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应用PCR-ELISA技术检测转基因产品的研究 被引量:16
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作者 刘光明 徐庆研 +3 位作者 龙敏南 宋思扬 周俊 苏文金 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期101-105,共5页
建立并优化了转基因大豆与玉米的DNA提取方法,针对CaMV35S启动子和T-NOS终止子的序列特点设计特异性引物与探针,应用PCR-ELISA检测技术,建立了转基因大豆与玉米中常用外源基因的快速检测体系,并应用于进出境产品的转基因检测实际工作中... 建立并优化了转基因大豆与玉米的DNA提取方法,针对CaMV35S启动子和T-NOS终止子的序列特点设计特异性引物与探针,应用PCR-ELISA检测技术,建立了转基因大豆与玉米中常用外源基因的快速检测体系,并应用于进出境产品的转基因检测实际工作中。结果表明,建立的PCR-ELISA法具有操作简便、灵敏特异、结果准确的优点,可对转基因大豆、玉米及其它转基因产品进行定性和定量检测。 展开更多
关键词 转基因产品 检测技术 pcr-elisa 大豆 玉米
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痰标本mecA和Sa442基因的定量PCR检测结果与MRSA培养结果的关联 被引量:2
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作者 蔡骁垚 林堃银 +3 位作者 孙涛 张立 闫佩毅 金姝 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期350-354,共5页
目的·通过定量检测痰标本中mecA和Sa442基因,分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染状态以及临床意义。方法·痰标本经裂解获取DNA,定量PCR(quantitative PCR,qPCR)绝对定量... 目的·通过定量检测痰标本中mecA和Sa442基因,分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染状态以及临床意义。方法·痰标本经裂解获取DNA,定量PCR(quantitative PCR,qPCR)绝对定量检测mecA和Sa442基因;结合痰标本临床常规培养鉴定结果,分析qPCR定量值的临床意义。结果·筛选1775例合格痰标本,以细菌培养鉴定结果为金标准,qPCR检测的灵敏度为92.19%(59/64),特异度为89.60%(1533/1711),阳性预测值为24.89%(59/237),阴性预测值达到99.67%(1533/1538)。受试者操作特征曲线分析结果显示,mecA定量对数值和C_(T)值判断MRSA培养阳性的曲线下面积分别为0.755和0.770,最佳临界值分别为5.59和27.1,敏感度分别为72.4%和73.0%,特异度分别为70.2%和74.1%。仅Sa442基因定值为阳性时,细菌培养以甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌为主。当mecA定量对数值>5.59或C_(T)值<27.1时,可以预判MRSA培养阳性。结论·痰标本中mecA和Sa442基因的定量结果,可用于早期快速排除MRSA的定植和感染,协助分析不同菌种培养结果的趋势。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 定量pcr MECA sa442 痰标本
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Detection of Mycoplasma synoviae Infection in Broiler Breeder Farms of Morocco Using Serological Assays and Real Time PCR
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作者 Nassik Saadia Aboukhalid Rachid +4 位作者 Azzam Falak Rahmatallah Naoufal Lahlou-Amine Idriss Fassi-FihriOuafaa El Houadfi Mohammed 《Journal of Life Sciences》 2014年第10期815-821,共7页
Mycoplasma synoviae (MS) is an economically important pathogenic agent of chickens, causing air sacculitis and synovitis. The diagnosis and monitoring of M. synoviae infection is usually made using serological assay... Mycoplasma synoviae (MS) is an economically important pathogenic agent of chickens, causing air sacculitis and synovitis. The diagnosis and monitoring of M. synoviae infection is usually made using serological assays, while confirmative diagnosis is made by isolation and identifcation of the organism, because of the cross reaction between M. gallisepticum and M. synoviae. This study was conducted from 2011 to 2013 during which l l broiler breeder flocks were sampled. These farms were located in all regions of morocco, The sampling was conducted as follows: Farms were visited on day one old chicks "day of importation from Europe". 