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DNA体外扩增技术——聚合酶链式反应(PCR) 被引量:7
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作者 李玥莹 《沈阳师范学院学报(自然科学版)》 2000年第4期40-47,共8页
PCR(PolymeraseChainReaction)译为聚合酶链式反应 ,是近年来发展起来的一种DNA体外扩增技术 .具有快速 ,简便和特异性强的优点 ,在分子生物学研究方面的应用具有广阔的前景 .本文简要介绍了PCR技术的原理 。
关键词 聚合酶链式反应 DNA 体外扩增
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PCR——四步两段扩增法分离人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因 被引量:2
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作者 刘飞鹏 吴雄化 +3 位作者 云涌 周天鸿 朱嘉明 李月琴 《生物工程进展》 CAS CSCD 1997年第1期52-55,共4页
引物是决定 PCR 结果的关键。本实验中,引物Ⅰ、Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5’端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列。所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对。采用标准的 PCR 方法时不能产生理想结果。经采用 PCR——四步两段扩增法... 引物是决定 PCR 结果的关键。本实验中,引物Ⅰ、Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5’端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列。所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对。采用标准的 PCR 方法时不能产生理想结果。经采用 PCR——四步两段扩增法从人胎盘cDNA 文库中分离得到—484bp 的 DNA 片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该 DNA 片段为 hbFGF 基因。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞 生长因子 基因 四步两段扩增法
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RT-PCR法检测神经源性分化因子mRNA在大鼠脑发育过程中的表达 被引量:2
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作者 郭玮 刘晓艳 +3 位作者 柯荔宁 李玉宇 林凌 徐剑文 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期26-30,共5页
目的观察大鼠不同发育时期脑内神经源性分化因子(NeuroD)mRNA表达量的变化,探讨其对神经细胞的分化和成熟发挥的作用。方法提取不同发育阶段大鼠不同脑组织中的mRNA,RT-PCR法反转录扩增NeuroD和β-actin,利用凝胶成像系统检测其相对表... 目的观察大鼠不同发育时期脑内神经源性分化因子(NeuroD)mRNA表达量的变化,探讨其对神经细胞的分化和成熟发挥的作用。方法提取不同发育阶段大鼠不同脑组织中的mRNA,RT-PCR法反转录扩增NeuroD和β-actin,利用凝胶成像系统检测其相对表达量。结果 NeuroD在受孕7.5d(E7.5)时出现表达,在E10.5和E21.5时分别达到两次高峰,平均吸光度值为20437.88±598.28和14482.23±1134.49,表达水平显著高于其他各组(P<0.01),NeuroD/β-actin比值在E12.5、E18.5和E21.5分别为1.59±0.09、1.61±0.07和1.70±0.11,显著高于其他时间段(P<0.01)。结论在大鼠脑发育过程中,NeuroD mRNA的表达呈明显时间特异性,在E10.5左右大鼠各原始脑泡的形成过程中,NeuroD mRNA明显增高;在胚胎发育的晚期,脑组织形态进一步完善和成熟的过程中NeuroD达到第二次表达高峰,与鼠脑的发育过程相符。推测NeuroD对鼠脑的早期神经细胞分化以及晚期细胞的成熟均起一定作用。 展开更多
关键词 神经源性分化因子 碱性螺旋-环-螺旋 神经发育 神经分化 反转录-聚合酶链反应 大鼠
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猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:3
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作者 王飞飞 刘珂 +8 位作者 郇贝丽 魏建超 邵东华 李蓓蓓 邱亚峰 石元元 钱莺娟 马志永 JUNG Yong-Sam 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第3期28-33,共6页
根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过... 根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性。结果显示标准曲线线性关系R2>0.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%。使用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异。本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段。 展开更多
关键词 促血小板碱性蛋白 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量pcr
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Use of species-specific PCR for the identification of 10 sea cucumber species 被引量:3
