK siRNA+80μmol·L^(-1)高良姜素)。流式细胞术测定细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)、Bcl-2相关的X蛋白(Bax)、微管相关蛋白l轻链3(LC3)Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、液泡分选蛋白34(Vps34)、Beclin1,自噬相关蛋白质Atg7、Atg5,p-MAPK/MAPK的表达水平。(2)体内研究:裸鼠皮下注射PCNA-1细胞构建移植瘤模型,测量移植瘤体积和质量,蛋白免疫印迹法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、P62、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5的表达。【结果】后续细胞实验选择20、40、80μmol·L^(-1)高良姜素处理PCNA-1细胞24 h。与空白对照组比较,高良姜素高剂量组PCNA-1细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Caspase-3、Caspase-9、Bax、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Vps34、Beclin1、Atg7、Atg5、p-MAPK/MAPK蛋白表达明显上调(P<0.01),Bcl-2和P62蛋白表达水平明显下调(P<0.01),而抑制MAPK后可逆转上述现象。高良姜素可减小裸鼠胰腺癌PCNA-1细胞移植瘤体积和质量,各蛋白表达情况同细胞实验结果相一致。【结论】高良姜素可通过活化MAPK促进胰腺癌PCNA-1细胞的凋亡和自噬,并抑制移植瘤生长。