20 to 60 "chicks" were randomly sampled. At the age of 8, 16, 32 and 56 weeks, 60 blood samples and 60 tracheal swabs were collected at each sampling. The serological screening was performed using Rapid Slide Agglutination (RSA) according the OIE protocol and Indirect EL1SA (IDEXX) according the manufacturer's instructions. The molecular diagnosis was performed using a commercial kit of a duplex real time PCR (Life Biotechnology). The results revealed that one day old chicks were negative to MS by RSA and PCR, however they have a variable stock of maternal antibodies (Ig-Y) detected by iELISA. The seroprevalence found by RSA is variable and increase with the age (Sth week: 55%, 16th week: 91%, 32tb and 56th week: 100%), the same profile was traced by PCR (Sth week: 36%, 16th week: 64%, 32th week: 82%, 56th week: 100%), however, all farms were positive by iELISA, from the first day to 56th weeks. These results show that MS infections are very frequent and very widespread among poultry breeder flocks, and showed a perfect agreement between serological tests and Real time PCR starting from 32th week of age. 展开更多
关键词 Mycoplasma synoviae Rapid Slide Agglutination iEL1sa pcr broiler breeders flocks
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金黄色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立 被引量:10
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作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期198-201,共4页
为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方... 为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为7.5 CFU/m L,利用该检测方法对采集的175份样品进行检测,共计检出5份SA阳性样品,与国标法(GB 4789.10—2010)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 sa442基因 实时荧光pcr
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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌8种毒力基因的PCR检测 被引量:9
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作者 谢秀兰 刘溪源 +3 位作者 王建东 范春梅 杨慧君 康晓冬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期47-50,共4页
为研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)主要毒力因子的分布情况,本试验利用PCR对70株临床型乳房炎、55株隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的8种主要毒力基因进行检测。结果显示,nuc、ClfA、TSST-1、PVL、Hla、Hlb、FnBPA和... 为研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)主要毒力因子的分布情况,本试验利用PCR对70株临床型乳房炎、55株隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的8种主要毒力基因进行检测。结果显示,nuc、ClfA、TSST-1、PVL、Hla、Hlb、FnBPA和FnBPB8种毒力基因在临床型乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(70株)、100.0%(70株)、0(0株)、5.7%(4株)、100.0%(70株)、11.4%(8株)、97.1%(68株)和100.0%(70株);在隐性乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(55株)、100.0%(55株)、0(0株)、70.9%(39株)、98.2%(54株)、9.1%(5株)、100.0%(55株)和100.0%(55株)。结果表明,nuc、ClfA、Hla、Hlb和FnBPA5种毒力基因是引起奶牛乳房炎的SA的最主要毒力基因;PVL基因可能是引起隐性乳房炎的重要致病基因。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 毒力基因 pcr