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作者 文菁 曾玲 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2014年第6期1257-1263,共7页
We developed a species-specific PCR method to identify species among dehydrated products of 10 sea cucumber species.Ten reverse species-specific primers designed from the 16 S rRNA gene,in combination with one forward... We developed a species-specific PCR method to identify species among dehydrated products of 10 sea cucumber species.Ten reverse species-specific primers designed from the 16 S rRNA gene,in combination with one forward universal primer,generated PCR fragments of ca.270 bp length for each species.The specificity of the PCR assay was tested with DNA of samples of 21 sea cucumber species.Amplification was observed in specific species only.The species-specific PCR method we developed was successfully applied to authenticate species of commercial products of dehydrated sea cucumber,and was proven to be a useful,rapid,and low-cost technique to identify the origin of the sea cucumber product. 展开更多
关键词 物种特异性 pcr 海参 识别 通用引物 基因设计 RRNA 产品种类
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针刺干预缺血性脑卒中大鼠脑内髓鞘碱性蛋白基因的表达 被引量:4
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作者 何宣霖 尉艳霞 +2 位作者 王若菡 段建刚 刘戟 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期152-154,共3页
目的观察急性缺血性脑卒中大鼠脑内髓鞘碱性蛋白(MBP)基因的表达情况,探讨针刺疗法干预急性缺血性脑卒中病理过程的机制。方法采用缺血性脑卒中大鼠模型,应用反转录-聚合酶链反应半定量法,观察比较正常组与缺血性脑卒中对照组、早期针... 目的观察急性缺血性脑卒中大鼠脑内髓鞘碱性蛋白(MBP)基因的表达情况,探讨针刺疗法干预急性缺血性脑卒中病理过程的机制。方法采用缺血性脑卒中大鼠模型,应用反转录-聚合酶链反应半定量法,观察比较正常组与缺血性脑卒中对照组、早期针刺组、晚期针刺组缺血后1、3、5、7d的MBP基因表达的变化。结果对照组MBP基因的表达随时间先减少后增多,早、晚期针刺组MBP基因的表达不断增强,但早期针刺组增强效果更明显。结论针刺对缺血性脑损伤的保护效应可能与促进脑内MBP基因的表达进而促进髓鞘的再生有关。 展开更多
关键词 针刺 缺血性脑卒中 髓鞘碱性蛋白 反转录-聚合链反应
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新鲜和冷冻保存的人羊膜中bFGF mRNA的检测
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作者 柯碧莲 张皙 +3 位作者 许迅 邱孝芝 沈卫英 申庆祥 《眼科新进展》 CAS 2004年第5期358-360,共3页
目的 研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA。方法 从新鲜和保存 1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA ,RT PCR一步法扩增。PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoRI、HindIII双酶切 ,将酶切产物通过T4DN... 目的 研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA。方法 从新鲜和保存 1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA ,RT PCR一步法扩增。PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoRI、HindIII双酶切 ,将酶切产物通过T4DNA连接酶连接 ,重组质粒。将重组质粒导入感受态的DH5α大肠杆菌中 ,筛选阳性菌落抽提质粒后行酶切鉴定 ,选取阳性克隆测序。结果 RT PCR产物电泳 ,可见单一清晰的条带 ,约 4 10bp。重组质粒酶切后见二条带 ,小带约 4 10bp ,与插入片段一致。测序结果表明目的片段与bFGF的序列完全相同。结论 新鲜和冷冻保存的羊膜组织中存在bFGF的mRNA。 展开更多
关键词 羊膜 反转录pcr 碱性成纤维细胞生长因子
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碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的乳兔软骨细胞中p53 mRNA表达的影响 被引量:4
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作者 沈涛 付勤 +1 位作者 傅永慧 杨礼庆 《解剖科学进展》 CAS 2007年第2期151-154,共4页
