酶连接介导PCR法构建酵母PMT3基因缺失菌株

目的本文运用酶连接介导的PCR法构建酿酒酵母PMT3基因缺失菌株。方法以酿酒酵母基因组DNA为模板,PCR扩增PMT3基因开放阅读框两侧片段,双酶切后,定向克隆于pRS305载体;限制性内切酶MluⅠ线性化基因缺失重组载体(pRS305-pmt3-ko),采用醋酸锂的方法将重组载体转化酵母细胞;经营养缺陷型培养基筛选,PCR法验证阳性克隆酵母菌株。结果基因缺失重组载体测序正确,PMT3基因缺失酵母菌株构建成功。结论利用基因缺失重组载体pRS305-pmt3-ko,成功构建PMT3基因缺失酵母菌株。