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PCR在猴B病毒与猴病毒8型鉴别中的应用 被引量:2
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作者 蔺会云 田克恭 +3 位作者 遇秀玲 李敬云 鲍作义 吴娜 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第2期119-122,共4页
目的 为了使BV1 47与SA8相区别 ,并进一步分析BV1 47基因结构特点。方法 用PCR方法扩增BV1 47DNA ,并对扩增片段进行克隆测序。结果 该序列与美国BVE2 4 90株部分基因 (UL2 7)相对应位置的核苷酸同源性为 99 54% ,与SA8相对应位置的... 目的 为了使BV1 47与SA8相区别 ,并进一步分析BV1 47基因结构特点。方法 用PCR方法扩增BV1 47DNA ,并对扩增片段进行克隆测序。结果 该序列与美国BVE2 4 90株部分基因 (UL2 7)相对应位置的核苷酸同源性为 99 54% ,与SA8相对应位置的核苷酸同源性为 89 91 %。结论 进一步证明了新分离物为B病毒。 展开更多
关键词 BV sa 核苷酸 鉴别 猴病毒 pcr方法 扩增片段 同源性 分离物 克隆测序
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PCR法检测原料乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因型 被引量:2
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作者 李荔枝 杨欣 胡萍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2012年第9期140-143,共4页
通过建立PCR方法来检测原料乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因型,优化其退火温度并验证了其敏感性、特异性。结果表明此方法在退火温度为58.7℃时扩增效果较为理想;灵敏度为1.357 pg/μL;以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热链球菌、志贺氏菌... 通过建立PCR方法来检测原料乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因型,优化其退火温度并验证了其敏感性、特异性。结果表明此方法在退火温度为58.7℃时扩增效果较为理想;灵敏度为1.357 pg/μL;以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热链球菌、志贺氏菌、沙门氏菌的基因组DNA为模板作为特异性检测对照组并分别进行PCR扩增反应,结果为阴性。同时对采集的乳样进行检测,乳房炎乳样中检测出了金葡菌肠毒素A基因,正常乳中没有检测出金葡菌,初步判断乳房炎是由金葡菌引起的。 展开更多
关键词 pcr SEA 金黄色葡萄球菌 原料乳
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水杨酸诱导的甜瓜DDRT-PCR分析及其基因差异表达片段的分离 被引量:1
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作者 方春媛 陈年来 +2 位作者 任晓燕 张涛 荆世杰 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期90-95,共6页
利用DDRT-PCR技术,比较了1 mmol/L SA诱导第4天与未经SA诱导的甜瓜感白粉病品种卡拉克赛的基因表达差异.共获得差别条带19条,在SA诱导后出现差异带15条,在未诱导的对照中出现差异带4条.对其中的8条差异片段回收、克隆,用EcoRI/HindIII... 利用DDRT-PCR技术,比较了1 mmol/L SA诱导第4天与未经SA诱导的甜瓜感白粉病品种卡拉克赛的基因表达差异.共获得差别条带19条,在SA诱导后出现差异带15条,在未诱导的对照中出现差异带4条.对其中的8条差异片段回收、克隆,用EcoRI/HindIII双酶切和PCR扩增.对其中的cDNA3-4-1测序,在BLAST上比较同源性,发现其与拟南芥热激转录因子hsf8基因具有83%的核苷酸同源性.说明1 mmol/L SA处理的甜瓜叶片在mRNA水平上发生了明显的变化,SA诱导了热激转录因子hsf8基因的大量表达,从而可能影响热激蛋白hsp70的表达,对维持蛋白质结构,稳定胞内环境具有积极作用. 展开更多
关键词 甜瓜 sa MRNA差别显示 hsf8
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定量测定羊关联性恶性卡他热病毒DNA的竞争性PCR方法的建立 被引量:3
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作者 华育平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2002年第9期10-13,共4页
此项研究中建立了用于定量测定羊关联性恶性卡他热 (Sheep- associated malignant catarrhal fever,SA- MCF)病毒 DNA的竞争性聚合酶链反应 (Comppetitive polymerase chain reaction,c PCR)方法。该分析中采用同一引物 ,分别将一固定... 此项研究中建立了用于定量测定羊关联性恶性卡他热 (Sheep- associated malignant catarrhal fever,SA- MCF)病毒 DNA的竞争性聚合酶链反应 (Comppetitive polymerase chain reaction,c PCR)方法。该分析中采用同一引物 ,分别将一固定但未知含量的待测目的 DNA(target DNA)与一系列已知含有不同拷贝数量的竞争性 DNA(com petitive DNA)同时扩增。经4 0次扩增后 ,在 30~ 30 0 0 0 0 DNA拷贝范围内 ,目的 DNA与竞争性 DNA之间其扩增产物具有明显的线性竞争关系 (r=0 .98) 展开更多
关键词 羊关联性恶性卡他热 竞争性pcr 病毒DNA 定量测定 羊疤疹2型病毒
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溃疡病不同抗性杨树SA和JA信号转导相关基因的差异表达分析 被引量:5