目的探讨在乳兔关节软骨细胞体外培养过程中,成纤维细胞生长因子(bFGF)对p53 mRNA表达水平的影响及意义。方法原代体外培养乳兔关节软骨细胞并传代,实验组加入10ng/ml的bFGF,光镜下观测各代细胞形态学变化,RT-PCR检测各代细胞中p53基因... 目的探讨在乳兔关节软骨细胞体外培养过程中,成纤维细胞生长因子(bFGF)对p53 mRNA表达水平的影响及意义。方法原代体外培养乳兔关节软骨细胞并传代,实验组加入10ng/ml的bFGF,光镜下观测各代细胞形态学变化,RT-PCR检测各代细胞中p53基因在mRNA水平上的表达。结果光镜观察体外培养的软骨细胞,对照组第4代培养细胞始出现凋亡细胞,bFGF组第7代出现少量凋亡细胞;RT-PCR检测bFGF组p53的目的基因指数(p53吸光光度值/β-actin吸光光度值)明显低于对照组(P<0.05)。结论在体外培养的兔关节软骨细胞中bFGF下调p53基因mRNA水平表达。 展开更多
关键词 凋亡 碱性成纤维细胞生长因子 逆转录多聚酶链反应 软骨细胞
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bFGF在口腔黏膜下纤维性变组织中的表达研究 被引量:2
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作者 蒋校文 翦新春 +3 位作者 胡延佳 孙国良 李芬芳 彭海燕 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第6期570-573,共4页
目的:检测碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在正常颊黏膜(normal buccalmucosa,NBM)、口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)上皮组织中的表达,探讨bFGF在OSF发生发展中可能发生的作用。方法:收... 目的:检测碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在正常颊黏膜(normal buccalmucosa,NBM)、口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)上皮组织中的表达,探讨bFGF在OSF发生发展中可能发生的作用。方法:收集10例NBM、30例颊部OSF上皮组织,利用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)、聚合酶链式反应(PCR)和Western Blotting(WB)的方法研究bFGF在其中的分布和表达情况。结果:IHC提示:bFGF在NBM和OSF上皮组织中均有表达。在正常黏膜中,bFGF主要表达在黏膜下层的成纤维细胞胞浆中。在OSF早期,bFGF主要表达在上皮细胞间隙,基底膜和细胞浆中,发展到中晚期后则逐渐扩大表达,广范分布在细胞核中。bFGF的阳性表达率与其病理级别呈正相关。PCR提示正常黏膜组织中有bFGF mRNA的表达。在OSF组织中,bFGF mRNA随病变的加重而表达增加。WB提示:NBM上皮组织中未探及bFGF蛋白的表达,在OSF标本中bFGF随病变的加重而表达增强。结论:bFGF在OSF的发生发展中起着一定的作用。 展开更多
关键词 口腔黏膜下纤维性变 碱性成纤维细胞生长因子 IHC pcr WB
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桂林西瓜霜对宫颈柱状上皮外移患者碱性成纤维细胞生长因子mRNA的影响 被引量:7
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作者 蒋秋燕 宋金玲 +3 位作者 莫海霞 张琪 李艳林 唐乾利 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期17-19,共3页
目的探讨桂林西瓜霜对宫颈柱状上皮外移修复的分子生物学机制。方法 160例宫颈柱状上皮外移患者,按随机数字表法分为两组,观察组80例用桂林西瓜霜局部喷敷,对照组80例用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)-... 目的探讨桂林西瓜霜对宫颈柱状上皮外移修复的分子生物学机制。方法 160例宫颈柱状上皮外移患者,按随机数字表法分为两组,观察组80例用桂林西瓜霜局部喷敷,对照组80例用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)-胶原蛋白海绵局部贴敷。应用RT-PCR检测两组宫颈组织治疗前后bFGFmRNA表达。结果治疗前,观察组和对照组宫颈柱状上皮外移组织中bFGFmRNA表达分别为0.55±0.10、0.58±0.13,组间比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组表达均显著增加,分别为0.82±0.17、0.78±0.15,与本组治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.01),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论桂林西瓜霜对宫颈柱状上皮外移上皮组织bFGFmRNA表达有增强作用。 展开更多
关键词 桂林西瓜霜 宫颈柱状上皮外移 碱性成纤维细胞生长因子mRNA RT-pcr
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人脑髓鞘碱性蛋白cDNA体外扩增、克隆和鉴定 被引量:3
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作者 陈俊杰 王若菡 +3 位作者 程汉华 陈朴 李昌隆 杨鲁川 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第3期244-247,共4页
采用聚合酶链反应(PCR)从人脑cDNA文库中扩增出600bp的髓鞘碱性蛋白(MBP)cDNA片段,与载体pGEM-3Zf(+)平端连接.重组质粒DNA转化宿主菌JM109,在含X-gal和IPTG的平板上直接筛选阳... 采用聚合酶链反应(PCR)从人脑cDNA文库中扩增出600bp的髓鞘碱性蛋白(MBP)cDNA片段,与载体pGEM-3Zf(+)平端连接.重组质粒DNA转化宿主菌JM109,在含X-gal和IPTG的平板上直接筛选阳性克隆.限制性内切酶分析和成套引物扩增鉴定证明,该克隆含有7个外显子的21.5kD人脑MBP全长编码序列. 展开更多
