PCR-ELISA检测疟原虫DNA的研究

目的：介绍一种诊断疟疾的新方法ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ。方法：根据业已报道的疟原虫ＳＳＵｒ－ＲＮＡ基因保守序列，设计并合成一对通用于恶性疟原虫和间日疟原虫的引物，其中一引物的５’端加以生物素标记。经ＰＣＲ扩增后，携带有生物素的扩增产物与先期包被于ＥＬＩＳＡ板上的亲和素结合，再经与恶性疟原虫、间日疟原虫特异、荧光素标记的寡核苷酸探针分别杂交，底物显色等步骤，使ＰＣＲ产物得以半定量地检出。结果：对于恶性疟原虫和间日疟原虫，本法检出最低原虫密度阈值分别为４和１０个原虫／μｌ血（取血２０μｌ），本法检测两种疟原虫未发现交叉反应。结论：本试验具有较高的敏感度和特异性。

荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学检测的探讨

目的探讨HBV感染者乙肝免疫学检测与HBV-DNA的关系,为合理治疗乙肝患者提供较准确的依据。方法用ELISA方法检测HBV感染者乙肝免疫学检测,用PCR方法检测HBV-DNA,并对结果进行分析。结果HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组(大三阳组)患者血清HBV-DNA检出率97.06%(66/68),平均拷贝数为(2.15E+07)mL;HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组(小三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为62.64%(57/91),平均拷贝数为(2.47E+04)mL;HBsAg(+)HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率为52.94%(18/34),平均拷贝数为(6.39E+04)mL。结论HBsAg和HBeAg阳性与HBV-DNA复制密切相关。乙肝免疫学检测和HBV-DNA检测将成为指导乙型肝炎防治的重要手段。

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的:分析实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用情况。方法:选择2018年9月—2020年9月收治的乙型肝炎患者22例,将患者分成ELISA组和PCR组,每组患者均为11人,其中ELISA组主要接受COBASAmplicor检测,PCR组接受Light Cycler仪器检测,对比两组患者的可测定范围、重复性、临床标本检测结果。结果:Light Cycler仪器的实验结果的灵敏度要低于COBAS Amplicor。检测结果表明,实时荧光定量PCR技术具有费用低、省时等特点,PCR-ELISA技术具有价格昂贵、重复性和灵敏度高等特点。

疟原虫DNA模板制备用于PCR诊断方法的研究

为确立一种快速、敏感、特异的疟原虫检测方法，根据红内期疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ基因序列，设计合成引物３条，采用微量全血和滤纸干血滴标本快速制备疟原虫ＤＮＡ模板的９种方法，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）并比较。结果显示有５种方法的实验效果最佳，其中，全血ＰＣＲ仪预热及滤纸干血滴Ｃｈｅｌｅｘ煮沸两法操作简单、所需试剂较少。采用该两法对深圳地区２０２份和湖北地区１６份镜检阳性的全血和深圳地区１２９份滤纸干血滴标本进行检测，结果与镜检的符合率分别为９８．５％和９９．２％。表明本研究筛选出的两种方法制备ＤＮＡ模板的ＰＣＲ检测体系，适用于临床快速准确诊断间日疟、恶性疟或两者混合感染，尤其适用于流行病学调查，值得推广。

镜检和疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法及巢式PCR法在疟疾诊断中的价值

目的探究镜检、疟原虫抗原快速检测(RDT)胶体金法、巢式PCR法在疟疾诊断中的价值。方法选取2019年2月至2020年2月本中心收治的疑似疟疾患者50例作为研究对象,所有患者均接受镜检、RDT胶体金法、巢式PCR法,以实验室检测结合临床特征结果为金标准,比较3种方式检测结果。结果实验室检测结合临床特征结果显示,50例疑似疟疾患者中,阳性36例,阴性14例。经镜检法检出疟疾28例,检出率为46.67%;经RDT胶体金法检出疟疾35例,检出率为58.33%;经巢式PCR法检出疟疾30例,检出率为50.00%;RDT胶体金法准确度及灵敏度均高于镜检法、巢式PCR法,差异有统计学意义(P<0.05);3种诊断方法特异度、阳性预测值、阴性预测值比较差异无统计学意义。结论在疟疾临床诊断中,RDT胶体金法具有较高的灵敏度及检出率,且与镜检、巢式PCR法联合诊断,可进一步提高检出率,为临床治疗提供依据。