应用PCR-SSCP银染技术检测HBV基因点突变

为了对乙型肝炎患者HBV基因突变进行大样本大面积筛检,建立简便可靠的检测HBV基因突变的方法。方法:采用单链构象多态性(SSCP)银染技术,检测HBV Pre-C基因突变。结果:在10份HBeAg阳性标本中,有8份PCR阳性,SSCP显示有2份标本有HBV Pre-C基因突变,直接测序证实为非终止密码突变。48份抗-HBe阳性标本中,有12份为PCR阳性,有8份SSCP显示PCR产物单链泳运状态异常,其中4份标本经直接测序证实在1898位发生了G→A变异,出现TAG终止密码突变。结论:PCR-SSCP银染技术检测HBV Pre-C基因点突变有很高的特异性和敏感性,该方法稳定、简便、快速,能基本满足临床大面积大样本筛检的需要。

32例肿瘤组织中p53基因突变的PCR-SSCP、银染色检测

目的 检测肿瘤组织中 p5 3基因的突变率 ,探索其在肿瘤发展过程中的作用 .建立PCR SSCP检测 p5 3突变的常规方法 .方法 检测 32例癌组织和癌旁组织 .用盐沉淀制备样品DNA ,以p5 3基因exon7设计引物 ,用PCR SSCP结合银染色显示结果 .结果 32例肿瘤标本检出阳性 9例 ,阳性率 2 8.1% .4例癌组织和癌旁组织均为阳性 .其中 2 2例胃癌 ,检出 4例阳性 (占 18.2 % ) ,双阳性者 2例 .结论 p5 3基因突变在肿瘤中具有普遍性 ,癌组织和癌旁组织双阳性者 ,与肿瘤的扩散有关 .该检测方法简便易行 ,有助于对 p5 3基因突变的扫描检测 .

大肠癌患者P53基因的突变研究

本研究应用聚合酶链反应——单链构象多态ＰＣＲ—ＳＳＣＰ银染技术对２８例大肠癌患者的癌组织Ｐ５３基因第５，６，７和８外显子进行检测，发现有１５例存在基因突变，突变率为５４％。这一结果表明Ｐ５３基因突变在大肠癌中的普遍存在，并在大肠癌的发生过程中起着重要作用；同时表明本研究所采用的ＰＣＲ—ＳＳＣＰ银染技术具有简便、快速、灵敏和安全的特点，可应用于肿瘤的临床基因诊断。

肺癌亚临床诊断标准的研究

目的 探讨痰液 p53基因变异在早期诊断肺癌方面的价值。方法 选择安医大附院呼吸科 1997年 7月至 1997年 10月住院患者 ,其中肺癌 19例 ,男女之比为 16∶ 3,年龄 4 7岁～ 72岁 ,平均年龄 6 1.32岁 ;对照组 (慢性阻塞性肺疾患及肺结核患者 )排除其他系统肿瘤共 2 2例 ,男女之比为 15∶ 7,年龄 4 7岁～ 74岁 ,平均年龄 5 9.4 3岁 ,晨起后清洁口腔 ,连续三天收集痰液于装有固定液 (2 0 ml)的大试管中 ,进行 P53基因 -聚合酶链反应 -单链构象多态性 (P53- PCR- SSCP)分析。结果 肺癌组 9/ 19例痰液中发现 P53基因变异 (P53gene mutations) ,对照组 2 / 2 2例发现 P53基因变异 ,其中一例距临床确诊肺癌提前 3个月 ;对照组与病例组 P53突变率差别有显著性 (X2 =9.0 2 ,P<0 .0 1)肺癌组中 P53基因变异与性别 (P=0 .0 9)、年龄 (P=0 .35 )、吸烟指数 (每日吸烟支数×吸烟年数 ) (P=0 .18)不相关 (以上均为 Fisher确切概率法 )。结论 痰 P53基因检测方法简便、快速 ,经济 ,无创伤性 ,因此 P53基因变异可作为一个有意义的基因标志用于早期诊断肺癌及高危人群筛检。