关键词 聚合酶链反应 髓鞘碱性 蛋白 CDNA
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食管鳞癌组织PTTG和bFGF的表达与临床病理特征的相关性研究 被引量:2
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作者 王洪燕 张海霞 +2 位作者 杨福俊 马海燕 张旭光 《世界中西医结合杂志》 2011年第7期560-564,共5页
目的探讨食管鳞癌组织中垂体瘤转化基因(PTTG)mRNA及其蛋白和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白的表达及相互关系,以及其与肿瘤临床病理指标及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测40例食管癌及相应的40例癌旁组织中PTTG mRNA的表达,同... 目的探讨食管鳞癌组织中垂体瘤转化基因(PTTG)mRNA及其蛋白和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白的表达及相互关系,以及其与肿瘤临床病理指标及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测40例食管癌及相应的40例癌旁组织中PTTG mRNA的表达,同时采用免疫组织化学SP法检测相应标本中PTTG和bFGF蛋白的表达。结果在食管癌组织中PTTG基因呈过度表达,食管癌组织中PTTG mRNA的平均表达水平(0.71±0.08)显著高于相应的癌旁正常组织(0.32±0.06),两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化结果显示,PTTG蛋白在食管癌组织中的表达(34/40)明显高于在癌旁组织中的阳性表达(9/40)(P<0.01)。其阳性率高低,与TNM分期和分化程度有关。食管癌组织中,bFGF蛋白表达阳性、阴性标本中,PTTG mRNA表达水平分别为0.74±0.03和0.59±0.02。结论 PTTG基因和bFGF基因的异常表达可对食管癌的发生和发展起重要作用,它们可能为食管癌的早期诊断和基因治疗提供新的靶点。 展开更多
关键词 垂体瘤转化基因(PTTG) 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) RT-pcr 食管癌
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MOBP基因在注意缺陷多动障碍大鼠前额叶皮层表达的研究
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作者 洪琴 池霞 +4 位作者 陈荣华 郭锡熔 费莉 郭梅 潘晓勤 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1123-1125,1137,I0002,共5页
目的:探讨注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型SHR大鼠前额叶皮层MOBP基因表达情况,分析其在ADHD病理生理学中的意义。方法:应用RT-PCR、免疫组化、电镜技术检测该基因mRNA、蛋白表达情况以及轴突髓鞘形态变化。结果:RT-PCR结果显示SHR大鼠... 目的:探讨注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型SHR大鼠前额叶皮层MOBP基因表达情况,分析其在ADHD病理生理学中的意义。方法:应用RT-PCR、免疫组化、电镜技术检测该基因mRNA、蛋白表达情况以及轴突髓鞘形态变化。结果:RT-PCR结果显示SHR大鼠脑组织中MOBP mRNA表达水平(35.78±6.04)%明显低于正常对照WKY大鼠(69.41±7.43)%(P<0.01);免疫组化结果提示SHR大鼠前额叶皮层髓鞘着色显著变浅、稀疏,着色面积占总面积比例(7.43±3.51)%较对照组WKY(14.39±5.82)%明显减少(P<0.05);电镜观察结果显示,部分SHR大鼠髓鞘放射性结构呈直线性分布。结论:MOBP基因在SHR中的表达下调可能通过参与损害中枢神经系统髓鞘结构和功能,在ADHD病理机制中发挥作用。 展开更多
关键词 注意缺陷多动症 MOBP RT-pcr 电镜
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碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建
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作者 许予明 马兴荣 +4 位作者 宋波 秦洁 唐洲平 赵国强 张苏明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第4期578-581,共4页
目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶... 目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶周围脑组织经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增bFGF基因 ;②将bFGFDNA克隆到pGEM TEasy质粒 ,经菌落PCR和HindⅢ和EcoRI双酶切鉴定 ;③然后将bFGFDNA亚克隆到pEGFP N3质粒 ;通过抗性基因筛选阳性克隆 ,经菌落PCR、酶切和测序鉴定。结果 :菌落PCR、酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与GenBank报道的bFGF基因序列一致。结论 :经RT 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 逆转录聚合酶链反应 荧光真核表达载体
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人碱性成纤维细胞生长因子基因在COS-7细胞中的表达及活性检测 被引量:3
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作者 于凤山 段德义 +3 位作者 陈立南 秦丽华 徐群渊 姜传涛 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第z1期76-80,共4页