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作者 刘振阳 苏衍修 +4 位作者 左涛 常聚普 郭利民 贺伟 王延伟 《中国农学通报》 2015年第14期156-163,共8页
为了探讨抗、感病杨树品种受欧美杨细菌性溃疡病菌(Lonsdalea quercina subsp.Populi)诱导后植物激素相关基因的差异表达规律,为阐明杨树抵抗溃疡病菌的防卫反应机制提供试验依据。筛选了12个SA和JA信号转导的相关基因,利用实时定量PCR... 为了探讨抗、感病杨树品种受欧美杨细菌性溃疡病菌(Lonsdalea quercina subsp.Populi)诱导后植物激素相关基因的差异表达规律,为阐明杨树抵抗溃疡病菌的防卫反应机制提供试验依据。筛选了12个SA和JA信号转导的相关基因,利用实时定量PCR技术分析了抗病树种‘毛白杨’(Populus tomentosa)和感病树种‘中菏1号’(P.deltoids cv.‘Zhonghe 1’)在接种溃疡病菌后不同时间段(1、3、6、9天)各基因的表达动态差异。结果显示,在溃疡病菌胁迫下,基因PR1-1、PR1-2、NPR1-1、NPR1-2、TGA1、TGA2、MYC2-1、MYC2-2在抗病品种中有更高的表达量,尤其是基因PR1-1、MYC2-1、MYC2-2;基因JAZ1、COI1-1、COI1-2在抗、感品种接种溃疡病菌后的前期皆为普遍下调表达,但在抗病品种中表达量更低;基因JAZ2在抗、感品种中的表达量变化不大。该研究初步表明,抗病品种‘毛白杨’对溃疡病的抗性是溃疡病菌诱导了基因PR1-1、PR1-2、NPR1-1、NPR1-2、TGA1、TGA2、MYC2-1、MYC2-2的上调表达以及基因JAZ1、COI1-1、COI1-2的下调表达,开启了SA和JA信号转导通路的结果。 展开更多
关键词 杨树细菌性溃疡病 实时定量pcr sa JA 差异表达分析
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PCR技术在鼠金黄色葡萄球菌检测中的初步研究 被引量:11
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作者 高正琴 邢华 李厚达 《畜牧与兽医》 北大核心 2002年第8期5-7,共3页
根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA... 根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA扩增片段 ,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段 ,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性。将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释 ,测定此PCR体系的敏感性。结果显示 ,该PCR体系能检出 3pg金黄色葡萄球菌DNA ,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需 4h。因此 ,研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法 ,具有快速、可靠、敏感和特异的特点 ,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测 。 展开更多
关键词 pcr技术 金黄色葡萄球菌 检测 实验动物 病原
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TB-SA基因检测在结核病诊断的临床应用研究 被引量:4
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作者 朱帆 赵庆蓉 +2 位作者 罗涛 曹玲 谢益新 《中国防痨杂志》 CAS 2008年第5期424-426,共3页
目的研究结核分枝杆菌特异性基因(Tuberculosis-Specific AntigenTB-SA)在结核病诊断中的应用价值。方法选择2004年4—9月期间在成都市结核病防治院的住院结核病患者371例。其中肺结核307例;肺外结核64例(结核性胸膜炎47例、结核性腹膜... 目的研究结核分枝杆菌特异性基因(Tuberculosis-Specific AntigenTB-SA)在结核病诊断中的应用价值。方法选择2004年4—9月期间在成都市结核病防治院的住院结核病患者371例。其中肺结核307例;肺外结核64例(结核性胸膜炎47例、结核性腹膜炎7例、结核性脑膜炎10例);非结核病的呼吸系统疾病患者61例(肺炎4例、肺癌9例,急性支气管炎7例、慢性支气管炎14例、哮喘10例,COPD12例、肺间质纤维化1例、支气管扩张3例、矽肺1例);同时选择无结核疾患健康志愿者40例,全部选例均知情同意。入选肺结核病例和健康选择痰液、肺外结核病例选择胸腔积液、腹腔积液、脑脊液等标本进行抗酸杆菌浓缩集菌,结核杆菌培养和TB-SA基因扩增(PCR)。结果307例肺结核患者中PCR检测TB-SA阳性259例,敏感性为84.4%(259/307);细菌学培养阳性193例,敏感性62.9%(193/307);痰浓缩集菌镜检阳性95例,敏感性30.9%(95/307)。64例肺外结核患者中,TB-SA阳性35例;敏感性54.7%(35/64);核杆菌培养阳性5例,敏感性7.8%(5/64)。61例非结核呼吸系统病患者中,TB-SA阳性2例,特异性96.7%(59/61)痰涂片无阳性病例。40例健康志愿者,TB-SA及痰涂片均无阳性出现,特异性达100%(40/40)。结论TB-SA基因检测的特异性及敏感性都取得了满意的效果。操作也较为简单。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 基因扩增(pcr) TB-sa基因 结核/诊断
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白菜病程相关蛋白1基因cDNA全长的克隆与分析 被引量:8
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作者 王彦华 侯喜林 申书兴 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期985-988,共4页
