单引物预掺入PCR与抗体可变区基因的体外放大

用针对引导序列的５′－引物和针对恒定区的３′－引物，常规ＰＣＲ程序只使所选５株单抗１０个可变区ｃＤＮＡ中的４个得到放大。新设计的程序增设了一个反应时相：９４℃ｌｍｉｎ，３７℃６－８ｍｉｎ，循环１－３次，只加入５′－引物，补充３′－引物后，转入常规ＰＣＲ循环，１０个可变区ｃＤＮＡ均获放大。此程序被命名为＂单引物预掺入ＰＣＲ＂。

一个更加通用的抗体可变区cDNA体外扩增法

在对一组单克隆抗体可变区ｃＤＮＡ进行体外扩增时，为了克服通用可变区引物的局限性，我们在ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ上合成固相ｃＤＮＡ，并采用一种称为“单引物预掺入ＰＣＲ”的新ＰＣＲ程序，即：在只有一侧引物存在的情况下，先让ＰＣＲ反应在低退火延伸温度下运转３个循环；追加另一侧引物后，转入常规ＰＣＲ循环。新方法扩展了“通用引物”的适用范围，并为引物设计和一些其它基因的ＰＣＲ放大提供了思路。