目的 获得人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),用于治疗神经系统疾病;克隆添加 Kozak序列的 bFGF cDNA序列,用于真核细胞表达。方法 提取国人脑胶质瘤细胞系 BT325总 RNA,RT-PCR法扩增 bFGF C... 目的 获得人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),用于治疗神经系统疾病;克隆添加 Kozak序列的 bFGF cDNA序列,用于真核细胞表达。方法 提取国人脑胶质瘤细胞系 BT325总 RNA,RT-PCR法扩增 bFGF CDNA片段,重组于 pGEM-3zf(+)载体,测序正确后构建表达载体,转染猴肾成纤维细胞系 COS-7,Western Blot检测表达,收集培养上清用 PC-12进行活性检测。结果RT-PCR扩增到473bp的带有Kozak序列的cDNA片段;成功构建了真核表达载体;在COS-7得到了表达,并有一定的生物活性。结论 由克隆到的bFGF cDNA片段构建的真核表达载体能在COS-7中表达、分泌.并具有生物活性。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) RT-pcr CDNA克隆 Western BLOT
全文增补中
基于比例冲突再分配理论的目标识别应用研究
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作者 穆频 侯明善 孙小倩 《计算机仿真》 CSCD 2008年第6期202-205,共4页
目前证据推理理论算法的改进仍然是热门的方向,其应用也越来越广,因此主要介绍了当前证据推理理论的两种最新的改进思想-最新的DSmT理论以及比例冲突再分配(PCR)方法;归纳总结了证据理论的主要应用及其在应用中的关键问题之一——基本... 目前证据推理理论算法的改进仍然是热门的方向,其应用也越来越广,因此主要介绍了当前证据推理理论的两种最新的改进思想-最新的DSmT理论以及比例冲突再分配(PCR)方法;归纳总结了证据理论的主要应用及其在应用中的关键问题之一——基本置信指派的主要构造方法;最后利用人工神经网络训练数据的方法构造基本置信指派,对比例冲突再分配(PCR5)方法在序列图像目标识别中的应用进行了仿真分析,仿真实验结果表明该算法可以有效地提高序列图像目标识别的准确性。 展开更多
关键词 证据推理 比例冲突再分配 基本置信指派 序列图像
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豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮细胞bFGF表达变化的研究
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作者 陈博宇 王超英 +2 位作者 陈维毅 刘迎庆 郝岚 《国际眼科杂志》 CAS 2015年第11期1857-1861,共5页
目的:研究豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞前部及后极部碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的改变,探索近视的发病机制。方法:两周龄豚鼠30只随机分为A组、... 目的:研究豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞前部及后极部碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的改变,探索近视的发病机制。方法:两周龄豚鼠30只随机分为A组、B组、C组,每组10只,再随机选取5只10眼正常两周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴一-10.00D凹透镜,分别饲养6、15、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用细胞酶消化法培养豚鼠的前部及后极部RPE细胞,取3~6代RPE细胞进行免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western-blot蛋白印迹法检查前部及后极部RPE细胞中b FGF表达变化。结果:b FGF的表达定位于细胞浆和细胞核。免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western-blot蛋白印迹法结果均表明:A、B、C三组实验眼和对照眼前部及后极部RPE细胞均有b FGF的表达,实验组前部及后极部与对照组相应前部及后极部比较,实验组中b FGF的阳性率低于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05);而且,随着诱导时间的推移,实验组的阳性率逐渐降低,差异有统计学意义(P〈0.05),对照组的阳性率不变,差异无统计学意义(P〉0.05);但实验组和对照组各组自身前部及后极部比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:实验组前部及后极部与对照组相应前部及后极部比较,b FGF的表达显著低于对照组。 展开更多
关键词 豚鼠 视网膜色素上皮细胞 碱性成纤维细胞生长因子 免疫细胞化学 实时荧光定量pcr Western-blot蛋白印迹法
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散发性脑炎患者血清及脑脊液髓鞘碱性蛋白测定及临床意义
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作者 方琪 徐培锡 许丽珍 《苏州医学院学报》 1996年第2期226-228,399,共3页
采用髓鞘碱性蛋白(MBP)酶联免疫吸附定量测定方法(ELISA)检测40例散发性脑炎。结果表明:(1)血清及脑脊液MBP含量显著高于正常对照组。(2)腺病毒脑炎MBP含量始终未升高。(3)NVSSE组含量显著高于VSE组。(4)HSE和NVSSE各有其MBP变化规律。... 采用髓鞘碱性蛋白(MBP)酶联免疫吸附定量测定方法(ELISA)检测40例散发性脑炎。结果表明:(1)血清及脑脊液MBP含量显著高于正常对照组。(2)腺病毒脑炎MBP含量始终未升高。(3)NVSSE组含量显著高于VSE组。(4)HSE和NVSSE各有其MBP变化规律。(5)血消与脑脊液的MBP含量并非都是平行变化(r=0.03m,P>0.05)。(6)MBP变化对HSE和NVSSE鉴别有帮助。(7)血清MBP含量动态监测有助于对HSE预后的估计。 展开更多