以水杨酸处理后的‘苏州青’白菜为材料,通过RT—PCR和RACE技术,获得了白菜病程相关蛋白PR-1基因的cDNA全长序列。该基因与甘蓝型油菜PR-1基因氨基酸序列的同源性为91%,与拟南芥的同源性为78%,与其它植物的同源性为57%~60%。So... 以水杨酸处理后的‘苏州青’白菜为材料,通过RT—PCR和RACE技术,获得了白菜病程相关蛋白PR-1基因的cDNA全长序列。该基因与甘蓝型油菜PR-1基因氨基酸序列的同源性为91%,与拟南芥的同源性为78%,与其它植物的同源性为57%~60%。Southern杂交表明该基因在白菜基因组中的拷贝数至少为2个。半定量RT—PCR分析表明,2mmol/L的水杨酸处理后12h,该基因的表达量达到高峰。 展开更多
关键词 白菜 病程相关蛋白1 水杨酸 RT—pcr
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口蹄疫病毒O/NY00株基因组L片段的克隆及其基因特征 被引量:2
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作者 郑敏 金宁一 +6 位作者 张洪勇 刘棋 韦婷 郭建刚 李华明 尹革芬 鲁会军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期124-130,共7页
采用RT—PCR方法对口蹄疫病毒O/NY00株基因组L片段进行了分子克隆和序列测定。结果表明:获得的O/NY00株基因组L片段长7805nt,其中包括715at的5’非编码区和6999nt的多聚蛋白编码区。将O/NY00株与其它参考毒株进行序列比较,结果显示:O/N... 采用RT—PCR方法对口蹄疫病毒O/NY00株基因组L片段进行了分子克隆和序列测定。结果表明:获得的O/NY00株基因组L片段长7805nt,其中包括715at的5’非编码区和6999nt的多聚蛋白编码区。将O/NY00株与其它参考毒株进行序列比较,结果显示:O/NY00株与O/SKR/2000、O/UKG/3/2001遗传关系最近,而与其它毒株遗传关系较远,属于O型口蹄疫ME-SA拓扑型PanAsia株的成员。与Cathay拓扑型的代表毒株O/TAW/97比较,两者在主要抗原位点1和位点3呈现出明显的以拓扑型为特征的氨基酸差别,提示两拓扑型毒株之间有较高的抗原差异。 展开更多
关键词 毒株 口蹄疫病毒 遗传关系 基因组 非编码区 抗原位点 序列比较 基因特征 RT—pcr方法 sa
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小鼠造血干细胞体外衰老模型的构建及其相关生物学 被引量:4
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作者 周玥 杨斌 +1 位作者 姚欣 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期686-692,共7页
目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过... 目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过氧化氢(t-BHP)100μmol/L诱导Sca-1+HSCs 6h,建立HSCs衰老体外模型。采用造血祖细胞集落培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察衰老HSCs的生物学特点。DNA印迹法(Southern blotting)与TRAP-PCR SYBR Green染色法检测HSCs端粒长度和端粒酶活性。RT-PCR法检测衰老相关基因p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平。结果免疫磁性分选法分离、纯化的Sca-1+HSCs纯度可达(87.33±1.25)%。100μmol/L的t-BHP作用Sca-1+HSCs 6h,其体外培养形成造血祖细胞集落能力,自我更新及多向分化潜能显著低于对照组,处于G1期细胞比例增加,SA-β-gal染色阳性细胞数增加。衰老Sca-1+HSCs的端粒缩短,端粒酶活性下降,p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平明显增高。结论用t-BHP能建立Sca-1+HSCs体外细胞衰老模型,提示p16Ink4a-Rb通路和p19Arf-Mdm2-p53-p21Cip1/Waf1通路在t-BHP诱导Sca-1+HSCs衰老过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 造血干细胞 衰老 体外模型 端粒 端粒酶 衰老相关β-半乳糖苷酶染色 流式细胞术 反转录-聚合酶链反应 小鼠
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征的诊治实例及免疫体会 被引量:2
16
作者 党龙 周绪斌 +2 位作者 万春燕 王俊桦 聂希德 《中国猪业》 2015年第1期59-61,共3页
江西某规模场出现母猪流产,早产,保育,生长猪死亡数量增多。将送检病料进行PCR诊断,结果发现为高致病性猪繁殖与呼吸综合征遥通过紧急接种基因缺失猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗TJM-F92渊天蓝净冤,迅速控制病情。
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 pcr ELI sa 疫苗
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外周血K-ras基因突变和血清唾液酸联合检测在胰腺癌早期诊断中的意义 被引量:1
17
作者 邢立娟 王佳 《黑龙江医药科学》 2010年第5期6-7,共2页
目的:研究外周血K-ras基因突变和血清唾液酸联合检测在胰腺癌早期诊断中的意义。方法:选择术前的36例胰腺癌胰腺良性病变患者,及20例正常人,同时行外周血K-ras基因突变和唾液酸血清水平的检测,利用统计学方法t检验和2χ检验进行数据分... 目的:研究外周血K-ras基因突变和血清唾液酸联合检测在胰腺癌早期诊断中的意义。方法:选择术前的36例胰腺癌胰腺良性病变患者,及20例正常人,同时行外周血K-ras基因突变和唾液酸血清水平的检测,利用统计学方法t检验和2χ检验进行数据分析。结果:胰腺癌中K-ras基因12密码子点突变率为69.4%,较胰腺良性病变的8.3%显著升高(P<0.05),外周血K-ras基因突变和血清唾液酸联合检测诊断胰腺癌的敏感性、特异性,比单独检测均有提高,且胰腺癌组和对照组之间差具有显著性意义(P<0.05)。结论:提示该基因点突变检测对胰腺癌有诊断价值。K-ras基因点突变在某些良性病变中出现(如慢性胰腺炎),这些良性病例突变列为胰腺癌发生的高危因素,对K-ras基因突变阳性者随访,有助于早期胰腺癌的发现。 展开更多
关键词 胰腺癌 K-RAS sa 多聚酶链反应
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荧光PCR高分辨率熔解曲线分析法检测食源性金黄色葡萄球菌 被引量:1
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作者 黄秀丽 章丽 +2 位作者 奉夏平 肖性龙 余以刚 《食品科技》 CAS 北大核心 2014年第3期288-294,共7页
以sa442为靶基因,结合特异性引物,建立了一种快速检测鉴定食品中常见的金黄色葡萄球菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,对该法进行特异性验证,敏感性分析及重复性评价,并实现了其在人工染菌鸡肉样本检测的初步应用。结果表明,... 以sa442为靶基因,结合特异性引物,建立了一种快速检测鉴定食品中常见的金黄色葡萄球菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,对该法进行特异性验证,敏感性分析及重复性评价,并实现了其在人工染菌鸡肉样本检测的初步应用。结果表明,该方法具有较强的特异性,对8株金黄色葡萄球菌目标菌株均产生特异性溶解曲线,Tm值为(77.34±0.287)℃,而沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157等8种肉产品中常见的食源性非目标病原菌均不产生扩增曲线;灵敏度高,该法对阳性重组质粒PMD18-sa442的检测限为2.00×102 copies/mL;重复性强,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为(0.76±0.52)%和(1.34±0.45)%;且该法可初步应用于人工染菌鸡肉样(染菌量5、10、20 cfu/25 g样品匀浆)的检测。所建立的金黄色葡萄球菌HRM real-time PCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性强的特点,能应用于食品样本的检测,为金黄色葡萄球菌的快速检测提供了新的方法。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 sa442基因 高分辨率熔解曲线 检测 荧光pcr
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食品中金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测法 被引量:1
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作者 郭宏 《职业与健康》 CAS 2009年第18期1933-1934,共2页
目的建立一种简单、快速、准确、特异性强的能定量检测金黄色葡萄球菌的方法。方法以金黄色葡萄球菌FomB基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,对金黄色葡萄球菌进行荧光定量检测。结果引物与Taq... 目的建立一种简单、快速、准确、特异性强的能定量检测金黄色葡萄球菌的方法。方法以金黄色葡萄球菌FomB基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,对金黄色葡萄球菌进行荧光定量检测。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子为2.5mmol/L时本底最低,荧光信号最强;该法的灵敏度1.0×103拷贝,能特异区分金色葡萄球菌与其他葡萄球菌。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应能够对金黄色葡萄球菌进行准确快速及定量检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 食物中毒 聚合酶链反应 TAQMAN探针
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白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶基因在急性念珠菌性外阴阴道炎中的表达 被引量:2
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作者 冯静 涂亚庭 +1 位作者 林能兴 冯爱平 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期235-237,共3页
目的了解白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)基因在人类阴道白念珠菌感染时的表达情况。方法收集9例阴道念珠菌检测阴性及20例阴道念珠菌感染者的阴道分泌物,通过用特异引物系列进行RT-PCR反应来评价Sap1 ̄Sap6在人体阴道环境中的表达... 目的了解白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)基因在人类阴道白念珠菌感染时的表达情况。方法收集9例阴道念珠菌检测阴性及20例阴道念珠菌感染者的阴道分泌物,通过用特异引物系列进行RT-PCR反应来评价Sap1 ̄Sap6在人体阴道环境中的表达情况。结果Sap2和Sap5在阴道白念珠菌感染者中是最主要的表达基因;Sap3和Sap4在所有检查者中均被检测到;所有6种Sap基因在某些阴道念珠菌病患者中同时被检出。结论Sap基因可能与阴道念珠菌病的发病机制有关。 展开更多
关键词 念珠菌性外阴阴道炎 蛋白酶基因 分泌型天冬氨酸蛋白酶 阴道念珠菌病 急性 白念珠菌感染 阴道白念珠菌 表达情况 阴道分泌物 pcr反应 表达基因 阴道环境 特异引物 发病机制 感染者 p基因 RT- 检查者 检测 sa
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