关键词 散发性 脑炎 单纯疱疹性脑炎 髓鞘碱性蛋白
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N-去硫酸肝素对体外培养人胃癌SGC-7901细胞bFGF表达的影响 被引量:1
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作者 陈明祥 陈金联 +5 位作者 陆金来 洪静 陈维雄 朱金水 陈尼维 耿建国 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第17期1920-1925,共6页
目的:探讨N-去硫酸肝素对体外培养人胃癌SGC-7901细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响.方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞,加入含不同浓度N-去硫酸肝素(0.1、1.0g/L,N-去硫酸肝素组)的RPMI 1640培养液,并设对照(为培养液),每组平... 目的:探讨N-去硫酸肝素对体外培养人胃癌SGC-7901细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响.方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞,加入含不同浓度N-去硫酸肝素(0.1、1.0g/L,N-去硫酸肝素组)的RPMI 1640培养液,并设对照(为培养液),每组平行3个样本.培养12、24h,应用双抗体夹心ABC-ELISA法及实时荧光定量PCR法检测胃癌细胞bFGF的表达.结果:与对照组相比,0.1、1.0g/LN-去硫酸肝素组培养12、24h,bFGF的表达下降均有统计学意义(t=7.502,P=0.002;t=55.416,P=0.000;t=52.221,P=0.000;t=48.080,P=0.000);相同时间下各浓度的N-去硫酸肝素组中bFGFmRNA的表达(CT值)较对照组高.N-去硫酸肝素对胃癌细胞bFGF蛋白及mRNA表达的抑制作用具有剂量及时间依赖性.结论:N-去硫酸肝素可以显著抑制体外培养人胃癌细胞bFGF的表达,且具有时间、剂量依赖性. 展开更多
关键词 N-去硫酸肝素 SGC-7901胃癌细胞 碱性成纤维细胞生长因子 ELISA 实时荧光定量pcr
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Cloning and bioinformatical analysis of the N-terminus of the sonic hedgehog gene
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作者 Yi Zhang Shu Zhao +6 位作者 Weiren Dong Suifen He Haihong Wang Lihua Zhang Yinjuan Tang Jiasong Guo Suiqun Guo 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期258-263,共6页
The sonic hedgehog protein not only plays a key role in early embryonic development, but also has essential effects on the adult nervous system, including neural stem cell proliferation, differentiation migration and ... The sonic hedgehog protein not only plays a key role in early embryonic development, but also has essential effects on the adult nervous system, including neural stem cell proliferation, differentiation migration and neuronal axon guidance. The N-terminal fragment of sonic hedgehog is the key functional element in this process. Therefore, this study aimed to clone and analyze the N-terminal fragment of the sonic hedgehog gene. Total RNA was extracted from the notochord of a Sprague-Dawley rat at embryonic day 9 and the N-terminal fragment of sonic hedgehog was amplified by nested reverse transcription-PCR. The N-terminal fragment of the sonic hedgehog gene was successfully cloned. The secondary and tertiary structures of the N-terminal fragment of the sonic hedgehog protein were predicted using Jpred and Phyre online. 展开更多
关键词 neural regeneration basic research sonic hedgehog protein CLONING nested reversetranscription-pcr secondary structure tertiary structure central nervous system developmentalneurobiology rats grants-supported paper photographs-containing paper neuroregeneration
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